IMMUNOLOGIA-ÆWICZENIA-PRELEKCJA

Ian Tizard „Introduction vet Immunology”

Serologia-nauka o oddzialywaniu miedzy antygenem i przeciwcialem in vitro ,bardzo swoiste,sluza do identyfikacji antygenu lub wykrywania przeciwcial przy pomocy znanych antygenow.

Odpornosc organizmu-wiarze się z mozliwoscia rozpoznawania roznych substancji.

*swoista (nabyta) -czynna (powstaje przez cale zycie,polega na ciaglym kontakcie z antygenami)

-bierna (otrzymuje się gotowe przeciwciala,lub komorki ukladu immunologicznego np.w zyciu plodowym lub siara)

*nieswoista wlosy,skora,gruczoly i humoralne(bialka,lizozym,aparat dopelniacza),komorkowe->fagocytujace

Antygen-kazda substancja wywolujaca odpowiedz immunologiczna z reguly sa to substancje obce ,ale tez choroby immunosupresyjne.Cechy:

*immunogennosc (odp.swoista na antygen)

*antygennosc (zdolnosc do reakcji z przeciwcialem i komorkami ukladu imminologicznego -komorki cytotoksyczne

Proste -HAPTEN (niepelnowartosciowe)nie maja immunogennosci do czasu polaczenia się z duza czasteczka lub bialku, moze to byc lek ,barwnik ,kazda inna mala

Zlozone-na antygenie sa obszary stymulacyjne do odpowiedzi->determinanta; epitop antygenowy,dzialalnosc przeciwciala jest wypadkowa kazdej determinanty.

Markery-daly podstawy do wyodrebnienia limfocytow T(strasznie rozbudowane) i B(b,jednorodne sa B)Do uruchomienia komorek B i T potrzeba komorek prezentujacych antygeny APC z duzym ukladem regulacyjnym.Komuikacja zachodzi z uzyciem czasteczek powierzchniowych i wysylania bialek-->cytokiny(mono i limfokiny) i chemokin.Antygen przetwarzaja makrofagi (Mθ) i komorki dendrytyczne (DC),to znaczy umieszczaja epitopy na swojej powierzchni .

Wiekszosc antygenow jest garasicozaleznych,czyli rozpoznawalnych przez limfocyty T,a nastepnie pobudzaja limfocyty B do poliferacji.Komorki B to najwiekszee komorki serologiczne ,bo powstaje z nich klon-->komorki plazmatyczne produkujace przeciwciala (AB).W inny sposob niszcza antygeny limfocyty cytotoksyczne. Przeciwciala sa w plynach ustrojowych i na powierzchni blon sluzowych.

Immunoglobuliny IgG we wtornej odpowiedzi immunologicznej(po 1,i kazda nastepna)

IgM w pierwotnej odpowiedzi immunologicznej (od 1 kontaktu)

IgA malo w krwi,duzo w odp.miejscowej(blona sluzowa i odp.na enzymy)

IgE pasozyty i alergie

IgD przyczepione do lim.B jako rec.powierzchniowy

BUDOWA-3 lancuchy polaczone mostkami -s-s- moze zmieniac orientacje w tzw.regionie zawiasowym

Lancuchy ciezkie H maja 5 rodzajow γ (gamma); η(mi) ;α (alfa) ;ε (epsilon)

;δ (delta)

Lancuchy lekkie L maja dwa rodzaje κ (kappa)λ (lambda) .

Podczas kontaktu struktura Y zmienia się na T

Przeciwcialo ma obszary stale constant i zmienne variable.IgM maja 5 igrekow.

Zmienne tworza tzw. paratop do zwiazania z epitopem antygenu.,jest to

mozliwe przez zmiane tzw.hiperzmienna (Fab),aminokwas ma tu najwieksza swobode ruchu ,a kazda czasteczka ma ich 2 lub wiecej.Pod miejscem zawiasowym przylancza się uklad bialek dopelniacza(Fc),przylancza się receptor komorek zernych.

Odczyny serologiczne-opieraja się na swoistosci,w dradycyjnym odczynie serologicznym ->powstaje kompleks ,golym okiem immune complex,sa tez reakcje serologiczne przy pomocy znacznika->enzym,zloto,itp.Wymaga to mikroskopow ,czynnikow ,itp.Proba moze byc jakosciowa lub ilosciowa.

Tradycyjne odczyny serologiczne:

*aglutynacja (zlepianie) sa to takie odczyny,gdzie antygenem sa cale komorki lub sa umieszczone na calych komorkach,wypadaja duze grudki kompleksow z roztworu,trzeba zastosowac elektrolit ,najczesciej roztwor fizjologiczny,

*precypitacja (stracenia)

*neutralizacja (zobojetnienie)

Do kazdej proby stosowanej na przeciwciala ze znanym antygenem musimy miec probke surowicy lub sluz.

Przygotowanie-

krew-------------->z heparyna ;wirowanie-->osocze(plazma)

\__________>skrzep--wirowanie-->surowica-->badania serologiczne

Krew stoi 1 godzine ,cieplarka 37*C,bierzemy igle iniekcyjna i do lodowki i wydziela się surowica

kon, krowa -->10ml;krolik-->0.5ml.Surowice mrozimy w porcjach po 100-200 μl albo od razu na badania

Surowice trzba inaktywowac ,czyli ogrzac do 56*C w ciagu 30 minut i nisczy się dopelniacz,bo laczy się do kompleksow,moze powodowac ich rozpad lub zmienia go na niekorzysc badan

Rodzaje aglutynacji

ilosciowa ustala się poziom przeciwcial (AG)->miano surowicy badanej ,jest to najwieksze rozcieczenie przy ktorym zachowuje się wyrazna aglutynacja ilosciowa.

1.Badamy surowice bydleca na paleczke salmonelli(zabite formalina)

1 to badana (1:10),2(1:20),3(1:40),4(1:80),5(1:160) po 2 ml i K kontrola bez surowicy.

Na aglutynacje czekamy 2-3 godziny,w temp.38*C,lub 18h w temp.pokojowej

Kontrole oznaczmy jako „+” lub „--”,Tutaj jest „--”,czyli kontrola gdzie nie ma orawa zajsc

1 23 4 5 K aglutynacja.

Gdy jest za duzo przeciwcial obklejaja caly antygen i nie ma kompleksu wypadajacego z roztworu,gdy za malo tez nie bo jest za malo aby doszlo do sklejenia

Antygen dodajemy kroplami od 2-8 kropli do zmetnienia,dawka dla 1-5 musi byc stala,jak w kontroli i od niej zaczynamy.Po okresie inkubacji ogladamy kontrole(K),powinna miec jednolita gestosc,a badana z dobrym wynikiem to ta gdzie zmetnienie jest najbardziej zblizone do kontroli ,ilosc rozcieczenia to miano surowicy.

Skala jest od ++++;+++;++(miano);+;--

jakosciowa(proba szkielkowa)stosowana np.w badaniu krwi przed przetoczeniem,identyfikacji bakterii przy pomocy znanych przeciwcial.Antygen bakteryjny jest w otoczce ->antygen K,rzeskach->ant.H ,w bialkach komunikacyjnych(pile) i adhezyjnych(fimbrie)->ant.F;w scianie ->ant.O,Jest tu wynik „+” i „--”

Badamy w dwoch obszarach-->1,r-ur fizjologiczny i badamy antygen lub 2,surowica diagnostyczna.Jesli bakterie maja antygen to sa grudki ,a roztwor fizjologiczny(Rf) jest jednolicie metny.Odczyny hemaglutynacji biernej-znany erytrocyt z antygenem,i szukamy PRZECIWCIAL.Odczyny zahamowanej hemaglutynacji biernej-np.proba ciazowa z hCG,znane przeciwciala je wiarza i nie mocuja się z hCG na erytrocytach (barwne)

ma lacuchy ciezkie H i lancuchy lekkie L

Fc

---