11 zadań, a było tak:
identyczne zadanie pierwsze o tych kolejnych odczynnikach dodawanych podczas izolacji Dna i ich funkcje; uzupełnianka odnoście elektroforezy Page; to zadanie z D600; obliczyć stężenie białka; obliczyć ile pobrać próbki a ile buforu; dlaczego EDTA nie jest inhibitorem trombiny; dlaczego obliczamy ilość płynu pohodowlanego; jak zrobić z diploidalnych kom wegetatywnych haploidalne, w jakich war. dodajemy siarczan amonu, i jak obliczyć ile dodać siarczanu amonu, cała mieszanina ma 200ml i trzeba przygotować r-r odpowiednio rozcieńczonych sub. ; i to z tymi prążkami podczas elektroforezy
1, 5, 6, 7…8
ŚCIĄGAWKA NA DOLE
b-merkap = subst.redukuj.moski 2-Siar w B.
zymol = sferoplastyzacja/trawi ści.kom.
SDS = upłynnia bł.kom/denatur.B
/ nadaje(-) ład.wypadkowy
Oct.pot.= pozbycie się zdenaturow.B.
Etanol = oczyszcza DNA z zanieczyszczeń
Chlorof usuwa Fenol z próbki.
1/Denat…SDS…RNA przyjmuje skomplik. str.III rz.
2/poliakrylamidowy…zagęszcz…
…separ…separ…APS…TEMED…
…glicyna…buf.elektrodowy…denat…
Migracja DNA (czynniki):
1. Masa cząsteczkowa DNA (większe wolniej, bo większy
opór ruchu i trudności w penetrowaniu porów)(różne struktury)
2. Stęż.agarozy (^ to wolniejsza migracja)
3. Napięcie prądu podczas elektroforezy
(powyżej 2K pz max 5V/cm)
4. Temp.rozdziału (obniżona temp.
=wyostrzone prążki, do 4*C)
5. Bromek etydyny (obecność zwalnia V o 15%)
6. Skład i siła jonowa buf.(v|siła jon = V b.wolna)
(^ daje ^temp =roztopienie agarozy/denaturacja)
EDTA – chelator jonów 2-warościo, subst.hamuj
nukleazy; Inhibitor jonów 2-wart.
Trombina NIE jest metaloproteiną, dlatego
NIE potrzebuje do swojej aktywności jonów 2-wart.
Inhibitor Trombiny PMSF
2n (podł.sporul.)kom.diplo.(R!)
w worku sporulacyjnym są 4 x 1n
PCR – etapy: 1.denaturacja by rozpleść
po2ne nici DNA(93-96),
2.Ochłodzenie mieszaniny reakcyjnej
i przyłączanie starterów do matrycy(42-68),
3.Polimeryzacja i wydłużanie nici,
od końca 3’ startera(72)
Składniki mieszaniny reakcyjnej przy
amplifikacji DNA w PCR: bufor z jonami Mg,
polimeraza Taq, deoxyrybonukleotydy(dNTP),
nić matrycowa, komplementarne startery.