Sprawozdanie

Temat: Czynniki warunkujące aktywność enzymów na przykładzie fosfatazy kwaśnej.

Cel:

Wykazanie, na przykładzie fosfatazy kwaśnej, że takie czynniki jak stężenie enzymu, temperatura, stężenie jonów wodorowych (pH) oraz inhibitory wpływają na szybkość reakcji enzymatycznych.

Zasada metody: Enzym poddano działaniu rożnych czynników. W każdej części doświadczenia, poza badanym, wszystkie inne elementy były stałe. Szybkość reakcji obliczone wg wzoru

Obserwacje:

Wpływ stężenia enzymów na szybkość reakcji
Ilość enzymu [ml]	Absorbancja	Szybkość reakcji [μmola p-NPx min-1]
0,25	0,113	0,0271
0,5	0,252	0,0604
0,75	0,378	0,0906
1	0,476	0,1141

Wpływ pH na szybkość reakcji
pH	Absorbancja	Szybkość reakcji [μmola p-NPx min-1]
4,0	0,063	0,0149
5,5	0,324	0,0776
6,5	0,216	0,5179
8,0	0,116	0,0278

Inhibicja aktywności enzymów
	Absorbancja	Szybkość reakcji [μmola p-NPx min-1]		Procent zahamowania reakcji przez inhibitor
brak inhibitora	0,166	0,0398	100%
inhibitor	0,053	0,0127	31,91%
				68,09%

Wpływ temperatury na aktywność enzymów
Temperatura [°C]	Absorbancja	Szybkość reakcji [μmola p-NPx min-1]	Wzrost szybkości reakcji prowadzonej w t=35[°C] w porównaniu z wynikami uzyskanymi w t=25[°C]
4	0,012	0,0028
25	0,053	0,0127
35	0,063	0,0151
			1,19

Badanie termostabilności fosfatazy kwaśnej
Temperatura [°C]	Absorbancja	Szybkość reakcji [μmola p-NPx min^-1]	Aktywność enzymu w procentach przetrzymywanego w temperaturze 45[°C] i 60[°C] w stosunku do aktywności enzymu przetrzymywanego w temperaturze 30[°C]
30	0,121	0,0290	100%
45	0,094	0,0225	77,58%
60	0,084	0,0201	69,31%

Wnioski:

Szybkość reakcji rośnie wraz z ilością enzymu.

Podczas badania zależności szybkości reakcji od pH możemy wskazać że największa aktywność została zaobserwowana przy pH 5,5 po czym zaczęła spadać. Zależność ta wynika z ograniczenia maksymalnej aktywności fosfatazy kwaśnej, która znajduje się w zakresie pH 4,0 do 7,0

Podczas badania wpływu temperatury na aktywność enzymu widzimy stopniowy wzrost aktywności wraz ze wzrostem temperatury.

Obecność inhibitora zmniejsza szybkość reakcji o ponad 68%

W badaniu termostabilności fosfatazy kwaśnej możemy zaobserwować stopniowy spadek aktywności enzymu wraz ze wzrostem temperatury co może być wynikiem stopniowej denaturacji białek enzymatycznych.