pomoc spr 3

Wykonują studenci:

Do rozpuszczonego alginianu (20 ml) dodaje 1 podgrupa 10 ml roztworu enzymu o stężeniu 50 mg/ml a 2 podgrupa 5 ml laktazy o stężeniu 25 mg/ml i 5 ml soli fizjolog. (0,9% NaCl), dokładnie miesza na mieszadle magnetycznym. Następnie do zlewki (100-150 ml) wlewamy 100 ml 5 % w/v chlorku wapnia i powoli wkrapłamy za pomocą strzykawki i igły 20 ml mieszaniny - mieszaninę pobieramy strzykawką bez igły a wkrapłamy z igłą (z 30 ml posiadanej mieszaniny, czyli bierzemy 2/3 porcji, a to w przypadku gdy było brane 10 ml enzymu o stężeniu 50 mg/ml stanowi 33 mg/ml unieruchomionego enzymu w 20 ml wkraplanej cieczy. Gdy brane było 5 ml enzymu o stężeniu 25 mg/ml to w 20 ml wkraplanej cieczy jest 16 mg/ml unieruchomionego enzymu) cały czas mieszając powoli!! na mieszadle magnetycznym (powstaną kuleczki, które nie mogą się zlepiać). Preparat utwardzać przez 15 min. w temperaturze pokojowej, a następnie przesączyć przez lejek Buchnera (bez filtra, mają zostać nam kuleczki) i przemyć 200 ml wody destylowanej.

Otrzymywanie mleka bezlaktozowego

Preparat unieruchomionego enzymu (kuleczki) przenieść do kolby Erlenmayera 100 ml ze szlifem, dodać 40 ml 4,5 % roztworu laktozy i mieszać przez 15 min na mieszadle magnetycznym w temperaturze pokojowej. Oddzielić roztwór laktozy od preparatu enzymu-laktazy na sitku i w roztworze (rozcieńczonym 10-krotnie!!) oznaczyć stężenie glukozy (nanosimy krople na pasek diagnostyczny i mierzymy w glukometrze). Wynik mamy w mg/dl (miligram na decylitr, czyli mg%, tzn. liczba miligramów cukru na 100 mililitrów (decylitr) 4,5 % roztworu laktozy.

mg/dl lub mmol/1, gdzie 1 mmol/1 =18,1 mg/dl

Jednocześnie przygotowujemy próbę z wolnym enzymem:

-    1 podgrupa (ta która dodawała 10 ml enzymu) pobiera 6,6 ml laktazy (bo 2/3 z 10 ml enzymu) + 40 ml 4,5% laktozy

-    2 podgrupa (ta która dodawała 5 ml enzymu) pobiera 3,3 ml laktazy (bo 2/3 z 5 ml enzymu) + 40 ml 4,5% laktozy

dalej j.w., czyli

mieszać przez 15 min na mieszadle magnetycznym w temperaturze pokojowej. Oddzielić roztwór laktozy od preparatu enzymu-laktazy na sitku i w roztworze oznaczyć stężenie

11    ■*- i-ł

glukozy.

Każda próba ma być rozcieńczona 10-krotnie przed pomiarem stężenia glukozy!!