21.11.11
Mycoplasma
Typ: Firmicutes; klasa: Mollicutes, rząd: Mycoplasmatales, rodzina: Mycoplasmataceae,
Gatunki: Mycoplasma, Ureaplasma,
Haemobartonella, Eperythrozoon niedawno przeniesione do tej rodziny
Przeżuwacze:
M. mycoides subsp. Mycoides-> zaraza płucna bydła,
M. mycoides subsp Capri-> zaraza płucna kóz
M. bovis-> zapalenie grucz. mlekowego krów
M. bovigenitalium-> drogi płciowe
M. ovinpneumoniae -> zapalenie płuc owiec i kóz
M. agalactiae-> zapalenie grucz. mlekowego owiec i kóz
Świnie:
M. hyopneumoniae -> zapal. płuc
M. hyorhinis-> zapalenie stawów młodych prosiąt
M. hyosynobiae-> zapalenie stawów starszych prosiąt
Ptaki:
M.meleagridis-> ??
M.gallisepticum-> ??
M. synobiae-> zapalenie stawów u ptaków
M.haemocanis = Haemobartonella canis
M. haemofelis = Haemobartonella felis
Mycoplasma (Eperythrozoon) suis
Mycoplasma (Eperythrozoon) ovis
Ureaplasma diversum -> przeżuwacze
Ureaplasma urealyticum-> drogi płciowe u ludzi
Morfologia:
Mycoplasma:
- nie posiada ściany komórkowej!!!!
- G-
-trójwarstwowa błona cytoplazmatyczna na zewnątrz
- nie posiada rzęsek, nie produkuje przetrwalników
- mycoides- posiada polimery galaktanu, które wychodzą na zewnątrz i pełnią rolę otoczki (cz. Wirulencji)
- M. mobile-> u ryb, porusza się nieznacznie w niewytłumaczony sposób
- niektóre mają włókienka-> cytoszkielet
-Niewrażliwe na penicylinę, bo nie mają ściany, ale bardzo wrażliwe na ciśnienie osmotyczne, alkohole, detergenty -> ulegają lizie, nie wolno ich utrwalać alkoholem ani wysoką temperaturą (ewentualnie delikatnie metanolem)
-Barwienie metodą Giemzy albo Romanowskiego
-Bardzo znaczny polimorfizm, od formy ziarenkowatej (0,5-0,8 mikrometra) poprzez gruszkowate do nitkowatej (250 mikrometrów)
- Łatwo je pomylić z formami L bakterii (jeśli hoduje się bakterie z dodatkiem penicyliny, to po 3-5 pasażach ściana ulega destrukcji i zaczynają przypominać Mycoplasmę, trzeba przepasażować przez podłoże bez penicyliny i powraca normalny kształt i ściana)
- Mycoplasma łatwo przechodzą przez filtry, które zatrzymują bakterie o średnicy 0,45 mikrometra
Właściwości hodowlane:
- warunkowo beztlenowe
- w pierwszych pasażach lepiej rosną w warunkach beztlenowych (95% azotu i 5% CO2)
- rosną powoli (kilka dni do 3 tygodni)
- pH 7,5-8
- trzeba dodać steroli!!! Lub kwasów tłuszczowych do podłoża
- pożywki wzbogacone wyciągiem z serc wołowych, ekstraktem zbożowym, pektonami, glukozą, surowicą końską
- kolonie 500-600 mikrometrów, oglądamy pod mikroskopem, są wgłębione, penetrują podłoże, wygląd sadzonego jajka (penetrują w głąb śródbłonka naczyń)
- rosną również na siedmiodniowych zarodkach kurzych przez zakażenie do woreczka żółtkowego
Biochemia:
- fermentują cukry bezgazowo
- większość nie rozkłada laktozy
- na agarze z krwią końską mogą wytwarzać hemolizę alfa
M. septicum (drób) wytwarza hemaglutyninę, która zlepia erytrocyty kurze i indukuje powstawanie przeciwciał hamujących ten odczyn (test diagnostyczny na tej podstawie)
Czynniki wirulencji:
1) adhezyjny np. P 97 -> Mycoplasma dzięki niej przyczepia się do kom,. gospodarza
2) gromadzą cytotoksyczne produkty przemiany materii
3) wytwarzają enzymy uszkadzające komórkę
4) indukują uszkadzające cytokiny
Patogeneza:
Białko adhezyjne wiąże się z kwasem sjalowym, który jest zawarty w oligosacharydach powierzchniowych kom. nabłonka rzęskowego (głównie układ oddechowy). Są przyczepione i bardzo aktywnie wydzielają H2O2, O2- (anionorodnik ponadtlenkowy) -> produkty metabolizmu. Przechodzą do komórek, hamują wytwarzanie dysmutazy ponadtlenkowej i katalazy i w ten sposób uszkadzają komórkę. Wytwarza się odczyn zapalny, wysięk przechodzi do oskrzelików i pęcherzyków płucnych.
Posiadają geny, które powodują, że mogą transportować i metabolizować glicerol. Często powodują apoptozę komórek, odpowiedzialne są za to enzymy kaspazy z grupy proteaz. Wykazują też duże powinowactwo do mezenchymy wyścielającej jamy stawowe, a kompleksy immunologiczne, które się tworzą, uszkadzają stawy (kulawizny).
Zmiany zapalne z naciekiem neutrofili, limfocytów, fibryny-> wysięki zapalne- uszkodzenia tkanek, niektóre działają jak superantygeny i stymulują migrację komórek zapalnych do miejsc zakażenia i uwalniania cytokin.
Diagnoza:
Wymazy i popłuczyny z bł. Śluzowych, śluz z tchawicy, płyny z jam ciała, maź stawowa, nasienie, mleko z dodatkiem ampicyliny, wycinki z płuc.
Badanie bezpośrednie ma małą wartość, bo są bardzo wrażliwe, jak najszybciej trzeba transportować do laboratorium, schłodzone.
Badanie hodowlane- podłoże Edwarda (wyciąg z serc wołowych, wyciąg drożdżowy, surowica końska, penicylina)
2 posiewy- jeden w atmosferze azot + CO2 (beztlenowej), a drugi w tlenowej, w temp 37 st., 7 dni do 3 tygodni czekamy a nawet do miesiąca, oglądamy pod lupą lub mikroskopem
Identyfikacja antygenów:
Metoda przeciwciał fluorescencyjnych, precypitacja w żelu, ELISA, OWD, testy biochemiczne rzadko
Wykrywanie przeciwciał-> test aglutynacji, hamowania hemaglutynacji, ELISA, OWD, lateksowy
Mycoplasma |
Ureaplasma |
Kolonie 500-600 mikrometrów
Brak hydrolizy mocznika
Zasadowe pH 7,5-8
Redukują błękit metylenowy w podłożu
Fermentują argininę
Siarczan manganu w pożywce- kolonie się nie barwią
Wzrost powyżej 7 dni (do 3 tygodni)
Podłoże Edwarda (?)
|
< 100 mikrometrów
Hydrolizuje go i jest potrzebny do wzrostu
Kwaśne 6,5
-
-
Siarczan manganu w pożywce- kolonie wybarwiają się na brunatno (mangan odkłada się na powierzchni
Wzrost poniżej 7 dni
Podłoże Hayflicka (Edwards + mocznik + czerwień fenolowa) |
Haemoplasma
Atakują erytrocyty, przyczepiają się do ich powierzchni w zagłębieniach.
Morfologia:
-nie mają ściany
-kształt ziarniakowaty
-średnica <0.9
- oporne na penicylinę
- nie udaje się namnażać in vitro
- przenoszone przez stawonogi (pchły na przykład)
Diagnostyka:
Rozmazy krwi barwione metodą np. Romanowskiego, pod mikroskopem struktury niebieskie do purpurowych w skupiskach lub pojedynczo, na powierzchni erytrocytów
Przeciwciała można wykryć metodą ELISA, PCR
Objawy-> anemia, gorączka, anoreksja, osłabienie
Krętki- Spirochateaes
Rząd: Spirochaetales
rodzina: Spirochaetaceae
rodzaj: Borrelia, Treponema
Treponema pallium- krętek blady (syfilis/kiła)
Borrelia burgdorferi- borelioza (sensu lato-> gat. Nieokreślony, sensu stricto- gat. określony)
B. recurrentis- gorączka powrotna u ludzi
B. anserina- ptaki
B. theileri- bydło
Rodzina: Brachyspiraceae
Rodzaj: Brachyspira
Gatunek: B. hyodysentiviae
Rodzina: Leptospiraceae
Rodzaj: Leptospira
2 podstawowe gatunki: L. biflexa, L. interrogans
Podział według genogatunków -> genogatunki (!) :
L interrogans geng. (subsp.) interrogans
L interrogans geng. (subsp.) borgpetersenii
L interrogans geng. (subsp.) weillii
L interrogans geng. (subsp.) inadai
L interrogans geng. (subsp.) kirscheri
Jest to podział według homologii DNA, razem jest ponad 20 genogatunków.
Podział serologiczny ( według różnic w budowie antygenowej nawet tego samego gatunku izolowanego od różnych zwierząt -> serotypy, jest ich ponad 200, są zebrane w serogrupy):
Np. Pomona, Canicola, Icterohaemorrhagiae, Tarassovi, Hardjo
Morfologia:
-budowa spiralna
-środek komórki wypełnia cylinder cytoplazmatyczny, na zewnątrz jego jest peptydoglikan, potem błona zewnętrzna, a pomiędzy nimi w środku periplazma, w periplazmie jest wić (włókienko osiowe), na biegunie są dyski przyczepu, włókna przymocowane są z jednej strony lub z obu, oplatają cylinder ale nie wychodzą poza obręb błony zewn.
Leptospira |
Brachyspira |
Borrelia |
Liczne spirale
Długość od kilku do 20 mikrometrów
Grubość 0,1-0,2 mikrometry
Włókna osiowe -> 2
Dyski przyczepu-> 2 przyczepy na biegunach
Bieguny: haczykowato zakrzywione
Tlenowe
Oglądamy w ciemnym polu
Barwienie: Giemza, Romanowski , ??
Impregnacja solami srebra
Ruch postępowy, obrotowy, wokół osi i falujący |
6-14, amplituda 1 mikrom
Długość od kilku do 20 mikrometrów
Grubość 0,5 mikrometra
6-10
1
Ostro zakończone
Raczej beztlenowe
Mogą Barwić się fuksyną karbolową lub ??
Impregnacja solami srebra
Ruch postępowy, obrotowy, wokół osi i falujący |
4-8 spirali, amplituda 3 mikr
Długość od kilku do 20 mikrometrów
Grubość 0,5 mikrometra
15-20
2
zwężone
mikroaerofilne
Mogą Barwić się fuksyną karbolową lub ??
Impregnacja solami srebra
Ruch postępowy, obrotowy, wokół osi i falujący |
Włókna osiowe-> kilkanaście nanometrów, zbudowane z kory i osłonki zewnętrznej
Zewn.-> błona z białek, lipidów, lipoproteid, LPSu
Białej jest 10 do 100 x mniej niż u E.coli, lipidów więcej
Leptospira:
-Wzbogacone podłoża, przy 1wszej izolacji 37 stopni C, przy kolejnych 30, saprofityczne od 15 st.C
- pH 7,2- 7,6, środ. Alkaliczne lepiej tolerują
- Rosną wolno (1-2 tyg.)
- podłoże płynne, nie tworzy zmętnienia ani osadu, tylko opalizuje
Biochemia:
Aktywność słaba
- nie rozkłada cukrów
- wytwarza katalazę, oksydazę, lipazę, hemolizynę
Czynniki wirulencji:
1) hemolizyny (sfingomielinaza najbardziej aktywna-> uszkadza naczynia)
2) enzymy cytotoksyczne, bardzo często apoptoza kom
Patogeneza:
Przez nieuszkodzone bł. Śluzowe i otarcia na skórze dostają się do krwiobiegu, atakują kom. wątroby, wzrasta poziom transaminaz (enzymy wątrobowe). Mogą atakować nerki. Po 7-10 dniach pojawiają się przeciwciała- mogą neutralizować krążący zarazek, ale zarazki dochodzą do takich miejsc (kanaliki nerkowe, oko, mózg, macica), gdzie dostęp przeciwciał jest utrudniony i tam czekać na lepsze warunki do ataku.
Diagnostyka:
Krew w okresie bakteriemii, płyn mózg-rdzeniowy, w przypadku poronień zawartość żołądka płodu, nerki płodu, skrawki łożyska i macicy; mocz, surowicę do badań serologicznych. Materiał musi być jak najszybciej dostarczony do lab., płyny wirujemy. Komórki w moczu natychmiast ulegają dezintegracji, wiec po pobraniu możemy do niego dodać 10% formaliny- wprawdzie to zabije bakterie, ale jeszcze przez parę dni zachowają kształt. Narządy homogenizujemy i sporządzamy 10% zawiesinę. Nerki tniemy kriostatem na cienkie płaty i metodą przeciwciał fluorescencyjnych szukamy przeciwciał.
Badanie bezpośrednie:
Oglądanie w ciemnym polu
Podłoża: Korthofa, Fletchera, Stewarta (wszystkie są płynne)- fosforany, węglany, chlorki, surowica królicza, hemoglobina z erytrocytów owcy, albumina bydlęca, tiamina
Tween (??)- obniża napięcie powierzchniowe
Hodowla w war. Tlenowych (1wsze pasaże w 37 st. C) 37-30 st. C , 3-7 tyg, w każdym tygodniu pobieramy kroplę i sprawdzamy w ciemnym polu na obecność bakterii
Badania serologiczne:
Odczyn aglutynacji mikroskopowej (chyba) -> MAT. Przygotowujemy kolejne rozcieńczenia surowicy. Kroplę każdego dajemy na szkiełko + kropla hodowli, 2 godziny inkubujemy w komorze wilgotnej i oglądamy każde rozcieńczenie pod mikroskopem. Bakterie zlepiają się jednym biegunem tworząc pomarańczową kulę, końce wystające poza drgają.
Miano 50% aglutynowanych-> miano graniczne
200 i powyżej-> dodatnie
Brachyspira:
Barwi się barwieniem prostym
Patogeneza:
Czynniki wirulencji:
1) hemolizyny kodowane przez 3 geny
2) LPS
3) białka uszkadzające komórkę
Atakuje przewód pokarmowy świń, głównie okrężnicę bakterie zasiedlają krypty śluzówki, penetrują do enterocytów oraz komórek kubkowych, mogą atakować śluzówkę jelita grubego-> silna biegunka z domieszka krwi, śluzu, włóknika
Fusobacterium, Bacteroides, Campylobacter _> ich współpraca jest niezbędna dla Brachyspiry (zasiedlają normalnie przewód pokarmowy zdrowych zwierząt)
Diagnoza:
Kał, wymazy z odbytu, treść okrężnicy; materiał zawieszamy w płynie fizjol. W stosunku 1:10 i wirujemy, supernatant przesączamy (najpierw przez pory 1 mikrometr a potem coraz mniejsze i kończymy na 0,45 mikrom.).
W bezpośrednim badaniu możemy rozmazy zabarwic fuksyną fenolową lub błękitem wiktorii. Jeżeli są barwione- to oglądamy w mikroskopie optycznym, jeżeli nie, to w ciemnym polu.
Hodowla:
Na agarze tryptozowo- sojowym z wyciągiem sercowo- mózgowym z krwią lub surowicą bydlęcą, L- cysteiną (powoduje spadek potencjału oksydoredukcyjnego), antybiotyki np. wankomycyna do hamowania wzrostu innych bakterii
Inkubacja w beztlenowych warunkach w 90% wodoru i 10 % CO2, w temp. 42 st. C, do tygodnia czasu. Rosną w postaci śluzowatego nalotu z silną strefą hemolizy beta.
Przeciwciała wykrywamy testem MAT, PCR