Zagadnienia obowiązujące na zaliczenie przedmiotu Techniki Laboratoryjne w roku akademickim 2014/2015
Zastosowanie i przykłady białek biologicznie aktywnych
Biochemiczne właściwości białek
- budowa chemiczna (wiązanie peptydowe, aminokwasy)
- struktura białka- I, II, III i IV rzędowa- wiązania stabilizujące te struktury, rodzaj struktur i ich charakterystyka
- fałdowanie białek- uwarunkowania energetyczne, molekularne modele procesu fałdowania, komórkowa maszyneria wspomagająca proces fałdowania
3. Systemy heterologicznej ekspresji białek rekombinowanych
- bakteryjny system pET- zasada funkcjonowania, zalety i ograniczenia, metodyka eksperymentu, charakterystyka szczepów ekspresyjnych, optymalizacja procesy nadekspresjii
- drożdżowy układ Pichia pastoris- ogólna zasada funkcjonowania, selekcja oparta o zjawisko auksotrofii, warunki hodowli i nadekspresjii białka,zalety i wady w stosunku do układu pET.
- bakulowirusowy system oparty o komórki owadzie- ogólna zasada funkcjonowania
4. Metody dezintegracji komórek po nadekspresji i frakcjonowania lizatu komórkowego- wirowanie S-30 i S-100, frakcje białek rozpuszczalnych i nierozpuszczalnych
5. Chromatografia powinowactwa- przykłady i charakterystyka etykiet białkowych, różnice we właściwościach i zastosowaniu etykiety 6xHis i GST, oczyszczanie w warunkach natywnych vs oczyszczanie w warunkach denaturujących
6. Elektroforetyczne techniki separacji białek- ogólna zasada, SDS-PAGE vs Native Page, składniki buforów i ich rola w procesie, metody wizualizacji białek, interpretacja żeli elektroforetycznych
7. Immunodetekcja białek na membranie (western-blotting)- ogólna zasada metody, transfer białek z żelu na membranę, rodzaje przeciwciał, metody znakowania przeciwciał i rodzaje wizualizacji reakcji immunodetekcji
Literatura:
Treści omawiane w trakcie poszczególnych zajęć
„Genomy” Browna
„Krótkie wykłady z biologii molekularnej”
„ Cytobiochemia” prof. Leokadia Kłyszejko-Stefanowicz