SPRAWOZDANIE

Ćwiczenie nr 2 "Mikrobiologiczna analiza jakości wód"

Cel ćwiczenia:

Celem ćwiczenia jest określenie, jakie bakterie występują w badanej próbce wody, ze szczególnym uwzględnieniem bakterii Escherichia coli.

Przebieg ćwiczenia:

Badana woda pochodziła ze stawu hodowlanego.

Aby wykonać posiew, w pierwszej kolejności musieliśmy rozcieńczyć badaną próbkę wody. Użyta przez nas metoda rozcieńczeń polega na przeniesieniu sterylną pipetą 1 cm³ badanego materiału do pierwszej probówki z roztworem soli fizjologicznej. Po wymieszaniu otrzymujemy rozcieńczenie 10^-1. Analogicznie postępowaliśmy, aż do uzyskania rozcieńczenia 10^-5.

Następnie wykonaliśmy posiew wody na podłoże Eijkmana w 6 probówkach. Do 2 probówek odmierzyliśmy pipetą 10 ml nierozcieńczonej wody. Do kolejnych dwóch wlaliśmy po 1 ml badanej wody o rozcieńczeniu 10^-4, i do pozostałych dwóch - rozcieńczenie 10^-5 również po 1 ml.

Dla określenia ogólnej liczebności bakterii psychro- i mezofilnej wykonaliśmy posiew, stosując metodę płytek lanych. W tym celu na 4 płytki przenieśliśmy sterylną pipetą po 1 ml badanej wody o rozcieńczeniu 10^-3. Następnym krokiem, który wykonaliśmy było dodanie ciepłego, lecz nie gorącego agaru odżywczego. Po czym delikatnie go wymieszaliśmy, pozostawiliśmy do zastygnięcia, a następnie odwróciliśmy wieczkiem w dół. Aby oznaczyć liczebność bakterii psychrofilnych, pozostawiliśmy do inkubacji 2 odpowiednio podpisane płytki na 72 godziny w temperaturze 20ºC. Analogicznie postąpiłyśmy w przypadku oznaczania bakterii mezofilnych, pozostawiając je jednak w cieplarce na 24 godziny w 37ºC.

Po tygodniu zebraliśmy wyniki:

Z inkubowanych płytek Petriego odczytałyśmy ilość wyrosłych kolonii bakterii psychro- i mezofilnych.

Oznaczenie	Podłoże hodowlane	Temperatura i czas inkubacji	Liczebność bakterii w 1 cm^3 wody dla rozcieńczenia 10^-3
Ogólna liczba kolonii bakterii psychrofilnych	Agar odżywczy	20ºC 72 godz.	4
Ogólna liczba kolonii bakterii mezofilnych	Agar odżywczy	37ºC 24 godz.	3

W dwóch probówkach, w których znajdowała się nierozcieńczona woda odnotowaliśmy wynik pozytywny. Świadczy o tym zmiana zabarwienia z zielonego na żółty i pojawienie się gazu w rurkach Durhama. Zmiany takie świadczą o wzroście w pożywce bakterii fermentujących laktozę z wytworzeniem kwasu i gazu.

W przypadku niewielkiej zmiany zabarwienia, obecności niewielkich ilości gazu lub obecności tylko jednego ze wskaźników, przyjmuje się wynik za wątpliwy, wymagający dalszych badań potwierdzających.

Dlatego też, by upewnić się, że badana woda jest zanieczyszczona przez bakterie Escherichia coli, wykonaliśmy badania potwierdzające.

1. Do dwóch probówek z podłożem z zielenią brylantową wlaliśmy po 1ml z probówki, w której odnotowaliśmy wynik dodatni.

2. Wykonaliśmy ezą posiew redukcyjny na podłoże Endo (podłoże różnicujące, służy do wykrywania bakterii z rodzaju coli i innych bakterii jelitowych) oraz na podłoże agarowe.

Płytka z agarem

Płytka z podłożem

Endo

Próbki inkubowaliśmy w temperaturze 37ºC.

W następnym tygodniu odczytaliśmy ostateczne wyniki. Zarówno w próbach z podłożem Endo, jak i zielenią brylantową uzyskaliśmy wynik negatywny.

	10ml	10ml	1ml	1ml	0,1ml	0,1ml	MIANO	INDEKS
Badania wstępne	+/+	+/+	-/-	-/-	-/-	-/-
Badania potwierdzające	-/-	-/-	-/-	-/-	-/-	-/-	>20	<5

Wnioski:

Zadaniem analizy mikrobiologicznej jest określenie jakości wody oraz jej przydatności do spożycia lub wykorzystania rolniczego lub przemysłowego pod względem mikrobiologicznym. Badania pozwalają na wykazanie konieczności stosowania odpowiednich filtrów lub dezynfekcji wody.

Analiza wody metodą posiewu na podłoże Eijkmana w badaniach wstępnych nie pozwala nam jednoznacznie stwierdzić o zanieczyszczeniach fekaliami (wynik próby bez rozcieńczenia był pozytywny), dlatego wykonaliśmy badania potwierdzające, które wykazały brak zanieczyszczeń kałowych. Dzięki temu możemy określić miano coli (>20) i indeks coli (<5). Wyniki ten wskazują na brak jakichkolwiek zanieczyszczeń wody ściekami.

Natomiast metoda płytek lanych umożliwia określenie liczby bakterii mezofilowych (3), które informują nas o możliwym zakażeniu wody bakteriami chorobotwórczymi, i psychrofilnych (4), świadczących o zanieczyszczeniu substancjami organicznymi łatwo ulegającymi rozkładowi. Jednak ich mała liczba nie stanowi zagrożenia dla zdrowia ludzi.

Według nas badana woda ze stawu nadaje się do hodowli ryb i nie stwarza zagrożenia bakteriologicznego. Jednak ponieważ jest to woda ze stawu, nie powinna być spożywana przez ludzi, bez wykonania dodatkowych, bardziej specjalistycznych metod analizy sanitarnej wody.

---