DSC00160 (20)

1.3. Działanie metali ciężkich na białka

Dodatek do roztworu białka kationów metali ciężkich powoduje utworzenie kompleksów, które w większości są nierozpuszczalne i wypadają z roztworu. Metoda ta służy do wytrącania białek przy oznaczaniu innych substancji.

Wykonanie

Do 3 probówek wlewamy po około 2 cm³ roztworu białka jaja kurzego, następnie kolejno dodajemy roztwory soli miedzi, żelaza i cynku. Obserwujemy zawartość probówek.

\    1.4. Działanie stężonego kwasu azotowego • próba Hellera

'■ i

Stężony kwas azotowy denaturuje i wytrąca białko z roztworu. Reakcja ma charakter nieodwracalny.

Wykonanie

Do probówki odmierzyć około 2 cm³ stężonego HNO_s i kroplami dodawać około 1 cm³ roztworu białka. Zanotować obserwacje.

f ^1.52 Działanie stężonego kwasu siarkowego

Stężony kwas siarkowy i solny powodują denaturację białka, ale bez wytrącania się białka z roztworu.

Wykonanie

Do probówki odmierzyć około 2 cm³ stężonego H₂S0₄ i kroplami dodawać około 1 cm³ roztworu białka. Powstający początkowo osad rozpuszcza się natychmiast w stężonym kwasie siarkowym.

j 1.6. Działanie taniny

Tanina chińska oraz inne garbniki roślinne tworzą z białkami nierozpuszczalne kompleksy.

Taninę wykorzystuje się do oznaczania obecności białek w roztworach bardzo rozcieńczonych - poniżej 100 pg. Metoda taninowa polega na spektrofotometrycznym oznaczeniu zmętnienia.

•o

ch₂or

OH

OH

R — reszta depsydu kwasu galusowego

i

II

R-0 'j-Y 0-R

0—R

tanina chińska

Wykonanie    ' P°

uS0₄ ■

Do probówki wlać około 2 cm³ roztworu białka jaja ku dodać 1 cm³ odczynnika taninowego. Obserwować, czy poj . 2H,0 zmętnienie lub osad.    * i 8 cm³

V

2. Wyznaczanie punktu izoelektrycznego białek mleka

Białko jest elektrolitem amfoterycznym. Umieszczając białko w roztworach o odpowiednich stężeniach jonów H⁺ dochodzi się do takiego stężenia, w którym cząsteczka białka będzie elektrycznie obojętna. Takie pH nazywa się punktem izoelektrycznym (pi). Białko w punkcie izoelektrycznym ma obniżoną rozpuszczalność i wypada z roztworu.

Wykonanie

W statywie umieszcza się 9 suchych probówek. Do probówki 1 odmierzyć 3,2 cm³ CH₃COOH oraz 6,8 cm³ wody destylowanej. Do pozostałych probówek wlać po 5 cm³ wody destylowanej. Następnie 5 cm³ roztworu z probówki | przenosi się do probówki 2, po wymieszaniu pobiera się 5 cm³ roztworu i przenosi do probówki 3 itd. Z ostatniej probówki (9) odrzuca się końcowe 5 cm³.

W ten sposób uzyskujemy skalę rozcieńczeń o wartościach pH:

' Nr probówki	1	2	3	4	5	6	7	8	9 I
cm^31 mol/1 CH3COOH	1,6	0.8	0,4	0,2	0,1	0,05	0,025	0,012	0,006
pH roztworu	3,5	3,8	4,1	4.4	4,7	5,0	5,3	5.6	5,9
osad
przezroczystość roztworu nad osadem

159