PODSTAWY BIOTECHNOLOGII

NAMNAŻANIE MATERIAŁU POSIEWOWEGO

- CHARAKTERYSTYKA ILOŚCIOWA (2h)

Oznaczanie liczby drobnoustrojów przy użyciu komory Thoma:

Procedura oznaczania komórek w komorze Thoma:

• po ustawieniu oświetlenia w mikroskopie należy znaleźć siatkę komory, najpierw pod

obiektywem o powiększeniu 10 x, a następnie 40 x,

• otrzymaną zawiesinę drożdży wytrząsać przez kilka minut, następnie przenieść szybko

pipetą do komory Thoma,

• obliczyć średnią liczbę komórek w ok. 40 małych kwadracikach, (w sumie należy

policzyć ok. 700 komórek),

• wyliczyć liczbę komórek w 1 cm

3

badanej zawiesiny drożdży.

Liczbę komórek (N) znajdujących się w 1 cm

3

badanej próbki wyznaczyć z następującego

wzoru:

N = 4 x 10

6

x a

śr

x r

gdzie: a

ś

r

– średnia liczba komórek znajdujących się w małym kwadracie,

r – rozcieńczenie badanej próbki.

ZADANIE:
Znając liczbę komórek zawartych w 1 cm

3

materiału zaszczepiennego oraz zakładając, że

liczba komórek drożdży w 1 cm

3

brzeczki fermentującej po zaszczepieniu powinna

zawierać się w przedziale od 10

4

do 10

6

. Wyliczyć potrzebną ilość gęstwy drożdżowej do

zaszczepienia 160 hl brzeczki nastawnej.

NAMNAŻANIE MATERIAŁU POSIEWOWEGO

-

CHARAKTERYSTYKA JAKOŚCIOWA

1.

Określenie żywotności i stanu odżywienia gęstwy drożdżowej

a)

Pobrać kroplę przygotowanej zawiesiny i umieścić na szkiełku

przedmiotowym.

b)

Dodać kroplę roztworu błękitu metylenowego i obserwować komórki drożdży

pod mikroskopem.

c)

Komórki martwe barwią się na niebiesko, żywe są bezbarwne.

d)

Podać procent martwych komórek.

e)

Ocenić stan odżywienia drożdży na podstawie zawartości glikogenu w

komórkach.

f)

Umieścić na szkiełku przedmiotowym kroplę zawiesiny drożdży i dodać płynu

Lugola.

g)

Komórki zawierające glikogen wykazują ciemnobrunatne zabarwienie,

natomiast jasnożółte zabarwienie świadczy o jego braku.

Obserwacje, wyniki i wnioski należy przedstawić w formie sprawozdania w zeszycie

ćwiczeniowym.

Literatura:

1.

Libudzisz Z., Kowal K.: Mikrobiologia techniczna (tom I i II), PŁ, Łódź, 2000.

2.

Praca zbiorowa pod redakcją Grabińskiej – Łoniewskiej A.: Ćwiczenia laboratoryjne z

mikrobiologii ogólnej, Oficyna Wyd. Politechniki Warszawskiej, Warszawa 1999.

3.

Duszkiewicz-Reinhard W., Grzybowski R., Sobczak E.: Teoria i ćwiczenia z

mikrobiologii ogólnej i technicznej, Wydawnictwo SGGW, Warszawa 1993.