Przykładowe pytania i zagadnienia na egzamin z kultur tk. zwierzęcych 2012/2013 biotechnologia:
Metodyka (krótko, co i dlaczego używamy)- przykładowe pytania z ćwiczeń :
- oznaczanie białka metodą Bradford
- budowa jajnika
- etapy zakładania hodowli z aorty (pamiętać o szalkach pokrytych kolagenozą?? Czy kolagenem)
- etapy zakładania hodowli z komórek nerwowych (pamiętać o szalkach pokrytych poli-ornityną lub poli-lizyną)
Opisać hodowle organotypowe
Jak się pasażuje hodowle neuronów? - odp. Nie pasażuje się.
FBS nie daje się do pożywki bo stymuluje rozwój gleju. Surowicę dodajemy TYLKO na samym początku, aby zablokować trypsynę.
Z jakich części można izolować komórki nerwowe? U dorosłych ssaków odp. Dno trzeciej komory, hipokamp, kora mózgowa.
UWAGA: Należy napisać, że komórki izoluje z opuszki węchowej i hipokampu, a dopiero rok temu odkryto , że także z dna III komory.
Dlaczego pobieramy komórki z płodów o- dp. Neurony u dorosłych nie dzielę się i mają ograniczoną zdolność regeneracji, mózgi płodów zawierają dużą liczbę niedojrzałych jeszcze neuronów; jest tak dużo komórek macierzystych. Duża liczba płodów u samicy - jednorazowo nawet 20 - 30.
- gdy mózg jest duży zakładamy hodowlę z hipokampu (do 21 dnia)
- hodowlę z kory zakładamy do max. 17 dnia
Skład pożywki stosowanej w hodowli neuronów:
Neurobasal - podstawowe medium
- glutaminian - źródło węgla, prekursor dla przekaźnika kw. Glutaminowego
- B27 - hamuje rozwój gleju (cytostatyk)
- antybiotyk - mało, bo neurony są bardzo wrażliwe
Dlaczego komórki nerwowe oczyszcza się bardzo dokładnie z naczyniówki? - odp. Aby uniknąć zanieczyszczenia fibroblastami.