Mikroby wkłady 17.10.11
Listeria
Typ: firmnicutes
Klasa: bacilli
Rząd: Bacillalles
R: Listeriaceae
Rodzina: Listeria
Gatunki:L. monocygenes
L.Ivamovi
Welshimeri
Innocua
Seeligeri
Grayi i Imurrayi - grupa 2
Sekw podj. 16S rRNA
Cechy morfologiczne:
Gram dodatnia, pałeczka, tlenowe, bzglednie beztlenowe, 0,5 - 2 mikrometrów, nie wytwarza przetrwalników, nie wytwarza otoczek, ma rzęski, nie jest kwasooporna.
Ruch - 25-28 stopni zaktywowany, w 37 stopniach brak ekspresji flagelliny, przez co hamowanie ruchu,
Cechy hodowlane:
Listeria rośnie na agarze zwykłym, tworzy kolonie wielkości do 2 milimetrów, gładkie, w pierwszym dniu po 24h przeświecające, poźniej robią się szare i wielkość ich pod mikroskopem jest 2 mikrom- to forma S; w formie M - bardziej płaskie, szare, brzeg poszarpany, pod mikroskopem do 16 mikrometrów tworzą nitki.
W pierwszym pasazu podłoże wzbogacone z dodatkiem 10 % CO2. Rośnie w temp od 1 do 45 stopni ale optimum jest 30-37 stopni. Jest wytrzymala na pH (od 4,5 do 9,0; optimum 7,0), przy stężeniu soli do 10 %.
Najlepszym podłożem wzbogaconym jest agar sojowy z tryptozą. Na bulionie LB. Hemolityczne z terunem potasu? Które hamują inne pałeczki
2 podłoża selektywne - ALOA - agar listeria, na tym podłożu listeria monocytogenes tworzy kolonie z charakterystyczna obwódka, inne pałeczki nie mają obwódki; Rapid L. Monocytogenes - podłoże gdzie wykorzystuje się fakt wytwarzania przez listerie. Fosfatazy C, listeria jest zielona, kolonia niebieska z żółtą obwódką, inne listeria tworzą kolonie białą.
Hemoliza alfa, później monocytogenes i seeligiri dają wąską beta, ivamovi - szeroka alfa i dalej tworzy niepełną beta z niezhemolizowanymi krwinkami na obwodzie.
Identyfikacja - test CAMP wykoprzystuje się podłożę Edwardsa/TKT - krew , eskulinę, octan talu, fiolet krystaliczny, zwiazki zelaza; szeroka strefahemoliza beta
linia staphylococcus aureus - szeroka strefa hemolizy beta, negatywny dla ivanovi, pozytywny dla monocytogenes
linia Rhadacoccus equi - pozytywny dla ivanovi, negatywny dla monocytogenes
BHI - mózgowo-sercowy wyciąg aktywnie wpływa na wzrost listerium
Chechy biochemiczne
Katalazo dodatnia, oksydazoujemna, hydrolizuję espulinę (edwards) i hipuran, nie hydrolizuje mocznika czy żelatyny, rozklada glukozę, laktoze nie wszystkie szczepy, trehaloze i ramnozę , ksyloże rozklada ivanovi, gryi- mannitol, testy VP i MR pozytywne,
Czynniki wirulencji
Jest wewnatrzkomórkowa, trudny dostep przeciwciał i antybiotyków.
LLO - listeriozyna - hemolizyna o masie 60kDa, białko, powoduje tworzenie porów w scianie komórkowej, podobnie jak streptolizyna O i perfringolizyna O,
Internaliny - In1A, In1B, białka błonowe o właściwościach adherencyjnych które ułatwiają wnikanie listeria do komórek makroorganizmu, ponadto
Wytwarza fosfolipazy - PLC - PLCA(linozytol), PLCA (cholina) - rozpuszczanie błon cytoplazmatycznych i ułatwiają przechodzenie listerii z komórki do kom
Tworzy pecherzyk endo... -> rozpuszczenie pęcherzyka -> wchodzi do cytoplazmy -> namnaża się -> bakteria otacza się włókienkami aktyny, które pozniej tworza warkocz i na skuterk działania białek wprawia listerie w ruch i przesuwa jaą do ściany
Przechodzi z kom do kom w pecherzyku endosomalny.
Odpowiedz kom
Org zostaje zmobilizowany do produkcji kom NK i limf T - one powodują produkcje interferon gamma->aktywacja makrofagów-> listeria nie radzi sobie z makrofagami i one niszcza pałeczki
IL-12 produkowana jednocześnie -> stymuluje proliferację TH1 i NK
Th2 - wydzielaja Il4 i 5 które ułątwiaja działąnie odpowiedzi humoralnej
Wystepowanie
Wystepuje wszedzie, gleba, wodda, butwiejące rośliny, kiszonki, mleko, żywność zwłaszcza przetwory mleczne, może tworzyc biofilmy na produktach mlecznych
Coraz częściej jest spotykana - zwiazane z immunosupresją - przeszczepy....
Chorobotwórczość
Łatwo przełamuje bariery jelitowe, atakuje narzady miąższowe, namnaza się i atakuje mózg oraz płody
Diagnostyka
PRzy posocznicy materiał z narządów miaższowych. Poronienia zmienione fragmenty łożyska, macicy, trawieniec
Pprzy formie nerwowej - fragmenty z pnia mózu, rdzenia, szpik,
Badanie bezpośrednie - preparat i barwienie ->grama
Hodowla - hodujemy na podłożach, po wychodowaniu robimy preparat już z hodowli, badanie biochemiczne i próba biologiczna
Tkanka nerwowa - listeria namnaza się ogniskowo dlatego stosuje się technike zwana zimnym wzbogaceniem - homogenizujemy tkankę, przez to mamy większą pulę do badania i przygotowujemy 10 % zawiesienę (bulion LB), wykorzystujemy tutaj wlasciwosc listerii do namnazania w chlodni i trzymamy 12 tygodni, co tydzien wyjmujemy i wysiewamy na agarze z krwia lub na agarze sojowym.
Listeria występują tworząc palisady|||||||||||||
Próba biologiaczna:
polega na tym ze tworzymy homogenizat ze zmienionym ... i 0,5 podajemy mmyszom podskórnie albo dootrzewnowo, myszy padaja po 4-5 dniach
Antona test - wykonujemy z hodowlą bulionową - my się upewniamy że mamy do czyniania z pałeczkami listerii, podajemy do worka.spojówkowego najlepiej śwince morskiej po 24-48h widac zmetnienie, ropny wyciek, duża ilość pałęczek listerii
WłOSKOWIEC
Typ: firmicutes
Klasa: mollicutes
Rz
R: Erysipelothri chaceae
Ro: Erysipelotthrix
E. rhusiopathiae- najszerszy
E. tonnsillarum - mało patogenny, bytuje sobie w migdałkach
E. inopinata - z bulionu warzywnego
MORFOLOGIA
Tlenowe albo wzglednie beztlenowe, pałeczki, o zaokrąglonyc brzegach, nieco dłuższe od listeria dochodza do 2,5 , tworza nici dochodzace do 20, brak przetrwalników, rzesek , otoczek, wytwarzac może siarkowodów,
Właściwości hodowlane
Rosnie na podłożach wzbogaconych nie rośnie na zwykłych, najlepiej na surowicy końskiej, agar z krwia, kolonie sa bardzo drobniutenkie poniżej 0,5 milimetra dla formy S, wypukłe, transparentne, brak zapachu, zazielenienie - hemoliza alfa
Od 15-44 stopni , ph 6,7-9,2 ze wzkazaniem 7,2//7,6 ale lekko zasadowe, NaCl do 8,5% wytrzymają.
W przypadkach ostrych - formy zjadliwe - postać S kolonii co pogłebia pH 7,6/8 i temperatura 30 stopni, na agarze postać S , na bulionie lekkie zmetnienei, pod mikroskopem formy krótkie do 2,5 mikrometra
W przypadkach przewlekłych - postać R szczególnie jezęli chodujemy na podłożu kwaśnym ph<7 i temp 37 stopni, na agarze R, na bulioniem osad ziernusty, w formie warkocza, pod mikroskopem dlugie lancuchy
Może być postać M
Właściwości
Katalazo i oksydazo ujemna, nie hydrolizuje espuliny, nie wytwarza ureazy, słabo fermentuje cukry, VP i MR negatywne, wytwarza H2S zwlaszcza na podłożu TSI - glukozę, sacharoze, laktoze, dwusiarczan sodu, cytrynian żelazowy, czerwien fenolową jako wsaźnik
Czynnik wirulencji..
.... NEuraminidaza- hydrolizuje kwas sialowy, mukopolisacharyd ściany na powierzchni komórek, powoduje zapalenie naczyn, uszkadza je i w formie pokrzywkowej sa zaczerwienieniea
hialuronidaza - ułatwia rozprzestrzenianie się bakterii,
wytwarza kompleksy immunologiczne w mazi stawowej co prowadzi do uszkodzenia stawu.
Wystepowanie
Wydalaja z moczem kałem, nosicielami mogą być świnie i indyki, a np. gołę
Chorobotworczość
Zjadliwe - posocznica, postać pokrzywkowa (romboidalne zaczerwienienia), postać chroniczna - atakuje stawy i wsierdzie
Diagnostyka
Krew, biopsja stawów, wycinki skóry, fragmenty zmienionych narządów, szpik
W prepracie krótkie pałeczki lub w preparacie zjadliwym - długie łańcuchy
Na agarze z krwia lub agarze sojowym, agar z surowica końska , lub na podłożu selektywnym przy duzym zanieczyszczeniu Brilla- szynkiewicza - azydek sodu i fiolet krystaliczny, podłoże zawiera surowice końska i glukozę, 0,1 glukozy jeszcze można przy 0,5 już hamowany jest rozwoj bakterii (bardzo wrażliwy), gram dodatni
Bardzo słąba aktywność biochemiczna - jeżeli robimy cukry woda peptynowa z dodatkiem surowicy konskiej.
Próba biologiczna - homogenizat, podany podskórnie lub podotrzewnowo myszom, po 4-5 dniach padają, można wyizolować czyste bakterie ze śledziony czy nerek,
Test ochronny na myszach - z surowicą (hyperimmunizacje koni) 0,1 jednej grupie myszy i 2 grupie daje się hodowle bulionowa 0,1 podskórnie, bez surowicy zmarła, z surowica przeżyłą