ĆWICZENIE II

1.Cel ćwiczenia:

Badanie utleniania tryptofanu wywołanego absorpcją światła przez cząsteczki błękitu metylenowego obecnego w roztworze. Badanie efektu fotodynamicznego.

2. Opis wykonania:

1. Sporządzono dwie próbki - jedną zawierającą 0,3ml tryptofanu (Trp), a drugą 0,03ml błękitu metylenowego (BM).

2. Próbki rozcieńczono wodą destylowaną do objętości 3ml.

3. Dokonano pomiaru absorbancji sporządzonych roztworów względem wody destylowanej, a wyniki zestawiono w Tabeli 2.

4. Przygotowano roztwór mieszaniny tryptofanu i błękitu metylenowego rozcieńczonych wodą destylowaną w takim samym stosunku jak poprzednio, o objętości 30ml

5. Dokonano ponownego pomiaru absorbancji, a wyniki przedstawiono w Tabeli 3.

6. Dla wybranej długości fali po dokonaniu absorbancji, co 3 minuty dokonywano pomiaru, a wyniki zgromadzono w Tabeli 4.

3.Obliczenia i wyniki:

Obliczenia

TABELA 2 i 3

4. Wnioski;

-Zgodnie z teorią tryptofan jako aminokwas aromatyczny, absorbuje promieniowanie UV przy λ = 280nm.

-Błękit metylenowy w wyniku absorpcji promieniowania z zakresu UV-VIS daje trzy charakterystyczne pasma. Zmianę absorbancji błękitu metylenowego najlepiej mierzyć w 240nm ponieważ w tej długości fali nie absorbują białka obecne w roztworze, a w 664nm absorbancja nie ulega zmianie – związek pod wpływem światła nie ulega fotoblaknięciu.

-Światło pochłaniane przez błękit metylenowy jest zdolne do utlenienia tryptofanu, co przejawia się spadkiem absorbancji przez aminokwas.