5 4

ekstrakt komórkowy

—	sól		więcej soli
	zlorc

jonowymienne

Oczyszczanie DNA przez chromatografię jonawymienną

A.

białko i RNA do wyrzucenia

-

Wektory do klonowania oparte na genomach bakteriofagów E.coli

'.Wektory^inscrcyjne - 'z których usunięto część lub cały niekonieczny DNA i wprowadzono unikatowe miejsce restrykcyjne w pewnej pozycji w obrębie tak poprawionego genomu

Wektory ^zastępujące — zawierają niekonieczny DNA w obrębie fragmentu wypełniającego, oflakowanego parą miejsc restrykcyjnych, który jeest zastępowany, gdy klonowany DNA utega ligar.ji z wektorem

Klonowanie z użyciem wektora insercyjnego:

Działanie odpowiednia endonukieazą restrykcyjną tworzy ramiona: lewe i prawe, oba mające jeden tępy koniec i jeden koniec z 12-nukieotydowym końcem miejsca cos. DNA do skłonowania ma dwa tępo końce, a więc jest wstawiony między dwa ramiona na etapie iigacjr. Ramiona te także ulegają ligacji jedno z daigim przez miejsca cos, tworząc knnkatamer, który zawiera lewe ramię - wstawkę DNA - prawe 'amię i - pod warunkiem. Ze kombinacja na długość 37-52 kb -będzie wkładany do kopsydu przez mieszaninę pakującą in vitro.

Z

5