3582320185

Wypełnienie kolumny

-    w wyso kos prawnej chromatografii cieczowej kolumnowej - rozmiar ziaren 5-10pm

-    cząsteczki mniejsze    od 3pm nie są stosowane, gdyż powodują zbyt duże opory fazy ruchomej.

Faza ruchoma

-    rodzaj i ilość rozpuszczalników stanowiących eluenty w chromatografii cieczowej mają znacznie większy wpływ na proces chromatografowania niż gaz nośny w chromatografii gazowej.

-faza ruchoma w chromatografii cieczowej jest czynnikiem aktywnym - czasem niewielki dodatek drugiego rozpuszczalnika do eluentu wywiera duży wpływ na jakość rozdzielania składników mieszaniny

-    przy wyborze fazy ruchomej należy uwzględnić rodzaj i skład rozdzielanej mieszaniny, rodzaj zastosowanego wypełnienia kolumny i rodzaj detektora,

Należy umieć to na egzamin

Rozpuszczalniki stosowane jako fazy ruchome w HPLC powinny:

-    wykazywać odpowiednią zdolność rozpuszczania próbki

-    umożliwiać detekcję próbki

-    charakteryzować się wysokim stopniem czystości

-    nie reagować chemicznie ani z fazą stacjonarną, ani z rozdzielaną próbką

-    charakteryzować się trwałością w warunkach chromatografowania

Efektywność wymywania substancji z adsorbentu zależy od mocy elucyjnej rozpuszczalnika. Rozpuszczalniki sklasyfikowano wg wzrastającej mocy elucyjnej i powstały w ten sposób tzw. szeregi eluotropowe rozpuszczalników.

W przypadku polarnych faz stacjonarnych (np. żel krzemionkowy, tlenek glinu) rozpuszczalniki są ułożone wg rosnącej mocy elucyjnej następująco:

n-pentan, n-heksan, cykloheksan, tetrachlorek węgla, toluen, benzen, eter diety Iowy, chloroform, dichlorometan, tetrahydrofuran, dichloroetan, aceton, octan etylu, acetonitryl, pirydyna, etanol, metanol, woda i kwas octowy.

Moc elucji przy chromatografowa ni u na niepolarnej fazie stacjonarnej (np. węglowej) jest odwrotna i wzrost mocy elucji można obserwować w szeregu:

woda, metanol, etanol, aceton, propanon, eter dietylowy, butanol, octan etylu, n-heksan, benzen. Miarą mocy elucyjnej rozpuszczalników, czyli miarą ich zdolności wymywania substancji chromatog rafowanych z kolumny są indeksy pola mości.

Chromatografia w normalnym układzie faz

Polarne fazy stacjonarne (np. żel krzemionkowy) i mniej polarne fazy ruchome (np. heksan, izooktan, chloroform, chlorek metylenu)

Chromatografia w odwróconym układzie faz

Faza stacjonarna słabo polarna lub niepolarna i bardziej polarna faza ruchoma (np. tetra hydrof uran, acetonitryl, metanol, woda)

Eiucja izokratyczna

Skład mieszaniny jest jednakowy przez cały czas chromatografowania próbki (stała siła elucyjna)

Eiucja gradientowa

W czasie rozdzielania składników jednej próbki skład eluentu zmienia się, a jego siła elucyjna się zwiększa, dlatego że po kolei wymywamy wszystkie składniki.

Zastosowanie

W przypadku chromatografowania w normalnym układzie faz mieszanin zawierających składniki znacznie różniące się polarnością.

W przypadku chromatografowania w odwróconym układzie faz mieszanin zawierających składniki o bardzo różnej rozpuszczalności w fazie ruchomej.

Dobór składu fazy ruchomej

Zasada ogólna:

1)    Analizę niepolarnych substancji (np. węglowodorów i ich pochodnych halogenowych lub związków tlenowych, zawierających duże rodniki węglowodorowe) które rozpuszczają się dobrze w hekasnie wykonuje się zwykle w odwróconym układzie faz.

Stosuje się fazę ruchomą zawierającą 0-30% wody w metanolu lub acetonitryl u.

2)    Do bardzo słabo polarnych związków można stosować mieszaninę acetonitryl-chloroform lub acetonitryl-chlorek metylenu.

3)    Substancje o pośredniej polarności rozpuszczające się w estrach, alkoholu i

chloroformie mogą oddziaływać z grupami aktywnymi żelu krzemionkowego i polarnymi grupami faz związanych z żelem krzemionkowym. Do ich analizy stosuje się mieszaniny zawierające 2-50% organicznego rozpuszczalnika polarnego w rozpuszczalniku niepolarnym - węglowodorze lub halogenowęglowodorze.    RACZEJ tego

4)    Wiele polarnych związków organicznych rozpuszcza się w wodzie i często rozdziela będzie na się je w odwróconym układzie faz. Faza ruchoma zawiera w tym przypadku 0-50% egzaminie.