Nr. 5

Mateusz Stoszko

OTRZYMYWANIE PROTOPLASTÓW Z LIŚCI SAŁATY

Przebieg doświadczenia:

+ wycięto z liści sałaty fragmenty (ok. 30) o wymiarach mniej więcej 2 x 2 mm, które przeniesiono do
probówki zawierającej 9.5 ml 13% r-ru sorbitolu
+ probówkę inkubowano w łaźni wodnej w temperaturze 37

o

C przez 5 minut, tak by fragmenty liścia sałaty

wyrównały potencjał osmotyczny z r-rem sorbitolu
+ następnie do probówki dodano 0.5ml r-ru hydrolaz glikozydowych (preparat zawierający pektynazy,
celulazy i inne enzymy trawiące ścianę komórkową komórki roślinnej)
+ probówkę ponownie umieszczono w łaźni wodnej, od czasu do czasu wstrząsano zawartość probówki

+ r-r z probówki przesączono przez gazę, którą przepłukano po tym 2ml 13% r-ru sorbitolu
+ przefiltrowaną zawiesinę przeniesiono do naczynek wirówkowych i odwirowano przy 5000 obrotach na
minutę przez 5 minut
+ nasącz wylano, natomiast peletkę protoplastów, która zebrała się na dnie probówki zawieszono w ok.
0.1ml 21% r-ru sacharozy, który pozwolił uzyskać równowagę osmotyczną
+ przygotowano preparat mikroskopowy z tak otrzymanego r-ru protoplastów z liści sałaty, który
obserwowano pod mikroskopem przy powiększeniu 40x

Obserwacje:

W polu widzenia zaobserwowano kilka protoplastów miały one kształt kulisty, ponieważ zostały

pozbawione ograniczającej błonę komórkową ściany komórkowej, komórki przyjęły kształt sferyczny. We wnętrzu
protoplastów widoczne były organella komórkowe (gł. chloroplasty) „zapchnięte” na obrzeża komórki, co
spowodowała prawdopodobnie wodniczka wypełniającą wiekszą część komórki.