DSC00159 (22)

kiem czoło rozpuszczalnika. Następnie paski bibuły suszy się i wywołuje przez spryskanie wywoływaczem ninhydrynowym. Po wywołaniu chromatogramów oblicza się wartości R_f dla poszczególnych plam aminokwasów. Dokonać identyfikacji nieznanego aminokwasu przez porównanie współczynników R_f nieznanego aminokwasu i aminokwasów wzorcowych.

Ćwiczenie 2. WŁAŚCIWOŚCI BIAŁEK

Celem ćwiczenia jest zapoznanie się z właściwościami fizykochemicznymi białek, jak również z metodami rozdziału białek.

Odczynniki

3% roztwór kwasu octowego 96% etanol o temp. pokojowej 96% etanol o temp. 0°C (273 K)

5% CuSO„

2% FeCIj 2% ZnS0₄ 0,1 mol/l AgNOj stężony kwas siarkowy 10% roztwór taniny

nasycony roztwór siarczanu amonu w wodzie krystaliczny siarczan amonu 1,0 mol/l CH₃ COOH

Sprzęt

statyw z probówkami łapy do probówek pipety i zakraplacze

Materiał

roztwór białka kurzego 4% roztwór żelatyny mleko lód

1. Denaturacja i koagulacja białek

1.1.    Przez ogrzewanie

W podwyższonej temperaturze, w wyniku drgań atomów, dochodzi do rozerwania wiązań i do zniszczenia struktury wtórnej białka. Efektem jest denaturacja białka. Reakcja ta jest nieodwracalna. Białka ulegają denaturacji w dość szerokim przedziale temperatury, wynoszącym 40*100°C (313*373 K). Jeżeli białko znajduje się w punkcie izoelektrycznym, wytrącenie zdenaturowanego białka jest obfitsze. W warunkach doświadczenia żelatyna nie ulega denaturacji.

Wykonanie

Do dwóch probówek odmierzyć po około 2 cm³ roztworów białka jaja kurzego i żelatyny. Ogrzewać nad palnikiem. Zanotować wynik obserwacji.

Do probówki zawierającej białko jaja kurzego dodać po oziębieniu kroplami 3% roztwór kwasu octowego. Wytrąca się biały, kłaczkowaty osad zdenaturowanego białka.

Do trzeciej probówki odmierzyć około 2 cm³ roztworu białka i doprowadzić do pH 5 3% roztworem kwasu octowego. Próbę ogrzać do wrzenia. Porównać ilość osadu z osadem uzyskanym poprzednio.

1.2.    W wyniku działania etanolu r

Rozpuszczalniki organiczne, takie jak alkohol etylowy, eter, aceton, powodują wytrącenie białka przez jego odwodnienie. Jeżeli czas działania jest krótki, a wytrącenie przebiega w obniżonej temperaturze 0°C (273 K), to białko nie ulega denaturacji. Działanie denaturujące rozpuszczalników jest wykorzystywane do dezynfekcji.

Wykonanie

Do probówki odmierzyć 5 cm³ roztworu białka i dodać 5 cm³ etanolu. Probówkę umieścić w zlewce wypełnionej lodem. Obserwować zawartość probówki.

Powtórzyć doświadczenie pozostawiając probówkę po dodaniu etanolu w temperaturze pokojowej na okres 1 godziny. Po tym czasie przesączyć roztwory, a uzyskane osady rozpuścić w wodzie.