cw2 3

Informacje ogólne:

Zauważono, że endotoksyna bakteryjna (pirogen) pochodząca od bakterii G- wywołuje wewnątrznaczyniową koagulację u amerykańskiego kraba (skrzypłocza) - Limuluspolyphemus. Czynnik odpowiedzialny za krzepnięcie, w odpowiednich warunkach doświadczalnych, może wywołać - na drodze enzymatycznej - reakcję barwną (przy zastosowaniu składnika chromogennego) lub zmętnienie i żelowanie roztworu (próby).

Test Limulus Amebocyte Lysate (LAL), ENDOSAFE® ENDOCHROME-K™ (USA), jest specyficzną i czulą metodą wykrywania i oznaczania stężenia endotoksyn bakteryjnych w różnych materiałach:    czynniki środowiskowe (pyły), kosmetyki czy narzędzia

chirurgiczne.

ObecnipjijBma jednej, mfig&salnej i powszechnie akceptowanej procedury oznaczania endotoksyn. W związku!! powyższym, niezwykle istotna jest walidacja metody poprzez zastosowanie międzynarodowego standardu LAL. Zaleca się także przeprowadzenie międzylaboratoryjnej kontroli (z udziałem europejskich ośrodków uprawnionych do kontroli międzylaboratoryjnej). W tym celu konieczna jest również standaryzacja sposobu pobierania próbki, ekstrakcji, oznaczania oraz warunków przechowywania prób.

Zasada metody:

Posługując się testem LAL oznaczenie stężenia endotoksyny można przeprowadzić wykorzystując dwie różne metody detekcji:

1)    oznaczenie turbidymetryczne

2)    oznaczenie chromogenne (barwne):

a/ endpoint (punktu końcowego) b/ metodą kinetyczną.

1*/ Oznaczenie turbidymetryczne jest oparte na zdolności endotoksyny do wywołania żelowania próby lub standardu LAL. W metodzie tej aktywacja enzymu obecnego w lizacie