Ćwiczenia (4) 23-10-201
Badanie bakteriologiczne mleka cz. 2
Salmonella spp.
-PN-EN ISO 6579:2003 Mikrobiologia żywności i pasz- horyzontalna metoda wykrywania Salmonella spp.
-PN-EN ISO 6785:2009 mleko i przetwory mleczne- wykrywanie Salmonella spp.
(różnice w porównaniu z metodą horyzontalną)
-Druga pożywka selektywnie namnażająca- podłoże z wodoroselenianem IV sodu i cystyną- 10ml próbki do 100ml pożywki
-Pierwsza pożywka selektywnie różnicująca- podłoże z zielenią brylantową i czerwienią fenolową BGA
-wydłużenie czasu inkubacji pożywek selektywnie namnażających o kolejne 18-24h i ponowny przesiew materiału na podłoża selektywne różnicujące
-w razie konieczności wydłużenie czasu inkubacji podłoża BGA do 48h
Przepisać o wzroście na podłożach salmonelli
BGA
XLD
SS
HEKTOENA
PODŁOŻE Z SIARCZANEM BIZMUTAWYM (MOD. Wilson-blaira)
Profil biochemiczny drobnoustrojów rodzaju Salmonella:
1. fermentacja glukozy z wytworzeniem kwasu (100% szczepów)- zażółcenie słupka na podłożu trójcukrowym z cytrynianem żelaza (TSI)
2.fermentacja glukozy z wytworzeniem gazu (91,9%)- pęcherzyki gazu w słupku lub rozerwanie podłoża TSI
3.wytwarzanie H2S(91,6%)- zaczernienie słupka lub ciemny pierścień na granicy słupka i skosu podłoża TSI
4.brak zdolności fermentacji laktozy i sacharozy (92,2 i 99,5%)- czerwona barwa skosu podłoża TSI
5.dekarboksylacja lizyny(94,6%)- zmiana barwy podłoża na fioletowa-purpurową
6.brak zdolności wytwarzania ureazy(100%) niezmieniona barwa z żółtej na czerwono-fioletową barwa podłoża z mocznikiem wg. Christiansena
7.brak zdolności wytwarzania beta-galaktozydazy(98,5)- niezmieniona (fioletowa) na żółtą barwa podłoża
8.brak zdolności wytwarzania indolu(98,9%) po zakropleniu odczynnika Kovacsa na pożywkę z tryptofanem nie pojawia się fioletowe zabarwienie na granicy faz
9.brak zdolności wytwarzania acetylometylokarbinolu(acetoiny)- niezabarwiona na czerwono górna cześć zawartości probówki w teście voges-proskauera(VP)
Badanie serologiczne drobnoustrojów rodzaju Salmonella odczynem aglutynacji szkiełkowej
1.wykluczenie szczepów zdolnych do autoaglutynacji(zamiast surowicy kropla płynu fizjologicznego)
2.badanie na obecność antygenu somatycznego )
3.badanie na obecność antygenu otoczkowego Vi
4.badanie na obecność antygenu rzęskowego H
Gronkowce koagulazododatnie
Wskaźniki sanitarne żywności:
-liczba bakterii z rodziny Enterobacteriaceae
-liczba pałeczek E.coli
-bakterie z grupy coli
-enterokoki (paciorkowce kałowe)
Enterobacteriaceae
-PN-A-04023:2001 Mikrobiologia żywności- wykrywanie i identyfikacja drobnoustrojów z rodziny Enterobacteriaceae
-PN-ISO 21528-1:2005 Mikrobiologia żywności i pasz- horyzontalna metoda wykrywania i oznaczania liczby Enterobacteriaceae- cześć 1: wykrywanie i oznaczanie liczby metodą NPL z przednamnażaniem
-PN-ISO 21528-2:2005: horyzontalna metoda wykrwiwania i oznaczania liczby enterobacteriace cz.2
-podłoże agarowe z fioletem krystalicznym, czerwienią obojętną, solami żółci i glukozą (VRBG)
-bakterie z rodz. Enterobacteriaceae tworzą na tym podłożu różowe, czerwone bądź purpurowe kolonie, z ew. strefą wytrąconych soli żółci
-potwierdzające testy biochemiczne: oksydazoujemne, glukozododatnie
Escherichia coli
-PN-ISO 16649-1:2004 horyzontalna metoda oznaczania liczby beta-glukuronidazo-dodatnich E.coli
Cz.1 z zastosowaniem membran
-PN-ISO 16649-2:2004
Cz.2
-podłoże agarowe tryptono-żółciowo-glukuronidowe TBX
-E.coli tworzy na tym podłożu w temp 44C typowe niebieskie (niebiesko-zielone) kolonie
Obie części norm są do ogólnego stosowania: zaleca się jednak stosowanie arkusza 1 do żywności zawierającej uszkodzone komórki E.coli ze względu na przewidziany metodyką etap ożywiania komórek bakteryjnych
-naniesienie po 1ml próbki(zawiesiny wyjściowej, kolejnego razcieńczenia dziesięciokrotnego) na celulozowe membrany umieszczone na 2 płytkach ze zmodyfikowanym podłożem agarowym mineralno-glutaminianowym(MMGA) i inkubacja przez 4h w 37C
-przeniesienie membran z MMGA na TBX i inkubacja przez 18-24h w 44C(nie wyższej niż 45C)
W przypadku stosowania arkusza 2 normy:
-posiew wgłębny po 1ml próbki(zawiesiny wyjściowej, kolejnego rozcieńczenia dzsięciokrotnego) na 2 płytki z podłożem TBX i inkubacja przez 18-24h w 44C
-przy podejrzeniu obecności uszkodzonych komórek bak należy wstępnie inkubować posiane podłoża przez 4h w 37C a następnie przez 18-24h w 44C
-zasady doboru płytek do liczenia, wzory, przypadki szczególne
2