Wyklad mkro 14.11
PRĄTKI
Typ i klasa : Actinobacteria
Rząd: Actinomycetales
Rodzina: Mycobacteriaceae
Rodzaj: Mycobacterium
Grupy: 1. MTC/TG (mycobaterium tuberculosis compleks/ tuberculosis grupi) - bardziej zjadliwe: M.tuberculosis, M.bovis(przeżuwacze), M.bovisBCG(szczepionka żywa,może wywołać gruźlice), M.africanum(bydlo w Afryce), M.microti(myszy), M.canetti (u ludzi i zwierząt)
2. MOTT - do tej gr naleza prątki other than tuberculosis; w obrebie tej gr mamy kompleks MAC(mycobacterium avium complecs) - M.avium (gruzlice u ptaków), M.intracellulare (zmiany gruźlicze u ludzi z obniżoną odpornościa)., M.avium subsp. paratuberculosis/ M.jonhnei
3. prątki atypowe podzielowe wg Runyana - prątki fotochromochenne wolnorasnące (powyżej 7 dni), które wytw barwnik żółtopomarańczowy na świetle; prątki scotochromogenne - wolnorosnące, wytw żółtopomarańczowy barwnik na świetle i w ciemności; prątki niechromogenne - nie wytw pigmentu wolnorosnące, M.avium; prątki szybkorosnące poniżej 7 dni.
Other mycobacteria - prątki wywołujące trąt - M.lepraemurhum i M.leprae(u ludzi)
Robert Koch - w 1822 wykryl pratka gruzlicy , 1905 roku dostal nagrode nobla za pratka gruzlicy
MORFOLOGIA
Gram dodatnie ale bardzo trudno się barwia, cienkie pałęczki, do 10 mikrometrow długości i mogą tworzyć nici powyżej, nie wytw rzesek ani otoczek ani przetrwalników, ale mają ściane komórkową.
Budowa ściany - ma ponad 1/3 lipidow a w przeliczeniu na sucha mase to ponad 40 % (stanowia lipidy), w sklad lipidow wchodza - kwasy mykolowe, tworzace dlugie lancuchy od 70-90 at wegla, krotkie kw tluszczowe, należy unikatowy kwas tuberculostearynowy, glikolipidy, lipoarabinomannan i lipoarabinogalaktan, glikolipidy fenolowe, fosfolipidy, sulfolipidy, woski, TREHALOZA DWUMYKOLOWA zwana woskiem C albo cord factor, oraz frakcje białkowe A B C, o wlasciwosciach antygenowych, mogą tworzyc wielkoczasteczkowe lancuchy z reszta skladnikow sciany, wplywaja na immunogenność ściany.
Adiuwanty - wzmagają siłe antygenowa szczepionki, ściana prątka może być takim adiuwantem Freunda, tween 80, które zwiekszaja napiecie powierzchniowe?, sama ściana indukuje odpowiedz immunologiczna, oczywiście dziala nieswoiscie
Mureina jest zbudowana jak u innych bakt, z tym ze te glikoli[idy wzmacniaja sciane przez wiazania fosfodiestrowe
WŁAŚCIWOŚCI BIOCHEMICZNE
Rozkladaja cukry proste i alkohole, ale nie ma to znaczenia przy indentyfikacji, wytw wiele enzymów, które zwiekszaja wirulencję prątka, zostały wykorzystane do rozróżniania
test niacynowy - niacyna jest amidem kw nikotynowego i aby ją wykryc do 30 dniowej hodowli prątka dajemy cyjanek potasu i chloraminę, albo cyjanek bromu i aminiliny?, podloze wybarwia się na żółto - dodatnie dla prątka ludzkiego, dodatek glicerolu hamuje wzrost prątków bydlęcych, a stymuluje wzrost pozostałych; nastomiast pirogronian sodu stymuluje wzrost prątków bydlęcych
test cytochemiczny - pratki zjadliwe wiazą czerwień obojętną po 30 min, a prątki niezjadliwe nie wybarwiają się; szczepy zjadliwe nie odbarwiają błekitu metylenowego a niezjadliwe tak po 24 h inkubacji; pratki zjadliwe wykazują wieksza zjadliwość biochemiczna lepiej rozkladają cukry, szczepy wrażliwe na hydrazykwasu izonikotynowego sa bardziej zjadliwe dla zwierząt doświadczalnych
homogenizat podajemy w konczynach w okolice wezłów chłonnych dostaje para, po 6 tyg usypiamy jedno a po 12 tyg drugie i ogladamy preparaty; Pratek ludzki bardzo zjadliwy dla świnki o wiele mniej dla kurczecia i krolika. Pratek bydlecy - zjadliwy dla swinki i krolika mniej na kurczeta. Pratek ptasi - wrazliwy na kurczaka
WYSTEPOWANIE
Bardzo oporny na czynniki fizyczne i chemiczne. W glebie i wysuszonym kale kilka miesiecy. w sloncu 5h w pelnej ekspozycji. W mleku nawet skwasniałym do 2 tyg. A podgrzanie mleka do 35 stop dopiero po 30 min. Niewrazliwy na 6% kw siarkowy. Wrażliwy na 2 % formalinę i NaOH i 4 % zw chloru.
Czynniki wirulencji
Sa lipidy ścian komórkowych. Katalaza, peroksydaza, i inne enzymy proteolityczne
Diagnostyka lab
Co przesyłamy - u ludzi ślina, u zwierzat bioktaty z jam ciala, wezlow chlonnych, plyn po plukaniu tchawicy i oskrzeli oraz mocz przy grużlicy nerek i mleko przy gruzlicy gr mlekowego;
MATERIAŁ MUSI BYĆ ZAGĘSZCZONY - musi być 1000 pratkow w mililitrze do hodowli.
Wszystkie elementy stale homogenizujemy, a material zagęszczemy przez wirowanie, sedymentacje czy flotacje.
Metoda z ługiem - 4%NaOH, próbke 1do 1 traktujemy NaOH i inkubujemy w 37 stopniach, zobojetniamy kw solnym, (ph do lekko kwasnego) wirujemy i osad do badań
Metoda fosforanowa - mieszamy z 10% fosforanem sodu 1:1, zostawiamy w pokojowej temp na 24 h, doprowadzamy do ph neutralnego i wirujemy
Metoda z chlorheksydyna - 0,2% w stosunku 1:2, wytrzasamy w tem pokojowe,sprawdzamy ph i wirujemy.
Metoda z N-acetyloL-cysteina - mieszanka 50 ml 4% NaOh, 50ml 2,9% cytrynianu sodu i 0,5g cysteiny, inkubujemy wirujemy
Metoda Ziehl-Neelsena - traktujemy rozmaz z osadu fuksyną fenolowa przez 5 min, w tym czasie 3 krotnie podgrzewamy, spłukujemy woda i kwaśnym alkoholem z 3% HCl i dobarwiamy błękitem metylenowym na 5 min
Pod mikroskopem ukladają się w pofałdowane wiązki - zjadliwe (M.bovis)
Niezjadliwe - pod mikroskopem pratki rozproszone
Hodowla
Podłożę Lowensteina-Jensena - masa jajowa, L-asparagina, glicerol, zieleń malahitowa, nienadaje się na hod pratkow bydlecych
Podłoże Middlebroda - glicerol i kwas oleinowy
Podłoża -Stonebrink - pyrogronian sodu bez glicerolu
Podłoże Ogawa - glicerol i glutaminian sodu
Podłoże Petragnani - +maka ziemniaczana
Masa jajowa - cecha charakterystyczna tych podlóż
Rosnał długo do 12 tyg, metody szybkiej BACTEC - metody przemyslowe nie mamy tam wstepu i jest stosowane podloze Middlebroda z dodatkiem wegla reaktywnego C14 na bulionie zamiast masy jajowej
Tuberculosis - Kolonie szorstkie, twarde, skórzaste, trudnozawieszalne,
Bydlęcy - króchy wilgotny bardziej białawy
M.avium - rozlane wilgotne, i dobrzezaiweszalne
PATOGENEZA
Do zakazenia dochodzi droga aerogenna, gluzlica płucna. Ale zmiany mogą obejmować jelita, otrzewną, opony mozgowordze, nerki, kości, stawy, i skórę - gruźlica pozapłucna. Postać rozsiana - wielonarządowa.
Odpowiedz typu komórkowego - zarażenie nie jest jednoznaczne z zachorowaniem, zlokalizowanie zakazeniea i brak objawow chorobowych co nie znaczy ze tego pratka tam nie ma!! On siedzi i czekan a odpowiednia chwile.!! Gdy dochodzi do zaburzeń odpornościowej - zaczynają się uaktywniac
Zakażenie pierwotne - frakcje bialkowe pratkow uczulaja org gospodarza i wywoluja nadwrazliwosc na tuberculinę. Czyli proszę państwa kiedy robimy probe tuberculinową i wychodzi nam wynik dodatni to znaczy żeby nie mylić tej proby ze szczepionką!! (ale mowi bez skladu). Ognisko pierwotne
Organizm broni się - pochłaniane przez makrofagi, wcześniej jeszcze C3 dopełniacza opsonizują pratki, prezentowane limf T, makrofag wytw IL-1 która pobudza limf T do proliferacji i produkcji IL-2 która wplywa na różnicowanie limt T -> powstają limf pomocnicze Th1CD4+ oraz limf cytotoksyczne z markerem CD8 które dzialaja na makrofagi z pratkami i zabija je. Cd4 wydzielają interferon gamma który aktywuje makrofagi a jednoczescie pobudza ja do wytw GMCSF interleukiny i obie te cytokiny maja dzialanie chemotoksyczne i sciagaja limg N. Powstaja limf TCRgamadelta które rozpoznają fosfolipidy pratka oraz restrykcyjne CD1 które rozpoznają glikolipidy. Powstaja limf Th2 które stymuluja wydzielanie interleukin 4 i 5, 10 i 13, które z kolei dzialaja na limf B stymulujac do produkcji przeciwciał. Przeciwciala nie odgrywaja zadnej roli!!!!!!!!!!!! Tylko odpowiedz komórkowe.
Mechanizmy prątka
Jak broni się prątek??
Pratek dostaje się do makrofaga przez receptory CR1 i CR3 które nie uaktywniają oksydacyjnych. Prątki przeżywają i namnażają się w fagocycie co jest czynnikiem kluczowym. Sulfolipidy hamują utworzenie fagolizosomu a nawet jeżeli to nastapi to zapobiega zakwaszenia środowiska. Enzymy które wytwarza prątek usuwają cząsteczki utleniające, a wiec reaktywny tlen i azot które dizalaja bójczo. Kortfaktor - hamuje oddychanie tlenowe w mitochondriach w makrofagach. Glikolipidy fenolowe - neutralizuja wolne rodniki tlenowe. Oprocz tego lipoarabinomangan - hamuje proliferacje limf T, nie dopuszcza do transkrypcji do interferonu gamma, a także blokuje kinazę c która znajduje się na powierzchni makrofaga i z która łaćży się interferon gamma. Glikolipidy mogą hamowac dzialanie innych bialek niedopuszczajac do aktywacji makrofaga. LAM - jest silnym induktorem TNFalfa który niszczy pech płucne. Gromadzace się limf i makrofagi tworza nacieki ziarninowe, fibrocyty otaczaja walem włóknistym i powstają guzki gruźlicze z serowatym środkiem.
Zwapnienie guzka
Limfokiny powoduja ze w miejscu podania tuberkuliny powstaje stan zapalny ponieważ sa makrofagi ssciagane do danego miejsca, tworzy się obrzek, zropienie, dochodzi do tego ze powstaje strup i zagojenie się procesu. FENOMEN KOCHA - wziął 2 świnki, jedną chora i druga zdrowa i podał im pratki, u świnki zdrowej w ciagu 10-14 dni od zmian miejscowych i zropieniu doszlo do uogonienia procesu i się zakaziła staaaarsznie, u świnki chorej reakcja miejscowa i nie dochodzi do nastepnego procesu choroby.
Szczepionka - Calmette - Guerin - nie jest ona dobra, u ludzi chorych na hiv pratek się uaktywnia, może droga podania być zla, po 48h