1505995€9655339078090X39016214535099210 n

kultury komórkowe i tkanowe roślin

ĆWICZENIE 6

Obserwacja mikroskopowa komórek roślinnych. Izolacja protoplastów .

1. Przygotowanie preparatu mikroskopowego /. Å‚uski spichrzowej cebuli

3. Przy pomocy skalpela i pesety zerwij cienki fragment skórki cebuli

b. Na szkiełko podstawowe nanieś po jednej kropli:

aJ czystej wody b/ roztworu chlorku sodu

c.    W kroplach umieść delikatnie przygotowane fragmenty tkanki

d.    Preparat przykryj delikatnie szkieÅ‚kiem nakrywkowym, tak. aby nie powstaÅ‚y pÄ™cherze powietrza

c. Preparat obejrzyj od mikroskopem, wykonać i opisać odpow iednie rysunki

2. Izolacja protoplastów z komórek roślinnych

a.    Przy użyciu skalpela potnij liść na drobne kawaÅ‚ki

b.    Fragmenty tkanki roÅ›linnej umieść w probówkach typu eppendorf i inkubować przez 15minut w lml buforu pÅ‚uczÄ…cego z lOOm.M mannitolem i ImM CaCh

c.    UsuÅ„ bufor pÅ‚uczÄ…cy, dodać lml bufoni enzymatycznego (5mM Mes-KOH, pH 5.8; lOOmM mannitol; 5mM CaCh; 1% celulaza; 0.1% pektynaza) i inkubować przez 1 godzinÄ™ w temperaturze 25°C, mieszajÄ…c od czasu do czasu

e.    Protoplasty odizoluj od niestrawionych fragmentów roÅ›lin i buforu poprzez wirowanie (10 min przy 200rpm)

f.    PrzenieÅ› protoplasty do nowych probówek typu eppendorf zawierajÄ…cym lOOpl buforu pÅ‚uczÄ…cego

g.    Przy gotuj preparat mikroskopowy protoplastów oraz nadtrawionej tkanki

h.    Wykonaj i opisz rysunki