ĆWICZENIE 2: Techniki posiewów

1. Wylewanie płytek i skosów agarowych.

Materiały: agar odżywczy w kolbkach, jałowe szalki Petriego, probówki i pipety

1. Przygotowanie skosu mikrobiologicznego (2 na parę):

Do umieszczonych w statywie dwóch probówek odmierzyć (sterylnie!) po 5 ml płynnego agaru odżywczego. Probówki ułożyć na stole skośnie- opierając górną część na pipecie (1ml).

Pozostawić do całkowitego zestalenia agaru.

2. Przygotowanie płytek Petriego z podłożem agarowym ( 2 na parę):

Na dolną część płytki, z zachowaniem sterylności, wylać ok. 20ml płynnego agaru odżywczego (unikać zbytniego napowietrzenia, dno całkowicie przykryte). Płynnym, kolistym ruchem przesunąć płytkę po stole w celu równomiernego rozmieszczenia agaru. W przypadku powstania pęcherzyków gazu, płytkę należy delikatnie przesunąć nad płomieniem palnika.

Pozostawić do zestalenia agaru.

2. Techniki posiewów

Materiały: sterylny agar, bakteryjna hodowla płynna, płytki i skosy agarowe przygotowane w poprzednim ćwiczeniu, płytki z agarem odżywczym ( 4 na parę).

1. Posiew ezą na płytkę.

Pobrać (sterylnie) ezą hodowlę bulionową danego szczepu i rozprowadzić ją na powierzchni płytki agarowej zgodnie z rysunkiem.

I krok
II krok

Ezę należy prowadzić bardzo delikatnie by nie porysować agaru!

2. Posiew na skos

Pobrać analogicznie jak w pkt a hodowlę płynną i rozprowadzić ruchem zygzakowatym po skośnej płaszczyźnie agaru. Pamiętać o zachowaniu sterylnych warunków pracy.

3. Posiew głaszczką

Pobrać jałową pipetą 0,1 ml przygotowanej hodowli płynnej i przenieść na powierzchnię płytki z pożywką agarową. Naniesiony płyn rozprowadzić po powierzchni płytki za pomocą głaszczki szklanej wysterylizowanej uprzednio przez zanurzenie w alkoholu i przepalenie w płomieniu palnika. Przestrzegać zasad sterylnej pracy!

4. Posiew redukcyjny

Pobrać ezą hodowlę płynną danego szczepu bakteryjnego i rozprowadzić na połowie płytki agarowej (rys.1). Przepalić ezę w płomieniu palnika i ostudzić dotykając niezasianej części agaru lub wewnętrznej ścianki płytki. Płytkę przekręcić o 90º i ponownie prowadzić ezę po powierzchni agaru zbierając punktowo materiał bakteryjny z dolnej linii poprzedniego posiewu (rys.2). Ponownie przepalić ezę i po ostudzeniu powtórzyć całą operację prowadząc ezę po ostatniej ćwiartce płytki (rys.3).

Rys.1
rys.2
rys.3

Płytki i skosy inkubować 7 dni w odpowiedniej temperaturze. Płytki inkubować w pozycji odwróconej z uwagi na gromadzące się krople wody.

---