Judyta Baczmaga
W-7 Ochrona Środowiska
Nr albumu 206069

MIKROBIOLOGIA - SPRAWOZDANIE Nr 2

Temat 2: Morfologia komórki bakteryjnej. Barwienie złożone.

1. Cel ćwiczenia
   Celem ćwiczenia było poznanie oraz wykonanie barwienia złożonego metodą Grama. Metoda ta umożliwia podział bakterii na dwie grupy ( głównie ze względu na różnicę w budowie ściany komórkowej): gramdodatnie (Gram +), np. ziarniaki, które barwią się na fioletowo i gramujemne (Gram-), np. pałeczki, które z kolei barwią się na czerwono.

2. Część doświadczenia
   
   2.1. Wykonanie barwienie metodą Grama
   Przygotowano preparat. Barwienie wykonano dla wybranych szczepów bakterii należących do gatunku. Sarcina lutea oraz Bacillus cerreu. Było to barwienie pozytywne złożone, ponieważ zastosowano więcej niż jeden barwnik. W tej metodzie użyto fiolet krystaliczny, płyn Lugola, alkohol i fuksynę zasadową . Zatrzymanie fioletu krystalicznego spowodowane jest budową ściany komórkowej. Gotowy preparat obserwowano pod obiektywem z powiększeniem 100x przy użyciu olejku immersyjnego. Wyniki zamieszczono na rysunkach 2.1.1. oraz 2.1.2.

2.2. Wykonanie barwienia metodą przetrwalników metodą Wirtza
Wykonano preparat utrwalony z zawiesiny bakterii z gatunku Bacillus cerreu. Zastosowano dwa barwniki: zieleń malachitową i fuksynę fenylową. Preparat włożono do pojemnika z zielenią i podgrzewano przez 5 minut w stałej temperaturze. Odczekano aż preparat ostygnie. Zmyto barwnik, najpierw pod bieżącą wodą, a następnie destylowaną. Nałożono fuksynę, spłukano wodą destylowaną, osuszono i obserwowano pod imersją z powiększeniem 100x.

1. Wyniki

   1. Wykonanie barwienia metodą Grama.

1.Gram + 2. Gram -

1. Wykonanie barwienia metodą przetrwalników Wirtza

1. Wnioski

Ćwiczenie miało na celu ukazanie dwóch grup komórek: gramdodatnie oraz gramujemne, przy zastosowaniu barwienia złożonego pozytywnego Grama. Obie te grupy zabarwiają się fioletem krystalicznym. Zastosowanie płynu Lugola i alkoholu spowodowało że fiolet przereagował z jodem. Na tym etapie doświadczenia obie grupy były zabarwione na fioletowo. Płukanie preparatu alkoholem wypłukało barwnik. Ze względu na budowę ściany komórkowej (bakterie gramdodatnie mają grubą ścianę komórkową, natomiast gramujemne cienką), w komórkach gramdodatnich nastąpiło pomniejszenie pustej przestrzeni w wielowarstwowych ścianach komórkowych. Po zakończeniu płukania komórki Gram+ były ciemnofioletowe, a Gram- czerwone. Jest to widoczne na wyżej zamieszczonych rysunkach 3.1.1 i 3.1.2. Na pierwszym rysunku widoczne fioletowe gramdodatnie ziarniaki, komórki gramujemne są bezbarwne, niewidoczne. Na drugim rysunku czerwone gramujemne pałeczki. W przypadku barwienia Bacillusa metodą przetrwalników Wirtza można było zaobserwować występowanie komórek wegetatywnych, które zdolne są do rozmnażania się, poruszania, odżywiania, na rysunku 3.2. są to komórki zabarwione na czerwono. Natomiast komórki zabarwione na zielono to tzw. Endospory (przetrwalniki). Mają zdolność przekształcania się w kom. wegetatywne.