Punkt izoelektryczny - gdy wyst. Taka sama il. + i - dla określonego Ph ładunek wypadkowy cząsteczki =0.
Reakcja biuretowa Piotrowskiego wykrywa wiązania peptydowe - tworzenie kompleksów przez wiązania peptydowe i jony miedziowe.
Wykrywanie: wolne aminokwasy - nichydryna -> nieb-fiol, wolnej grupy aromatycznej - reakcja ksantoproteinowa z HNO3, Grupy hydrosulfidowe (-SH) NaOH -> H2S
Denaturacja - zniszczenie wtórnej struktury białka (rozpuszczalniki, wys. Temp, za niskie, wysokie ST. H+
Wysalanie - siarczan amonowy(odwracalne), - wytrącanie białek z roztworu pod działaniem soli.
Do metod kolorymetrycznych zaliczamy metodę Lowriego i współpr. Ponieważ stężenie odczytuje się z krzywej wzorcowej na podstawie pomiaru w 600-700, fotometr służy do pomiaru absorbancji próbek. Na krzywej wzorcowej jest podana zależność stężenia białka od uzyskanej absorbancji.
Chromatografia podziałowa - metoda rozdzielania składników różnych mieszanin.
Sephadex - żel dekstranowy - zbudowany z łańcuchów α-D glukozy, połączonych mostkami poprzecznymi z epichlorohydryny. Od liczby porów zależy rozdzielczość żelu. Wraz ze wzrostem G wzrasta zdolność rozdzielcza i zdolność do wiązania H2O.
Do zagęszczania wykorzystuje się zdolność pęcznienia żelu. Pochłania on wtedy wodę i substancje o niskiej masie cząsteczkowej. Wsypuje się suchy Sephadex do roztworu i po napęcznieniu oddziela się żel poprzez wirowanie lub filtrowanie.
Peroksydaza należy do klasy oksydoreduktaz. Oznaczanie aktywności peroksydazy: utlenianie pirogalolu do purpurogaliny przy udziale nadtlenku wodoru. Miarą aktywności peroksydazy jest ilość w określonym czasie utworzonej purpurogaliny - fotometrycznie. Próba materiałowa bez dodatku H2O2 w ph 7 t=10 C Składniki: bufor fosforanowy, roztw. Pirogalolu, H2O2, kw siarkowy -> zatrzymuje reakcje, Na2SO3 -> aby rozłożyć resztę H2O2.
Przy oznaczaniu aktywności lipazy pH roztworu jest troche wyższe od optymalnego ponieważ w wyniku uwolnienia kwasów tłuszczowych będzie się obniżać. Szybkość reakcji wzrasta ponieważ zwiększa się stężenie diacyloglicerolu. Reakcje przerywamy dodając etanol, dodajemy fenoloftaleiny aby zaobserwować zmianę odczynu przy miareczkowaniu. Amylaza należy do klasy hydrolaz.
Do wyznaczania stałej Km dla fosfatazy kwaśnej należy do 6 probówek dodać 4-nitrofenylofosforanu 0,1 -1 ml, dolać buforu octanowego i uzupełnić do 4 ml. Kontrolna - 1,5 ml buforu i 2,5 ml wody. Po 5 min dodać enzymu po 10 min dolać węglanu sodowego. Absorbancja przy 420.
Podczas oznaczania kw. Askorbinowego metodą miareczkowania należy przerwać po uzyskaniu jasno różowego koloru ponieważ trwała barwa powstaje po całkowitym utlenieniu kw askorb. W momencie dodania pierwszej kropli nadmiaru barwnika. Utlenia się wk askorbinowy redukuje się 2,6 dichloronitrofenol.