Biochemia 20.10.2009 cwiczenia

Właściwości fizykochemiczne aminokwasow.

Wykrywanie aminokwasow w reakcji z minhydryna.

Właściwości fizykochemiczne aminokwasow.

Aminokwasy wystepuja w roztworze obojetnym w postaci jonow obojnaczych ( amfjonow ) czyli dwu biegunowych czasteczek zawierajacych ladunek dodatni i ujemny. (ksero) w zaleznosci od pH roztworu w ktorym są rozpuszczone aminokwasy obok ich jonow obojniaczych mogą się znajdowac pewne ilosci kationow ( srodowisko kwasne) lub anionow aminokwasowych (srodowisko zasadowe). Obojnacze jony aminokwasu w kwasnym roztworze przylaczaja proton do grupy karboksylowej. Obojnacze jony aminokwasow w srodowisku zasadowym oddaja proton od grupy amoniowej → NH₃⁺ . W okreslonych warunkach pH srodowiska gdy wypadkowa ( suma) wszystkich ladunkow w roztworze jest rowna 0 wtedy aminokwasy osiagaja punkt izoelektryczny pI . W punkcie pI aminokwas nie porusza się w polu elektrycznym. W takim roztworze ilosc jonow obojnaczych ( amfjonow) jest maksymalna ,a ilosc kationow aminokwasowych jest rowna ilosci anionow.

Z wyjatkiem glicyny wszystkie aminokwasy zawieraja 4 rozne podstawniki wokół wegla alfa ( wegiel polaczony z grupa karboksylowa ) . Wegiel ten ( tetraedryczny ) nadaje aminokwasa chatakter związku opytcznie czynny czyli izomerow potycznych → LD .

W bialkach wystepuja tylko L, alfa aminokwasy. A jonizacji ulegaja jedynie grupy w lancuchach bocznych → R, raz koncowa grupa aminowa i karboksylowa, ponieważ pozostale grupy ( aminowe i karboksylowe) są zablokowane wiazaniem peptydowym .CO-NH . Wchodzace w sklad bialek aminokwasy mogą zawierac w lancuchach bocznych nie polarne grupy hydrofobowe lub polarne reszty hydrofilowe. Rozne lancuchy boczne aminokwasow sprawiaja ze zwiazki te wykazuja odmienne właściwości fizyko-chemiczne .

Ze względu na miejsce syntezy aminokwasy dzielimy na

• egzogenne → naleza do niezbednych i dla prawidlowego rozwoju i funkcjonowania organizmu muszą być dostarczone z pozywieniem. Należy do nich : Fenyloalanina, Luecyna, Izoleucyna ,Lizyna, Metionina, Treonina, Tryptofan, Walina.

Oprócz wymienionych aminokwasow bialkowych (20 ) są jeszcze 4 które zadko wystepuja w bialkach. Naleza do nich : poliaminokwasy → desmozyna ,izodesmozyna (wystepuja wylacznie w elastynie) ,hydroksyprolina (wystepuje w kolagenie i bialkach roslinnych) ,hydroksylizyna(wystepuje tylko w kolagenie ).

• Endogenne →

Doswiadczenie 1

Temat : Reakcja z ninhydryna

Zasada metody : jest to reakcja na wszystkie aminokwasy ,alfa aminokwasy utleniaja się tlenem pochodzacym z ninhydryny do iminokwasow. Iminokwasy ulegaja tlenowej deaminacji z odlaczeniem NH₃ i CO₂ w wyniku kondensacji amoniaku z jedna czasteczka ninhydryny zredukowana i jedna czasteczka ninhydryny utleniona powstaje kompleks o barwie fioletowo niebieskiej .Natezenie barwy jest proporcjonalne do ilosci azotu aminowego aminokwasu.

Niektore aminokwasy jak prolina i hydroksyprolina daja z ninhydryna kompleks o barwie zoltej.Grupa aminowa tych aminokwasow nie wystepuje przy weglu alfa .

odczynniki i material :

1. 1% roztwor Glicyny

2. 1% roztwor Cysteiny

3. 1% roztwor fenyloalaniny

4. 1% roztwor Tryptofanu

5. 1% roztwor Proliny

6. surowica

7. 0.5% roztwor zelatyny

8. 2% roztwor bialka jaja kurzego

9. 0,1 % roztwor ninhydryny w acetonie

Wykonanie :

Nr odczynnika \ probki	1	2	3	4	5	6	7	8
									1. 1% roztwor Glicyny	1
									2. 1% roztwor Cysteiny		1
									3. 1% roztwor fenyloalaniny			1
									4. 1% roztwor Tryptofanu				1
									5. 1% roztwor Proliny					1
									6. surowica						1
									7. 0.5% roztwor zelatyny							1
									8. 2% roztwor bialka jaja kurzego								1
									9. 0,1 % roztwor ninhydryny w acetonie	1	1	1	1	1	1	1	1
Wymieszac
									Ogrzewac w lazni wodnej przez 2-3 minuty
Barwa	Niebieski	Fioletowy	Fioletowy	Fioletowy	Zólty	Zólty	Niebieski	Niebieski slabo

Wnioski:

Alfa aminokwasy w reakcji z ninhydryna tworzyly barwne kompleksy niebiesko-fioletowe.

Prolina utworzyla kompleks o barwie zoltej podobnie jak surowica.

---