DSCF6754

116

Rf — określa stosunek drogi migracji substancji chromatografowanych (od punktu startu do środka plamki - A) do drogi przebytej przez fazę ruchomą (od linii startu do czoła fazy ruchomej —

6), gdzie B w tym przypadku wynosi 15 cm.

- zinterpretować otrzymane wyniki. Uzasadnić czy lek nadaje się do handlu?

40. SPRAWDZENIE TOŻSAMOŚCI I CZYSTOŚCI TIOGUANINY METODĄ CHROMATOGRAFII CIENKOWARSTWOWEJ

Ćwiczenie ma na celu zapoznanie studenta z metodą chromatografii cienkowarstwowej (z ang. thin layer chromatography - TLC) oraz sprawdzenie tożsamości substancji czystej i czystości leku o nazwie LANN/IS (The Wellcome Foundation Ltd London). Substancją czynną jest 2-amino-6-merkaptopuryna (nazwa zwyczajowa: tioguanina) o wzorze strukturalnym:

SH

W ćwiczeniu tym sprawdza się głównie zanieczyszczenia pochodzące od związków siarki (II).

Do wizualizacji chromatogramów zastosowano reakcję jodo--azydkową. W miejscu pojawienia się induktora (związki siarki (II)) po spryskaniu mieszaniną azydku sodu i skrobi oraz po włożeniu do komory jodowej następuje odbarwienie wywoływacza. Najniższe stężenie wzorca jest tak dobrane, aby stanowił on granicę detekcji. Dlatego, jeżeli pojawi się dodatkowa plama na chromatogramie substancji badanej, to oznacza, że stężenie zanieczyszczenia jest równe lub większe stężeniu tego wzorca.

Głównym zanieczyszczeniem badanego leku jest guanina. Obecność jej sprawdza się oglądając rozwinięta płytkę pod lampą emitującą promieniowanie o długości fali X = 254 nm.

Odczynniki

Wodorotlenek sodu cz.d.a., roztwór o stężeniu c(NaOH) = 0.1 mol/l. Roztwór do spryskiwania zawierający azydek sodu w stężeniu 40 g/l i skrobię w stężeniu 5g/l doprowadzony do pH 6.05 za pomocą kwasu solnego.

Tioguanina cz.d.a.

Guanina cz.d.a.

Amoniak do HPLC, roztwór o stężeniu c(NH3) = 13.5 mol/l.

Metanol do HPLC.

LANVIS (The Wellcome Foundation Ltd London).

Aparatura i sprzęt laboratoryjny

Kolby miarowe pojemnościlO ml    6 szt.

Cylinder pojemności 100 ml    1 szt.

Cylinder pojemności 25 ml    1 szt.

Mikropipeta nastawna 0.1-1 pi    1 szt.

Zlewki pojemności 30 ml    2 szt.

Naczynka wagowe    3 szt.

Mikropipeta automatyczna pojemności 50 pl

Mikropipeta automatyczna pojemności 200 pi

Spryskiwacz

Moździerz

Łopatka

Lejek (mały)

Sączek

Waga analityczna

Płytka szklana pokryta żelem krzemionkowym Silica gel S60 F₂₅4 (wymiary 10 x 20 cm)

Suszarka

Lampa UV 254 nm Komora chromatograficzna

Wykonanie ćwiczenia 1. Przygotowanie komory chromatograficznej.

-    przygotowanie fazy ruchomej: odmierzyć metanol i amoniak w stosunku objętościowym 90:15. Roztwór dobrze wymieszać,

-    komorę przemyć 25 ml roztworu fazy ruchomej,

-    wyciąć z bibuły pasek o wymiarach 56 x 12 cm,

-    wyłożyć nią ściany komory chromatograficznej w taki sposób, aby jej końce wystawały poza nią