Postulaty Kocha:

1. Patogen musi wystąpić na badanych (chorych) roślinach.

2. Patogen musi zostać wyizolowany z rośliny i wyhodowany na sztucznym podłożu agarowym i opisany, lub wyodrębniony i wyhodowany na wrażliwej roślinie.

3. Patogen pochodzący z czystej kultury musi zostać użyty do zainokulowania zdrowej rośliny tego samego gatunku, tej samej odmiany oraz musi wywołać objawy chorobowe identyczne do tych stwierdzonych na roślinach pochodzących z pola lub innego stanowiska uprawowego.

4. Patogen musi zostać ponownie wyizolowany z zainokulowanych roślin i wyhodowany w czystej kulturze, a jego cechy musza być identyczne z tymi określonymi w postulacie nr 2.

Objawy chorobowe typowe dla:

1. Grzybów; bardzo różne, trudne do uogólnienia. Obecność „NA” lub „W” chorych tkankach oznak etiologicznych (zarodnikowanie, grzybnie i jego utwory),

2. Bakterie (konieczna jest izolacja i potwierdzenie ich patogeniczności); na liściach i pędach nasiąknięte wodą plamy, więdnięcia, narośle, komórki bakteryjne w młodych tkankach,

3. Wirusy (testy na roślinach wskaźnikowych, testy serologiczne); głównie plamistości liści – mozaiki, chlorozy, marmurkowatość, pasiastość. Karłowatość i deformacje. Silne rozprzestrzenianie się choroby.

Test ELISA:

Etap I. Powlekanie płytek przeciwciałami. Wprowadzamy preparat zawierający przeciwciała uzyskane z surowicy uczulonej na wykrywany wirus. Inkubacja w cieplarce (37°C) przez 4h. Następuje adsorbcja przeciwciał do dna i ścianek studzienki. Płytkę energicznie opróżniamy i przepłukujemy 3x buforem. W studzienkach pozostają przeciwciała.

Etap II. Wprowadzenie i inkubacja płytek. Wprowadzamy indywidualnie do studzienek próbki soku komórkowego badanej rośliny (wkraplamy wg przyjętego schematu). Inkubuje się do rana następnego dnia (4°C). Jeśli w próbce był wirus, zostanie związany przez przeciwciała (reakcja serologiczna). Płuczemy 3x buforem.

Etap III. Inkubacja z koniugatem. Wprowadzamy koniugat z przeciwciałami z Etapu I, ale związanych enzymem (np. alkaliczna fosfataza). Jeśli jest obecny wirus, wiąże się on z nim w czasie 3h inkubacji (37°C). Powstaje podwójna kanapka: PC – W – PC z enzymem. Płuczemy 3x buforem.

Etap IV. Inkubacja z substratem. Wlewamy roztwór substancji, której utlenianie katalizuje enzym użyty do wytworzenia koniugatu (do alkalicznej fosfatazy używamy fosforan p-nitrofenylu). Inkubacja w ciemności, 20°C, 30-60 minut. Dodajemy 50 μl 3-molowego NaOH.

Etap V. Odczytywanie wyników. Wizualnie (żółknięcie substratu w studzienkach z wirusem) lub automatycznie (czytnik odczytuje wartość absorbancji, jest wyposażony w drukarkę).