Ćwiczenie 1
Drożdże piekarnicze - „uniwersalne” narzędzie biotechnologii.
Zadanie 1.1 Określenie żywotności i stanu odżywienia drożdży piekarniczych.
Materiały: drożdże piekarnicze, płyn Lugola, błękit metylenowy
Żywotność
Zawiesić niewielką ilość drożdży w wodzie destylowanej
Pobrać kroplę tak przygotowanej zawiesiny i umieścić na szkiełku podstawowym i dodać kroplę błękitu metylenowego. Przykryć szkiełkiem nakrywkowym.
Oglądać preparat pod mikroskopem (powiększenie 40x) - komórki martwe barwią się na niebiesko, a żywe pozostają bezbarwne.
Stan odżywienia
Przenieść kroplę drożdży zawieszonych w wodzie na szkiełko podstawowe i zalać płynem Lugola. Przykryć szkiełkiem nakrywkowym.
Oglądać preparat pod mikroskopem (powiększenie 40x) - komórki zawierające glikogen wykazują ciemnobrunatne zabarwienie natomiast jasnożółte zabarwienie komórek świadczy o braku tej substancji zapasowej i tym samym o słabej kondycji badanych mikroorganizmów.
Zadanie 1.2 Mikrokapsułkowanie drożdży piekarniczych w alginianie wapnia.
Materiały: drożdże piekarnicze (porcja 3.75 g), 0.75 bufor MOPS pH 7.8, 4% roztwór alginianu, 1% roztwór CaCl2, 0.8% BaCl2, podłoże stymulujące (10% glukoza, 0,01% ekstrakt drożdżowy)
Procedura immobilizacji:
Porcję drożdży umieścić w 25 ml podłoża stymulującego i inkubować 15 min. w temperaturze 250C na wytrząsarce.
Po upływie tego czasu zawiesinę odwirować - 4000 r.p.m. przez 5 min.
Supernatant odrzucić a komórki zawiesić w 18 ml buforu MOPS.
Uzyskaną zawiesinę zmieszać z 18 ml roztworu alginianu. Przez 5 min. mieszać bagietką (ciągle).
Następnie uzyskaną mieszaninę powoli wkraplać pasterówką do 250 ml roztworu CaCl2. Pozostawić na 10 min.
Utworzoną zawiesinę kuleczek odsączyć wykorzystując lejki Buchnera.
Kuleczki umieścić w 110 ml BaCl2 na 5 min, ponownie odsączyć.
Otrzymane mikrokapsułki przemyć wodą destylowaną i osuszyć na ręczniku papierowym.
Obserwować pod mikroskopem immobilizowane drożdże.
Mikrobiologia przemyslowa