3582316686

Chromatografia planarna - cienkowarstwowa TLC

Faza ruchoma porusza się dzięki silom kapilarnym.

Fazy stacjonarne: żel krzemionkowy, proszek celulozowy, żywice jonowymienne, materiały o ograniczonych rozmiarach jonów, selektory chiralne.

Fazy ruchome: rozpuszczalniki o różnej porowatości i ich mieszaniny.

Detekcja w TLC - mineralizacja chemiczna

-    spryskiwanie płytki odczynnikiem chromogennym, np. kwasem fosforomolibdenowym, ninhydryną (aminokwasy i aminy), rodamina (lipidy),

-    oglądanie płytki w świetle UV,

-    spryskiwanie płytki stężonym kwasem siarkowym, azotowym co powoduje zwęglanie matrycy organicznej,

-    densytometryczne - pomiar promieniowania odbitego od powierzchni.

Zastosowanie TLC:

-    rozdzielanie związków organicznych *analiza jakościowa próbek biochemicznych,

♦farmaceutycznych (steroidy)

♦klinicznych,

♦analiza sądowa (narkotyki),

-    do sprawdzalna czystości związków,

-    w procesach produkcyjnych do monitorowania przebiegu reakcji.

Schemat chromatografu HPLC

Układ pobierania rozpuszczalników —» układ mieszania rozpuszczalników —» pompa (strzykawkowa, tłokowa) —» degazer (do odgazowywania próbek, aby nie powstawały pęcherzyki powietrza, odparowywanie ultradźwiękami, odgazowywanie przez membranę) —> autosampler (pobiera i wstrzykuje próbkę na kolumnę; od 10 pi do 100-200 pi) —* prekolumna (krótsza od kolumny, 10 - 15 cm, służy do wstępnego oczyszczania próbki —> kolumna —> detektor —> system zbierania danych.

Elucja

-    izokratyczna - od początku do końca procesu chromatograficznego stosuje się ten sam rozpuszczalnik,

-    gradientowa - zmienia się wzajemny stosunek (objętościowy, masowy) jednego rozpuszczalnika do drugiego.

Detektory

Granice wykrywalności [ng]

UV-VIS	0,1-1	Gradient
Refraktometryczny	100 1000		Niespecyficzny, bada rozpraszanie, tani, nie wie co wykrywa
Elektrochemiczny	0,01 -1		Może zidentyfikować co się bada
Fluorescencyjny	0,001 -0,01	Gradient	Drogi, szeroko stosowany w analizie klinicznej, białka, lipidy
Konduktometryczny	0,5-1		Zmiana przewodnictwa, rejestruje zmiany, niespecyficzny
Spektrometr mas	0,1-1	Gradient	Jeden z najlepszych, liczy masę cząsteczki danej substancji
FTTR	1000	Gradient	Spektrometria w podczerwieni z transformacją Fouriera, specyficzny

Chromatografia podziałowa

Cieczowa - fazą stacjonarna jest ciecz utrzymywana na nośniku w wyniku adsorpcji na powierzchni cząstek wypełnienia.

Z faza powiązaną - fazą stacjonarną jest substancja organiczna chemicznie związana z powierzchnią cząstek wypełnienia - C18 powszechniej stosowane nie wymagają regeneracji, ograniczona pojemność.