02.04.2014 Ciosek Nina

Ferenc Karolina

Kielar Joanna

IMMUNOLOGIA MEDYCZNA

SPRAWOZDANIE NR 1

1. Cel ćwiczenia:

Celem ćwiczenia było poznanie zasad działania cytometru przepływowego na podstawie fenotypowania limfocytów T.

1. Przebieg ćwiczenia:

W celu określenia subpopulacji komórek krwi, określeniu ich wielkości i ziarnistości komórek oraz ich analizy antygenów powierzchniowych pobrałyśmy do probówki krew i dodaliśmy do niej bufor PBS. Probówki zwirowałyśmy, do osadu dodałyśmy odpowiednie kombinacje przeciwciał monoklonalnych specyficznych dla różnych cząsteczek powierzchniowych sprzężonych z odpowiednimi fluorochromami. Kontrolą były komórki nie inkubowane z przeciwciałami i kontrole izotopowe. Po inkubacji w ciemności przepłukałyśmy próbkę buforem PBS w celu odpłukania niezwiązanych przeciwciał. PBMC zawiesiłyśmy w Buforze PBS z dodatkiem formaldehydu i umieściłyśmy w cytometrze przepływowym do analizy.

1. Wyniki

Krew niebarwiona, FSC/SSC:

Rys.1 Histogram krwi niebarwionej. W lewym dolnym rogu występuje subpopulacja limfocytów, która charakteryzuje się niskimi wartościami FSC i SSC.

Krew barwiona, SSC/CD3 (APC):

Rys. 2. 1 Histogram krwi barwionej. W ramce zaznaczona jest subpopulacja limfocytów, która charakteryzuje się niskimi wartościami SSC i wysokią ekspresją markera CD3.

Krew barwiona, SSC/CD4 (PerCP):

Rys.3. Histogram Krwi barwionej, SSC/CD4. W ramce zaznaczona jest populacja limfocytów T pomocniczych, które charakteryzuje ekspresja cząsteczek CD4.

Krew barwiona, SSC/CD8 (PE-A):

Rys.4. Histogram Krwi barwionej, SSC/CD8. W ramce zaznaczona jest populacja limfocytów T cytotoksycznych, które charakteryzuje ekspresja cząsteczek CD8.

Krew barwiona, CD8 (PE-A)/CD4 (PerCP):

s

Rys.5. Histogram Krwi barwionej. Komórki X – limfocyty Tc, komórki Y – tymocyty , Komórki Q- , komórki Z - limfocyty Th

Krew barwiona, CD8 (PE-A)/CD3 (APC):

Rys.6. Histogram Krwi barwionej. Komórki A – limfocyty Th , komórki B– Limfocyty Tc , Komórki C- limfocyty T reg , komórki D -

Statystyka do „Krew barwiona”:

1. Wnioski:

Wykorzystanie cytometru przepływowego pozwala na okreslenie odsetka danej populacji komórek (w zależności od zastosowanych przeciwciał), ocenić fenotyp pojydnczej komórki oraz jej własności strukturalnych. W badanej próbce krwi jak wskazują statystyki z tabelki powyżej 28.2 % stanowią limfocyty T.