ÿþw y k Ba d 2 B I O C H E M I A 9 . X . 2 0 0 0
T E M A T : B I O C H E M I A K W A S Ó W N U K L E I N O W Y C H
D z i s i a j n a t e m a t m e t o d o l o g i i b a d a n i a b a d a n i a g e n o m u , o g r a n i c z y m y s i d o m e t o d s t o s o w a n y c h
w s p ó Bc z e s n e j d i a g n o s t y c e . p r z y p o m i n a m , |e o s t a t n i o z a k o Dc z y l i [m y n a e t a p i e t r a n s k r y p c j i a
t e r a z p r z e j d z i e m y d o t r a n s l a c j i . Z r e p l i k o w a l i [m y D N A i p o d d a l i [m y g o t r a n s k r y p c j i i p o d a l i [m y
g o o b r ó b c e p o s t t r a n s k r y p c y j n e j p r o w a d z o c e j m e t o d s p l i c i n g u p o w s t a n i a t r a n s k r y p t u i d z i [ n a s z
t r a s k r y p t o p u [c i B j d r o z n a l a z B s i w c y t o p l a zm i e , w s z e d B n a r y b o s o m y - z a c z y n a s i p i e r w s z a . . .
t y m p o [r e d n i k i e m j e s t a m i n o a c y l o - t R N A , c z y l i t R N A z p o Bc z o n y m z n i m a m i n o k w a s e m . T o s
c z s t e c z k i n i e w i e l k i e l i c z c e o k . 8 0 n u k l e o t y d ó w , k t ó r e c e c h u j s i z a r ó w n o w y s t p o w a n i e m
m i e j s c d w u n i c i o w y c h z o b e c n y m i s p a r o w a n i a m i , o r a z 4 s e k w e n c j i j e d n o n i c i o w y c h - n i e w a |n e j e s t
i c h f u n k c j a , w a |n e |e w y s t p u j t u t a j z m o d y f i k o w a n e z a s a d : d i h y d r o u r y d y n a , w p t l i T P s i C
w y s t p u j e r y b o t y m i d y n a , c h o d z w i a d o m o , |e t y m i n a n i e w y s t p u j e w R N A i m o d y f i k a c j e o
k t ó r y c h w s p o m i n a Be m w y s t p u j n a d r o d z e m o d y f i k a c j i p o s t t r a n s k r y p c y j n e j
t R N A . N A j i s o t n i e j s z e z p u n k t u w i d z e n i a p r o c e s u , k t ó r y m s i z a j m u j e m y j e s t p t a l a
a n t y k o d o n o w a , k t ó r a a s o c j u j e z o d p o w i e d n i m k o d o n e m z n a j d u j c y m s i w m R N A . N a 3 ' k o Dc u
c z s t e c z k i t R N A n a s t p u j e p r z y Bc z e n i e a m i n o k w a s u . A m i n o k w a s p r z y Bc z o n y j e s t d o g r u p y
h y d r o k s y l o w e j a d e n i n y s w o j g r u p k a r b o k s y l o w i t a s t r u k t u r a n o s i n a z w a m i n o a c y l o -
t R N A . W t a k i e j f o r m i e a m i n o k a s z d |a n a r y b o s o m a b y w k o n s e k w e n c j i p r o c e s u t r a n s l a c j i
t w o r z y Ba Dc u c h p o l i p e p t y d o w y . A l e t o n i e j e d y n a f u n k c j a t e g o t R N A , p o s i a d a t y c h f u n k c j i
z n a c z n i e w i c e j o p r ó c z r y b o s o m a l n e j p r o d u k c j i b i a Bk a . U o r g a n i z m ó w , k t ó r e d y s p o n u j [c i a n
k o m ó r k o w , a w i c u r o [l i n o a z o r g a n i z m ó w p r o k a r i o t y c z n y c h t R N A b i e r z e u d z i a B w s y n t e z i e
[c i a n y k o m ó r k o w e j . U o r g a n i z m ó w , k t ó r e w y t w a r z a j c h l o r o f i l j e s t z a n g a |o w a n y w b i o s y n t e z
c h l o r o f i l u . D a l e j b i e r z e u d z i a B w s y n t e z i e f o s f o g u a n o z y n y . B i e r z e u d z i a B w t r a n s p o r c i e
a m i n o k w a s ó w . U b a k t e r i i g r a m u j e m n y c h b i e r z e u d z i a B w s y n t e z i e g l i k o p o l i s a c h o r y d ó w , k t ó r e s
e n d o t o k s y n a m i b a k t e r i i . B i e r z e u d z i a B w d e g r a d a c j i b i a Be k o r a z o s t n i f u n k c j - n i e z w y k l e
i s t o t n - j e s t p r i m e r e m o d w r o t n e j t r a n s k r y p t a z y ( p o l i m e r a z a D N A R N A - z a l e |n a , w i c m u s i
m i e j a k i [ p r i m e r , t y m p r i m e r e m s c z s t e c z k i t R N A ) I w r e s z c i e z a p o m o c z m u t o w a n y c h
c z s t e c z e k t R N A s p o w o d o w a n y c h m u t a c j a m i w g e n a c h k o d u j c y c h t R N A m o |l i w e j e s t
w y s t p i e n i e m u t a c j i s u p r e s o r o w e j t z n . t R N A m i m o n a p o t k a n i a k o d o n u t y p u n o n - s e n s , k t ó r y m a
o z n a c z a k o n i e c t r a n s l a c j i n i e t e r m i n u j e t y l k o p r z y Bc z a c z s t b Bd n y a m i n o k w a s . T a k i e b i a Bk o
p o w s t a Be w w y n i k u p r z y Bc z e n i a d o m i e j s c a k o d o n u n o n s e n s o w n e g o z m u t o w a n e g o t R N A -
t z w . t R N A s u p r e s o r o w e g o - t a k i e b i a Bk o n o s i n a z w b i a Bk a s u p r e s o r o w e g o . M i m o , i | s e k w e n c j a
a m i n o k w a s o w a m o |e b y o d m i e n n a t o e f e k t d l a k o m ó r k i j e s t l e p s z y n i | w m o m e n c i e g d y t o
b i a Bk o w o g ó l e b y n i e p o w s t a Bo , c z s t o t o b i a Bk o n a w e t p o z a m i a n i e a m i n o k w a s u p e Bn i t s a m
f u n k c j , a l b o f u n k c j a j e g o j e s t u p o [l e d z o n a , a l e t o l e p s z e n i | b y t e g o b i a Bk a n i e b y Bo . D l a n a s z y c h
d a l s z y c h r o z w a |a D w a |n e s t r z y p u n k t y k o n t a k t o w e w c z s t e c z c e , m i a n o w i c i e m i e j s c e A , m i e j s c e
P o r a z m i e j s c e E . D o m i e j s c a o z n a c z o n e g o j a k o A p r z y Bc z a s i a m i n o a c y l o - t R N A z w y j t k i e m
p i e r w s z e g o . W m i e j s c u P z n a j d u j e s i p e p t y d y l o - t R N A c z y l i t R N A z p r z y Bc z o n y m n a r a s t a j c y m
p e p t y d e m . I w r e s z c i e m i e j s c e E t o j e s t m i e j s c e , k t ó r e z a j m u j e p e p t y d y l o - t R N A p r z e d w y j [c i e m z
r y b o s o m u .
T R A N S L A C J A
I n i c j a c j a p r o c e s u t r a n s l a c j i r o z p o c z y n a s i o d z a j c i a p r z e z p i e r w s z y a m i n o a c y l o - t R N A , k t ó r y m
w p r z y p a d k u o r g a n i z m ó w e u k a r i o t y c z n y c h j e s t m e t i o n y l o - t R N A , c z y l i t R N A z p r z y Bc z o n
m e t i o n i n a w p r z y p a d k u o r g a n i z m ó w p r o k a r i o t y c z n y c h m e t i o n i n a u l e g a m o d y f i k a c j i i p o w s t a j e
f o r m y l o m e t i o n i n a i f o r m y l o m e t i o n i n o - t R N A , a l e k o d o n r o z p o z n a w a n i a j e s t t e n s a m , p o n i e w a |
k o d o n u d l a f o r m y l o m e t i o n i n y n i e m a . I t e n p i e r w s z y i n i c j u j c y p r o c e s t r a n s l a c j i a m i n o a c y l o -
t R N A z a j m u j e m i e j s c e P , a n i e m i e j s c e A . P o z a j c i u m i e j s c a P d o m i e j s c a A p r z y Bc z a s i
k o l e j n y a m i n o a c y l o - t R N A . D o a k c j i w k r a c z a e n z y m - t r a n s f e r a z a p e p t y d y l o w a - j e s t t o e n z y m ,
k t ó r y s y n t e t y z u j e w i z a n i e p e p t y d o w e . I w i z a n i e p e p t y d o w e - p r z y p o m i n a m , |e p o Bc z o n e s
g r u p k a r b o k s y l o w a m i n o k w a s y z t R N A - w i z a n i e j e s t s t w o r z o n e p o m i d z y g r u p
k a r b o k s y l o w t e g o n a r a s t a j c e g o p e p t y d u , a w p r z y p a d k u p i e r w s z e g o a m i n o a c y l o - t R N A m i d z y
m e t i o n y l o - t R N A a g r u p a m i n o w p r z y Bc z o n e g o w p o z y c j A a m i n o a c y l o - t R N A . Z t e g o
w y n i k a , |e n a r a s t a n i e p e p t y d u n a s t p u j e o d k o Dc a N w k i e r u n k u k o Dc a C , c z y l i z a w s z e d a w c
g r u p y k a r b o k s y l o w e j j e s t p e p t y d y l o - t R N A ( a w p r z y p a d k u p i e r w s z e g o m e t i o n y l o - t R N A ) a
d a w c g r u p y a m i n o w e j a m i n o k w a s , k t ó r y z n a j d u j e s i w m i e j s c u A p r z y Bc z o n e g o t R N A . T a k
w i c w n a s z y m k o n k r e t n y m p r z y p a d k u p o z a d z i a Ba n i u t r a n s f e r a z y p e p t y d y l o w e j p o w s t a B n a m
d i p e p t y d , z b u d o w a n y z m e t i o n i n y i j a k i e g o [ d r u g i e g o a m i n o k w a s u , k t ó r y o k u p u j e m i e j s c e A
r y b o s o m u . D o a k c j i w k r a c z a t r a n s l o k a z a . T r a n s l o k a z a p r z e s u w a n a s z e w t y m p r z y p a d k u
d i p e p t y d y l o - t R N A w m i e j s c e P , m i e j s c e A u l e g a z w o l n i e n i u i t u z n o w u p r z y Bc z a s i j a k i [
a m i n o a c y l o - t R N A d o m i e j s c a A , n o i n a s t p u j e n a p o d o b n e j z a s a d z i e w y g e n e r o w a n i e t r z e c i e g o
a m i n o k w a s u , c z y l i d r u g i e g o w i z a n i a p e p t y d o w e g o i m a m y j u | t r i p e p t y d . W t y m c z a s i e
z w o l n i o n y t R N A p r z e c h o d z i d o m i e j s c a P i w m i a r j a k r y b o s o m s i p r z e s u w a , n a s t p u j e
o p u s z c z e n i e r y b o s o m u p r z e z t R N A . I t a k w s z y s t k o t r w a d Bu g o , a | p o j a w i s i k o d o n n o n s e n s o w n y
i w ó w c z a s c z y n n i k i , k t ó r e t e r m i n u j t r a n s l a c j , o d p o w i e d n i e g r u p y b i a Be k e n z y m a t y c z n y c h i
n i e e n z y m a t y c z n y c h , d o p r o w a d z a j d o o d Bc z e n i a s i p o w s t a Be g o p e p t y d u o d r y b o s o m u . N o i
t e r a z w i e d z c j a k t e n p r o c e s p r z e b i e g a p r z y j r z y m y s i s u b s t a n c j o m , k t ó r e t e n p r o c e s m o d u l u j .
I n h i b i t o r y t r a n s l a c j i
I - I n h i b i t o r y i n i c j a c j i
- T r i m e t o p r i m
P a m i t a j c , |e p i e r w s z y m a m i n o a c y l o - t R N A j e s t f o r m y l o m e t i o n y l o - t R N A , a o n p o w s t a j e p r z e z
p r z y Bc z e n i e g r u p y f o r m y l o w e j d o m e t i o n y l o - t R N A . O s t a t n o j u | z t y m z w i z k i e m s i
s p o t k a l i [m y - t r i m e t o p r i m , j e s t i n h i b i t o r e m r e d u k t a z y k w a s u f o l i o w e g o , c z y l i t r i m e t o p r i m
u n i e m o |l i w i a p o w s t a n i e F A 4 , g r u p a f o r m y l o w a j a k o g r u p a j e d n o w g l o w a j e s t p r z e n o s z o n a p r z e z
t e t r a h y d r o f o - l i a n , c z y l i n i e m o |e p o w s t a F A 4 , p r z e z t o n i e m o |e p o w s t a f o r m y l o m e t i o n y l o -
t R N A i u b a k t e r i i , b o t y l k o u n i c h t e n p r o c e s s i o d t e g o z w i z k u z a c z y n a , n i e m o |e r o z p o c z
s i t r a n s l a c j a .
I I - I n h i b i t o r y e l o n g a c j i
- a n t y b i o t y k i a m i n o g l i k o z y d o w e
J e s t t o b a r d z o s z e r o k o s t o s o w a n a g r u p a a n t y b i o t y k ó w p r z e c i w b a k t e r y j n y c h , d o b r z e z n a n e n a z w y :
> S t r e p t o m y c y n a
> G e n t a m y c y n a
> N e o m y c y n a
> K a n a m y c y n a
> T e b r a m y c y n a
O n e d z i a Ba j n a r y b o s o m b a k t e r y j n y , i m a j d w a d z i a Ba n i a : h a m o w a n i e i n i c j a c j i t r a n s l a c j i (
w p r a w d z i e p o w s t a j e f o r m y l o m e t i o n y l o - t R N A , a l e n i e m o |e s i p r z y Bc z y d o r y b o s o m u , b o d o
m i e j s c a P n i e m o |e s i p r z y Bc z y f o r m y l o m e t i o n y l o - t R N A ) a d r u g a - h a m o w a n i e p r o c e s u
e l o n g a c j i ( a t o w t e n s p o s ó b , |e z a b u r z a j p r a w i d Bo w e p r z y Bc z a n i e k o l e j n y c h a m i n o a c y l o - t R N A
d o r y b o s o m u l u b p o w o d u j b Bd n y o d c z y t ) .
- T e t r a c y k l i n y
> D o x y c y k l i n a , c z y V i b r a m y c y n a ( j a k k t o w o l i )
O n a h a m u j e p r z y Bc z a n i e a m i n o a c y l o - t R N A d o r y b o s o m u , c z y l i n i e m o |e w y d Bu |a s i Ba Dc u c h
p o l i p e p t y d o w y . N a t o m i a s t n i e z a b u r z a p r o c e s u i n i c j a c j i t r a n s l a c j i .
- C h l o r a n f e n i k o l
- C y k l o h e k s y m i d
S i n h i o b i t o r a m i t r a n s f e r a z y p e p t y d y l o w e j . P r z y c z y m c h l o r a n f e n i k o l d z i a Ba n a r y b o s o m
b a k t e r y j n y , a c y k l o h e k s y m i d d z i a Ba n a r y b o s o m e u k a r i o t y c z n y . C h l o r a n f e n i k o l j e s t b a r d z o
t o k s y c z n y m a n t y b i o t y k i e m , r z a d k o o b e c n i e s t o s o w a n y m , a j e [l i s i g o s t o s u j e t o g Bó w n i e w
s a l m o n e l l o z a c h , c z y l i d u r z e b r z u s z n y m o r a z w s c h i g e l l o z a c h , c z y l i c z e r w o n c e b a k t e r y j n e j ,
r z a d k o s t o s o w a n y z e w z g l d u n a t o k s y c z n e d z i a Ba n i e w s t o s u n k u d o s z p i k u k o s t n e g o . N a t o m i a s t
c y k l o h e k s y m i d n i e z n a l a z B z a s t o s o w a n i a t e r a p e u t y c z n e g o , n a t o m i a s t z n a l a z B o n z a s t o s o w a n i e
j a k o p e w n e g o r o d z a j u n a r z d z i e w b i o c h e m i i k o m ó r k i . T o n i e j e s t c y t o s t a t y k .
- A n t y b i o t y k i m a k r o l i t o w e
> E r y t r o m y c y n a
> D a d e r c y n a
- T o k s y n a b Bo n i c z a
S i n h i b i t o r a m i t r a n s l o k a z y , c z y l i t e g o e n z y m u , k t ó r y u m o |l i w i a p r z e s u n i c i e p e p t y d y l o - t R N A z
m i e j s c a A d o m i e j s c a P . A n t y b i o t y k i m a k r o l i t o w e d z i a Ba j n a r y b o s o m b a k t e r y j n y , n a t o m i a s t
t o k s y n a b Bo n i c z a d z i a Ba n a r y b o s o m e u k a r i o t y c z n y . B Bo n i c a t o j e s t c h o r o b a b a k t e r y j n a ,
w y w o By w a n a p r z e z m a c z u g o w c a b Bo n i c y , o b e c n i e c h o r o b a n i e w y s t p u j e d z i k i s z c z e p i e n i o m
o c h r o n n y m , k t ó r e p o d a j e s i j u | b a r d z o m a By m n i e m o w l t o m , n a t o m i a s t d a w n i e j , r o z w u j
m a c z u g o w c a o d b y w a B s i w g a r d l e d a j c o b j a w y a n g i n y , c z y z a p a l e n i a g a r d Ba , n a t o m i a s t
w y d z i e l a n a p r z e z n i e g o t o k s y n a u s z k a d z a Ba g Bó w n i e m i s i e D s e r c o w y , n a s z c z [c i e o b e c n i e n i e
w y s t p u j e .
I I I - I n h i b i t o r y t e r m i n a c j i
- P u r o m y c y n a
J e s t a n a l o g i e m t y r o z y n y l o - t R N A , c z y l i u d a j e t a k i e t R N A , d o k t ó r e g o p r z y Bc z o n a j e s t t y r o z y n a .
N o i j a k s i p o j a w i a k o d o n d l a t y r o z y n y , t o p o d j e |d |a s o b i e p u r o m y c y n a , w t o m i e j s c e s i
w Bc z a , a l e o n a n i e j e s t w s t a n i e u t w o r z y w i z a n i a p e p t y d o w e g o , c z y l i n a t y m e t a p i e b i o s y n t e z a
b i a Bk a s t a j e .
N o i z s y n t e t y z o w a l i [m y Ba Dc u c h p o l i p e p t y d o w y , k t ó r y n a s t p n y m r a z e m b d z i e m y m o d y i k o w a
p o s t t r a n s l a c y j n i e , a b y u z y s k a w p e Bn i f u n k c j o n a l n e b i a Bk a . P o z a b a r d z o m a By m i p e p t y d a m i ,
k a |d e i n n e b i a Bk o u l e g a m o d y f i k a c j o m , z a r ó w n o m o d y f i k a c j o m w e w n t r z k o m ó r k o w y m j a k i
z e w n t r z k o m ó r k o w y m .
M e t o d y b a d a n i a g e n o m u c z Bo w i e k a
J a k w s p o m i n a Be m , b d z i e m y s i z a j m o w a t y l k o m e t o d a m i Ba t w y m i d o z r o z u m i e n i a , s z e r o k o
s t o s o w a n y m i w p r a k t y c e , t a k i m i , k t ó r y m i m y s i r ó w n i e | w z a k Ba d z i e z a j m u j e m y , t a k i m i ,
k t ó r e p o k a |e m y w c z a s i e w i c z e D l a b o r a t o r y j n y c h .
G e n o m c z Bo w i e k a j e s t t r u d n y d o b a d a n i a , d l a c z e g o : z e w z g l d u n a j e g o w i e l k o [
E s c h e r i c h i a c o l i 4 5 0 0 g e n ó w
D r o |d |e 6 5 0 0 g e n ó w
M u s z k a o w o c o w a 8 0 0 0 g e n ó w
C z Bo w i e k 8 0 0 0 0 g e n ó w
D l a t e g o b a d a n i a , k t ó r e m a j b y l a d a m o m e n t u k o Dc z o n e , n a p o z n a n i e p e Bn e j s e k w e n c j i
g e n o m u l u d z k i e g o , t r w a By o d w i e l u , w i e l u l a t i b y By o b a r c z o n e p e w n y m i t r u d n o [c i a m i , z e
w z g Bd u n a j e g o c e c h i z e w z g l d u n a t r u d n o [ w p o z y s k i w a n i u .
C e c h g e n o m u c z Bo w i e k a :
- g s t o [ g e n ó w ( c z y l i i l o [ g e n ó w p r z y p a d a j c a n a j e d n o s t k d Bu g o [c i D N A , a t j e d n o s t k
j e s t i l o [ p a r z a s a d - p z . )
- g e n y w m i t o c h o n d r i u m u p a k o w a n e s d o [ g s t o , b o s a m g e n o m j e s t s t o s u n k o w o
n i e d u |y - 1 0 , 4 5 k b ( t y s . z a s a d )
- n a t o m i a s t w j d r z e g e n y s s t o s u n k o w o r o z s i a n e 1 4 0 - 4 5 k b
- w i e l k o [ g e n u ( d Bu g o [ g e n u ) 1 0 - 1 5 k b
- o d s t p y m i d z y g e n o w e , c z y l i t z w . s p a c e r 2 5 - 3 0 k b
G e n y c z Bo w i e k a s b a r d z o z r ó |n i c o w a n e p o d w z g l d e m i l o [ e k s o n ó w . S g e n y b a r d z o p r o s t e
m a j c e j e d e n e k s o n , c z s t o s t o g e n y k o d u j c e n p . t R N A . N a t o m i a s t n a j w i k s z y g e n g e n o m u
c z Bo w i e k a p o s i a d a 7 9 e k s o n ó w i j e s t t o g e n , k t ó r e g o n a z w w a r t o z a p a m i t a , t o j e s t g e n , k t ó r y
k o d u j e b i a Bk o o n a z w i e d y s t r o f i n a . N a t o m i a s t g e n j e s t o z n a c z o n y l i t e r a m i D M D , c o z n a c z y
d y s t r o f i a m i [n i o w a D u c h a n n e ' a , p o n i e w a | m u t a c j e w o b r b i e t e g o g e n u p r o w a d z d o p e w n e j
u w a r u n k o w a n e j g e n t y c z n i e c h o r o b y m i [n i - d y s t r o f i a m i [n i o w a D u c h a n n e ' a .
- w i e l k o [ e k s o n u w y n o s i o k o Bo 7 0 p z . i z r e g u By z a l e |y o d w i e l k o [c i g e n u , c z y l i m a Be g e n y m a j
m a Be e k s o n y , d u |e g e n y m a j d u |e e k s o n y . N a j w i k s z y m z n a n y m e k s o n e m u c z Bo w i e k a j e s t
e k s o n 2 6 - s t y , w y s t p u j c y w g e n i e k o d u j c y m b i a Bk o A p o B . A p o B , t o j e s t a p o l i p o p r o t e i n a ,
c z y l i b i a B- k o w c h o d z c e w s k Ba d l i p o p r o t e i n o s o c z a i w i e l k o [ t e g o e k s o n u w y n o s i 7 , 6 k b .
R ó w n i e | w i e l k o [ i n t r o n u z a l e |y o d w i e l k o [c i g e n u . N a j w i k s z y i n t r o n s t w i e r d z a s i w g e n i e
k o d u j c y m d y s t r o f i n e . J e g o d Bu g o [ w y n o s i 3 0 k b , a s k o r o j u | j e s t e [m y j u | p r z y g e n i e D M D , j e g o
d Bu g o [ w y n o s i 2 , 5 m l n p a r z a s a d , c z y l i j e s t g e n e m o g r o m n y m . T u t a j m a m y p o k a z a n y g e n
i n s u l i n y , w i e l k o [ g e n u 1 4 0 0 p z . z a l e d w i e 3 e g z o n y . N a p r z e c i w s t a w n y m b i e g u n i e m a m y g e n
d y s t r o f i i , c z y l i t e n D M D , k t ó r e g o w i e l k o [ w y n o s i 2 , 5 m l n . p z i k t ó r y p o s i a d a 7 9 e g z o n ó w , c z y l i t o
p o k a z u j e j a k o g r o m n r ó |n o r o d n o [ p o s i a d a g e n o m c z Bo w i e k a . J a k z o r g a n i z o w a n y j e s t g e n o m
c z Bo w i e k a ? G e n o m c z Bo w i e k a m o |n a p o d z i e l i n a d w i g Bó w n e f r a k c j e , n a j w a |n i e j s z a t o j e s t
g e n o m j d r o w y , k t ó r y m s i z a c h w i l s z c z e g ó Bo w o z a j m i e m y , a d r u g a f r a k c j a t o j e s t g e n o m
m i t o c h o n d r i a l n y - o k t ó r y m m ó w i Be m o s t a t n i o . S p o [r ó d 8 0 0 0 0 g e n ó w z a l e d w i e 3 7 - p r z y p o m i n a m -
w y s t p u j e w g e n o m i e m i t o c h o n d r i a l n y m .
O r g a n i z a c j a g e n o m u w k o m ó r c e
G e n o m j d r o w y
G e n y ( 3 0 % ) P o z a g e n y ( 7 0 % )
E k s o n y ( 1 0 % ) I n t r o n y ( 9 0 % ) U n i k a t o w e ( 8 0 % ) P o w t a r z a l n e ( 2 0 % )
Z g r u p o w a n e R o z p r o s z o n e
G e n o m p o z a j d r o w y
( m i t o c h o n d r i u m )
P a t r z c n a g e n o m j d r o w y t o z n a c z n i e m n i e j s z c z [ s t a n o w i f r a g m e n t y D N A , k t ó r e k o d u j (
s z a c u j e s i , |e o k 3 0 % t o j e s t D N A k o d u j c e a o k . 7 0 % m a t e r i a Bu g e n e t y c z n e g o t w o r z y t z w .
p o z a g e n o w y D N A ) . T e r a z p r z y j r z y j m y s i n a j p i e r w g e n o m . S e k w e n c j e k o d u j c e z a l e d w i e 1 0 % z
t y c h 3 0 % , n a t o m i a s t w w i k s z o [c i s t o s e k w e n c j e n i e k o d u j c e , k t ó r e p r z e z n a s z u |y t e k m o |m y
j e o g ó l n i e n a z w a i n t r o n a m i . N a t o m i a s t p o z a g e n o w y D N A t w o r z y d w i e z a s a d n i c z e f r a k c j e a
m i a n o w i c i e t z w . s e k w e n c j e u n i k a t o w e , k t ó r y c h j e s t o k . 8 0 % a 2 0 % s t a n o w i t z w . s e k w e n c j e
p o w t ó r z o n e . Z k o l e i s e k w e n c j e p o w t ó r z o n e d z i e l s i j e s z c z e n a d w i e f r a k c j e m i a n o w i c i e
s e k w e n c j e z g r u p o w a n e i s e k w e n c j e r o z p r o s z o n e . W a r t o p a m i e t a o t y m p r z y p o m n i a Be m
p o p r z e d n i o , |e g e n y c z Bo w i e k a m a j c h a r a k t e r n i e c i a g By , s e k w e n c j e e g z o n o w e s p o p r z e d z i e l a n e
s e k w e n c j a m i i n t r o n o w y m i p o z a k i l k o m a w y j t k o w y m i m i a n o w i c i e g e n y c i g Be s p o t y k a m y w
m i t o c h o n d r i u m , g e n y c i g Be k o d u j h i s t o n y . W i e k s z o [ m a By c h g e n ó w k o d u j a c y c h c z s t e c z k i
t R N A r ó w n i e | m a j c h a r a k t e r c i g By , d a l e j g e n y n i e k t ó r y c h r e c e p t o r ó w h o r m o n a l n y c h .
W y m i e n i a s i , |e n a l e |y d o n i c h r e c e p t o r d o p a m i n e r g i c z n y t y p u I , r e c e p t o r d o p a m i n e r g i c z n y
t y p u V - o n i c h j u | w i c e j n a b i o c h e m i p a Ds t w o o d e m n i e n i e u s By s z , n a t o m i a s t t r z e c i t u
w y m i e n i o n y r e c e p t o r d l a b r a d y k i n i n y t y p u I I b d z i e j a k z By s e n s i c z s t o p o j a w i a B. N o i n p .
t a k i m g e n e m j e s t g e n p r o d u k u j c y i n t r f e r o n a l f a , o k t ó r y m w i c e j p o w i e m p r z y o m a w i a n i u
c y t o k i n u k B. i m m u n o l o g i c z n e g o . T e r a z z a j m i e m y s i s e k w e n c j a m i , k t ó r e m a j c h a r a k t e r
s e k w e n c j i p o w t ó r z o n y c h . P i e r w s z a g r u p a s t o d u |e b l o k i n a l e |c e d o s e k w e n c j i z g r u p o w a n y c h ,
s t o t z w . s a t e l i t y , c z y l i s a t e l i t a r n y D N A . T a k a j e d n o s t k a , k t ó r a u l e g a p o w t ó r z e n i u l i c z y o d 2 0 0 -
5 0 0 0 p z i o n e p r a k t y c z n i e n i e m a j z n a c z e n i a w d i a g n o s t y c e m o l e k u l a r n e j , k t ó r s i z a j m u j e m y i
d o n i c h n i e b d z i e m y w r a c a , s Bu | m . i n . d o i d e n t y f i k a c j i c h r o m o s o m ó w . N a t o m i a s t n a s
i n t e r e s u j p o w t ó r z e n i a r o z p r o s z o n e , k t ó r y m i z a i n t e r e s o w a n i e d a t u j e s i n a o k . o s t a t n i e 1 0 l a t , s
t o t z w . m i n i - i m i k r o - s a t e l i t y . C o t o s m i n i s a t e l i t y ? O n e p o j a w i a j a s i z c z s t o [c i 2 - 4 0 0 ,
j e n o s t k a , k t ó r a s i p o w t a r z a t o j e s t o d 7 d o 1 0 0 p z . i o n e m a j z n a c z e n i e w d i a g n o s t y c e
m o l e k u l a r n e j , n a t o m i a s t n a j b a r d z i e j c i e k a w s t r u k t u r s m i k r o s a t e l i t y , k t ó r e o b e j m u j j e d n o s t k i
p o w t a r z a j c e s i o d 1 - 6 p z , n a j i n t e n s y w n i e j z g Bb i a n e j e s t w y s t p o w a n i e p o w t ó r z e D 3 i 4
n u k l e o t y d o w y c h . J a k a j e s t f u n k c j a m i k r o s a t e l i t t o n i k t n a p r a w d n i e w i e . O n e w y s t p u j p o z a
g e n a m i , c z y l i n i e k o d u j b i a Bk a , n a t o m i a s t r a z e m z g e n e m m o g u l e c t r a n s k r y p c j i i p r z y p u s z c z a
s i , |e j e d n z i c h f u n k c j i m o |e b y s t a b i l i z a c j a t r a n s k r y p t u p r z e d d z i a Ba n i e m e n z y m ó w
n u k l e o l i t y c z n y c h , k t ó r e m o g By b y t e n t r a n s k r y p t z d e g r a d o w a p o d c z a s j e g o d r o g i d o r y b o s o m u .
M e t o d o l o g i s Bu |c d o b a d a n i a m i k r o s a t e l i t ó w j e s t t e c h n i k a z w a n a S T R ( s h o r t t a n d e m r e p e a t )
c o z n a c z y k r ó t k i p o w t ó r z e n i a t a n d e m o w e . W s k u t e k w y s t p i e n i a j a k i e [ m u t a c j i w w y n i k u a n a l i z y
p o j a w i a j c y c h s i m i k r o s a t e l i t w z o r z e c w y s t p u j a c y u d a n e g o c z Bo w i e k a m o |e u l e c z m i a n i e i
b a d a j c d z i d z i c z e n i e g e n u r a z e m z u k Ba d e m s p r z |e D z t y m i m i k r o s a t e l i t a m i m o |n a w n o s i o
d e f e k c i e g e n u b e z b e z p o [r e d n i e g o b a d a n i a t e g o g e n u - w y Bc z n i e n a p o d s t a w i e r o z k Ba d u s e k w e n c j i
m i k r o s a t e l i t a r n y c h , k t ó r e u p e w n y c h o s ó b w w y n i k u m u t a c j i m o g z a n i k n . P o p r o s t u w w y n i k u
m u t a c j i n i e p o j a w i s i t a j e d n o s t k a p o w t ó r z o n a - t o j e s t o c z y w i s t e . S z c z e g ó l n i e j e d n o s t k
c h o r o b o w , w k t o r e j b a d a s i p o l i m o r f i z m s e k w e n c j i m i k r o s a t e l i t a r n y c h j e s t r a k j e l i t a g r u b e g o
r z w i j a j c y s i n a p o d Bo |u r o d z i n n e j p o l i p o w a t o [c i . S o s o b y , k t ó r e m a j p e c h a i k t ó r e w w y n i k u
p e w n e g o g e n u m a j c a Be j e l i t o g r u b e u s i a n e t y s i c a m i p o l i p ó w i j e s t t o s t a n p r z e d r a k o w y ,
p o n i e w a | p o l i p y u l e g a j t r a n s f o r m a c j i n o w o t w o r o w e j i r y z y k o w y s t p i e n i a t a k i e g o n o w o t w o r u
m o |n a o c e n i n a p o d s t a w i e a n a l i z y g e n o t y p u a k o n k r e t n i e w y s t p o w a n i a k r ó t k i c h p o w t ó r z e D
t a n d e m o w y c h . T e r a z p r z e j d z i e m y d o b a d a n i a t e g o D N A , k t ó r y k o d u j e . O d z a w s z e w i e l k k
t r u d n o [c i w b a d a n i u D N A b y Bo t o , |e b y Bo g o w k o m ó r c e m a Bo - z b y t m a Bo a b y u |y t y p o w e
m e t o d y c h e m i c z n e d o a n a l i z y . I n a j b a r d z i e j s t a r y m i h i s t o r y c z n i e m e t o d a m i , c h o c i a | d a l e j
u |y w a n y m i j e s t b a d a n i e D N A n i e a m p l i f i k o w a n e g o , c z y l i t y l e i l e u z y s k a l i [m y w k o m ó r c e t y l e
b a d a m y . S k o r o r u t y n o w e t e c h n i k i b a d a w c z e t u t a j z a w o d z t o m u s i m y z n a l e [ w z m a c n i a c z , k t o r y
w y k r y w a d a n c z s t e c z k e D N A i t u t a j m u s i m y u c i e c s i d o h y b r y d y z a c j i i d o s t r u k t u r y z w a n
s o n d m o l e k u l a r n . S o n d a m o l e k u l a r n a j e s t z n a k o w a n a , z j w i s k o k t ó r e p o k a z a Be m n o s i n a z w
h y b r y d y z a c j i , c z y l i s o n d a m o l e k u l a r n a k i e d y n a p o t k a k o m p l e m e n t a r n y f r a g m e n t D N A t o n a
t a k i e j s a m e j z a s a d z i e j a k t u w y s t p u j e c h o c i a | b y w p r o c e s i e r e p l i k a c j i n a s t p u j e
k o m p l e m e n t a r n e p o Bc z e n i e z d a n y m n a s z y m D N A . D a w n i e j z n a c z n i k i e m b y By g Bó w n i e i z o t o p y
p r o m i e n i o t w ó r c z e i m e t o d r a d i o a u t o g r a f i i n a l e |a Bo p r z y Bo |y k l i s z f o t o g r a f i c z n i s p r a w d z i
c z y d a n y g e n c z y f r a g m e n t g e n u z o s t a B w y k r y t y c z y t e n i e . O b e c i e u |y w a n e z n a c z n i k i s t o
z n a c z n i k i f l u o r e s c e n c y j n e , t a k |e m o |n a b e z u |y w a n i a p r . j o n i z u j c e g o i d e n t y f i k o w a p r o c e s
h y b r y d y z a c j i Z n a c z n y p o s t p r o z w o j u b i o l o g i i m o l e k u l a r n e j b y B m o |l i w y d z i k i z a s t o s o w a n i u
t e c h n i k , k t ó r e a m p l i f i k u j D N A . A m p l l f i k o w a D N A m o |e m y i n v i v o i t a k a m e t o d a n o s i n a z w
k l o n o w a n i a , d o t e g o c e l u n a s z y m i n i e w o l n i k a m i s b a k t e r i e , k t ó r e t r e s u j e m y w t a k i s p o s ó b , |e b y
z w Ba s n y m c h r o m o s o m e m b a k t e r y j n y m r e p l i k o w a By w k o l e j n y c h c y k l a c h p o d z i a Bo w y c h
w p r o w a d z o n y p r z e z n a s D N A w f o r m i e w e k t o r a p l a z m i d o w e g o . M e t o d a t a z n a l a z Ba z a s t o s o w a n i e
g Bó w n i e w b i o t e c h n o l o g i i i w p r o d u k o w a n i u e n z y m ó w c z y h o r m o n ó w . O s z u k u j e m y b a k t e r i i o n a
p o p r o s t u o d t w a r z a n a s z e D N A . N a t o m i a s t c a l k o w i t y p r z e Bo m n a s t p i B w w y n i k u w p r o w a d z e n i a
d o b a d a D t e c h n i k i a m p l i f i k a c j i g e n u i n v i t r o , k t ó r a p o w s z e c h n i e z n a n a j e s t m e t o d P C R - r e a k c j a
Ba Dc u c h o w a p o l i m e r a z y ( p o l i m e r a s e c h a i n r e a c t i o n ) A l e n a j p i e r w z a j m i e m y s i t y m i m e t o d a m i ,
k t ó r e d o t y c z y By m a t e r i a Bu n i e z a m p l i f i k o w a n e g o . P i e r w s z y e t a p , g d z i e n a s t p u j e h y b r y d y z a c j a z
s o n d m o l e k u l a r n . D a w n i e j s t o s o w a n e b y By m e t o d y h y b r y d y z a c j i w r o z t w o r a c h , a l e b y By
u c i |l i w e , w i c o p r a c o w a n o m e t o d p r z e n o s z e n i a k w a s ó w n u k l e i n o w y c h n a n o [n i k i s t a Be . T y m
s t a By m n o s n i k i e m j e s t n i t r o c e l u l o z a l u b n y l o n . M o |l i w e b y Bo i m m o b i l i z o w a n i e m a t e r i a Bu
g e n e t y c z n e g o i d z i a Ba n i e s o n d m o l e k u l a r n w f a z i e s t a Be j i o b e c n i e t e m e t o d y m a j n a j w i k s z e
z a s t o s o w a n i e . N o i w r e s z c i e p i e [D o s t a t n i c h l a t t o j e s t t e c h n i k a F I S H ( f l u o r e n c e n s i n s i t u
h y b r y d y s a t i o n ) c z y l i h y b r y d y z a c j a f l u o r e s c e n c y j n a i n s i t u , o z n a c z a t o , |e c e l e m
p r z e p r o w a d z e n i a r e a k c j i h y b r y d y z a c j i , n i e m u s i m y w o g ó l e i z o l o w a m a t e r i a Bu g e n e t y c z n e g o z
k o m ó r k i , t y l k o m a j c p r e p a r a t c y t o l o g i c z n y n a s z k i e Bk u p o d s t a w o w y m , d z i a Ba m y s o n d
m o l e k u l a r n , k t o r a n a p o z i o m i e c h o r o m o s o m u w y k r y w a n a m i s t n i e j c y a l l e l l u b s e k w e n c j
p o s z u k i w a n , i n f o r m u j e n a s o t y m m ó w i c t r y w i a l n i e [w i e c c
A l e t e r a z s z c z e g ó Bo w o z a j m i e m y s i h y b r y d y z a c j i m m o b i l i z o w a n e g o D N A . T e c h n i k a n o s i
n a z w b l o t t i n g u . B l o t t i n g j e s t t o t r a s f e r D N A n a f i l t r ( n i t r o c e l u l o z o w y a l b o n y l o n o w y ) i t u n i e
m o g b y p a Ds t w u o b c e t r z y p o j c i a . M i a n o w i c i e p i e r w s z e t o j e s t N o r t h e r n b l o t t i n g -
m a t e r i a l e m p r z e z n a s p o s z u k i w a n y m , d i a g n o z o w a n y m j e s t R N A i R N A j e s t p r z e n o s z o n e n a
o d p o w i e d n i f i l t r i n a s t p u j e h y b r y d y z a c j a z s o n d m a o l e k u l a r n k t ó r j e s t D N A z n a k o w a n y .
S k o r o m a m y m R N A t o Ba t w o z g a d n , |e m a m y t r a n s k r y p t a c h c e m y s i d o w i e d z i e c z e g o t o j e s t
t r a n s k r y p t ? D o s z Bo d o e k s p r e s j i g e n u z a d a j m y s o b i e p y t a n i e j a k i e g o g e n u ? T a k i e j e s t
z a s t o s o w a n i e t e c h n i k i N o r t h e r n b l o t t i n g . T e c h n i k a S o u t h e r n b l o t t i n g t o j e s t t e c h n i k a , w k t ó r e j
i m m o b i l i z u j e m y n a f i l t r z e n i t r o c e l u l o z o w y m l u b n y l o n o w y m D N A i h y b r y d y z u j e m y g o r ó w n i e |
s o n d D N A , c z y l i t o b a d a n i e n i e p r o w a d z i m y n i e n a t r a n s k r y p c i e t y l k o n a g e n i e D N A . J e s t t o
t e c h n i k a s z e r o k o s t o s o w a n a w i d e n t y f i k a c j i o s o b n i c z e j . N o i w r e s z c i e z t y m i d w o m a p o j c i a m i
t r u d n o p o m i n W e s t e r n b l o t t i n g , W e s t e r n b l o t t i n g n i e d o t y c z y D N A , j e s t t o t e c h n i k a
p o l e g a j c a n a p r z e n i e s i e n i u n a p o d Bo |e s t a Be r o z d z i e l o n y c h e l e k t r o f o r e t y c z n i e b i a Be k . A l e n a
p o d s t a w i e m a s y c z s t e c z k o w e j t r u d n o n a m o d p o w i e d z i e n a p y t a n i e c o t o z a b i a Bk o ? T a k i m
j e d y n y m f a k t y c z n y m s p o s o b e m p o w i e d z e n i a t o j e s t t o b i a Bk o t o j e s t z a d z i a Ba n i e p r z e c i w c i a Be m
m o n o k l o n a l n y m w y k r y w a j c y m d a n s e k w e n c j a m i n o k w a s o w d a n d e t e r m i n a n t a n t y g e n o w i
w t e d y b i a Bk o n a s z e j e s t w y k r y w a n e p r z e c i w c i a Be m p r z e c i w k o b i a Bk u ( n i e m a t u |a d n e j
h y b r y d y z a c j i z s o n d m o l e k u l a r n a n i k w a s ó w n u k l e i n o w y c h ) I t u m a m y n a s z t e c h n i k
S o u t h e r n b l o t t i n g , m a m y w y s o k o c z s t e c z k o w y D N A , k t ó r y w y i z o w a l i [m y n p . z k r w i
o b w o d o w e j , n a s t p n i e t r a w i m y j e e n d o n u k l e a z a m i i d o k o n u j e m y r o z d z i a Bu e l e k t r o f o r e t y c z n e g o ,
n a s t p n i e p r z e n o s i m y p r z y u |y c i u s p e c j a l n e g o u r z d z e n i a d o t r a s f e r u n a n i t r o c e l u l o z e a l b o n a
n y l o n i d z i a Ba m y s o n d m o l e k u l a r n w t a k i m p i e c u h y b r y d y z a c y j n y m - t a k n a z y w a s i t o
u r z d z e n i e , u l e g a t o m i e l e n i u p r z e z k i l k a d o k i l k u n a s t u g o d z i n i n a s t p n i e u z y s k u j e m y w z ó r
a u t o r a d i o g r a f i c z n y . P r |k i p o w s t a Be s t o p r |k i g d z i e n a s t p i Ba h y b r y d y z a c j a , c z y l i j e [l i m a m y
j a k i [ m a r k e r , k t ó r y w y k r y w a m y i m a m y d l a n i g o k o m p l e m e n t a r n s o n d m o l e k u l a r n t y l k o
w t e d y k i e d y o n w y s t p u j e s o n d a g o r o z p o z n a j e . J e [l i n a s t p i Ba m u t a c j a t o s e k w e n c j a
n u k l e o t y d o w a j e s t i n n a , w ó w c z a s s o n d a m o l e k u l a r n a z t a k i m f r a g m e n t e m s i n i e Bc z y i p r |k a
r a d i o g r a f i c z n e g o t u n i e w i d z i m y . D o d z i [ t e c h n i k a S o u t h e r n b l o t t i n g u |y w a n a j e s t b a r d z o c z s t o
w a n a l i z i e o s o b n i c z e j j a k o t z w . D N A f i n g e r p r i n t i n g , c z y l i b a d a n i e t y p u o d c i s k p a l c a . D N A u l e g a
t r a w i e n i u e n z y m a m i c z s t o t n c y m i , a p o n i e w a | k a |d y z n a s r ó |n i s i o d d r u g i e j o s o b y
s e k w e n c j a m i g e n o t y p u t o k a |d y m a b a r d z o c h a r a k t e r y s t y c z n y u k Ba d p r |k ó w . A t u t a j m a m y
t e c h n i k F I S H , m a m y p r e p a r a t c y t o l o g i c z n y t o n i c i n n e g o j a k c h r o m o s o m y , p o d a j e m y s o n d
z n a k o w a n f l u o r e s c e n c y j n y m b a r w n i k i e m , p o z w a l a m y n a h y b r y d y z a c j z c h r o m o s o m e m , n i e
d o p r o w a d z m y d o i z o l o w a n i a m a t e r i a Bu g e n e t y c z n e g o , c z y l i j a k a s z y b k o [ p o t |n a t e g o t y p u
b a d a n i a , a n a s t p n i e w m i k r o s k o p i e f l u o r e s c e n c y j n y m p a t r z y m y c z y g d z i e [ n a m [w i e c i , n o i
w i d z i m y |e t u t a j [w i e c i t o j a k i [ m a r k e r g e n e t y c z n y z o s t a B w y k r y t y .
A M P L I F I K A C J A D N A
P i e r w s z m e t o d k l o n o w a n i e m s i n i e z a j m u j e m y , c e l e m k l o n o w a n i a j e s t u z y s k a n i e
z a m p l i f i k o w n e g o c a Be g o f r a g m e n t u g e n u , p o n i e w a | w p r z e c i w i e Ds t w i e d o t e c h n i k i P C R
f r a g m e n t y , k t ó r e a m p l i f i k u j e m y m a g b y z n a c z n i e w i k s z e , m o g b y n a w e t d o 2 0 0 0 0 0 0
p z , c z y l i c a By g e n m o |e u l e c a m p l i f i k o w a n i u . N a t o m i a s t o g r a n i c z e n i e m t e c h n i k i P C R j e s t
w i e l k o [ a m p l i f i k o w a n e g o f r a g m e n t u D N A , k t ó r a n i e p r z e k r a c z a 5 0 0 0 p z . ( 5 k b ) N o i j e s t t u
p o k a z a n e |e m u s i m y n a s z D N A w s t w i w p l z m i d , n a s t p n i e p l a z m i d w s t a w i w b a k t e r i ,
b a k t e r i a p o d c z a s k o l e j n y c h p o d z i a Bó w o d t w a r z a n a s z p l a z m i d z z a w a r t y m t a m g e n e m i n a s t p n i e
w y c i g a m y t o z b a k t e r i i u [m i e r c a j c j , a l e o n j e s t t a k i m s w o i s t y m p e r p e t u m m o b i l e i p o
o c z y s z c z e n i u w y p r o d u k o w a n e g o b i a Bk a m a m y g o t o w i n s u l i n , a l b o h o r m o n w z r o s t u . N a t o m i a s t
w l a b o r a t o r i u m i t o d z i s i a j z o b a c z y c i e w y k o n u j e m y b a d a n i e z w a n e a m p l i f i k a c j g e n u i n v i t r o ,
c z y l i t e c h n i k P C R . D o P C R - u n i e p o t r z e b u j e m y |a d n y c h w i e l k i c h s k o m p l i k o w a n y c h u r z d z e D,
c a Be u r z d z e n i e j e s t w i e l k o [c i t e g o r z u t n i k a i n o s i n a z w t e r m o c y k l e r a a l b o t e r m o b l o c k u i w t y m
n a s z y m u k Ba d z i e i n v i t r o o d t w a r z a m y d o k Ba d n i e t o c o z a c h o d z i p o d c z a s r e p l i k a c j i D N A w
k o m ó r c e , c z y l i s p r a w a j e s t g e n i a l n i e p r o s t a , a p o n i e w a | j e s t g e n i a l n i e p r o s t a w 1 9 9 9 3 k . B u l l i s
o t r z y m a B n a g r o d N o b l a . T e c h n i k a P C R : n a j p i e r w m u s i m y w y i z o l o w a D N A ( w y s t a r c z y D N A z
j e d n e j k o m ó r k i ) w p r z e c i w i e Ds t w i e d o t e c h n i k h y b r y d y z a c y j n y c h m o |e m y m i e c o d 5 0 - 1 0 0 r a z y
m n i e j D N A |e b y t o b a d a n i e w y k o n a . . . i d o k Ba d n i e s a m t y l k o z a p o [r e d n i c t w e m
e n z y m ó w . N a t o m i a s t m y d o t e g o c e l u w y k o r z y s t u j e m y t e m p e r a t u r . N a s t p n i e d o n a s z e g o
w y i z o l o w a n e g o D N A - m u s i m y w i e d z i e c o c h c e m y a m p l i f i k o w a , c z y l i m u s i m y z n a
s e k w e n c j n u k l e o t y d ó w w a n a l i z o w a n y m f r a g m e n c i e - m i a n o w i c i e j e [l i m a m y d w i e n i c i D N A
o d p o w i e d n i o s p o l a r y z o w a n e - t a k b d z i e p o w s t a w a Ba n o w a n i o d k o Dc a 5 ' - t o o n a m u s i o d
k t ó r e g o [ m i e j s c a z a c z i m y m u s i m y w p r o w a d z i r o d z j p r i m e r a , t o s k a w a Bk i s k Ba d a j c e s i z
k i l k u n a s t u k a w a Bk ó w n o d o 3 0 n u k l e o t y d ó w , a l e p o t o a b y s i o n e n a m w t y m m i e j s c u
p r z y Bc z y By d o m a t r y c y . . . c z y l i o g r a n i c z a j c a m p l i f i k o w a n y D N A . O n a m u s i m i e j a k Ba t w o
z g a d n w o l n g r u p 3 ' , b o i n a c z e j n i e m o g Ba b y t u d z i a Ba p o l i m e r a z a D N A , c z y l i p o w o l i
z n a j d u j e m y c o d o t e j z u p y m u s i m y w r z u c i . M u s i m y w r z u c i m a t r y c o w y D N A k t o r y u l e g B
d e n a t u r a c j i , n a s t p n i e w r z u c a m y s t a r t e r y , j a k Ba t w o z g a d n m u s i m y m i e d w a , b o z r ó w n o
s e k w e n c j a n a j e d n e j f l a n c e j a k i n a d r u g i e j j e s t o d m i e n n a , c z y l i m a m y d w a s t a r t e r y . N a s t p n i e
m u s i m y m i e e n z y m , k t ó r y t o w s z y s t k o b d z i e r o b i B, c z y l i p o l i m e r a z D N A n o i w r e s z - c i e
m u s i m y m i e c e g i e Bk i , z k t ó r y c h t o w s z y s t k o j e s t z b u d o w a n e , c z y l i m u s i m y m i e t r ó j f o f o r a n y
d e z o k s y r y b o n u k l e o t y d ó w ( d N T P ) ; O d p o w i e d n i b u f o r ; p o l i m e r a z a ; s t a r t e r y ; m a t r y c a ; - t o j e s t
p r z e p i s n a n a s z z u p , a n a s z y m g a r n k i e m s p r o b ó w k i . N o i w k o l e j n y c h e t a p a c h p o z w i z a n i u
s t a r t e r ó w n a s t p u j e z w i e l o k r o n i e n i e n a s z e g o a n a l i z o w a n e g o D N A , k t ó r y m o |e m y t e c h n i k
e l e k t r o f o r t y c z n w y k r y n o a b a r d z i e j w y r a f i n o w a n y m s p o s o b e m j e s t s t o s o w a n i e u |d z e n i a ,
k t ó r e n a m m i e r z y i l e z a m p l i f i k o w a l i [m y D N A . R e a k c j a p r z e b i e g a w n a s t p u j c y c h e t a p a c h :
- d e n a t u r a c j a , k t ó r a z a c h o d z i w 9 5 o C , d l a k o n k r e t n e j r e a k c j i j e s t o n a k o n k r e t n i e d o b i e r a n a , a l e z
r e g u By j e s t t o t a t e m p e r a t u r a , k i e d y n i c i s i o d s i e b i e o d d z i e l a j
- n a s t p n i e t e m p e r a t u r o b n i |a m y , d o j a k i e j z a c h w i l p o w i e m , a b y d o Bc z a s t a r t e r y , i t o Bc z e n i e
s t a r t e r ó w n o s i n a z w a n n e a l i n g ( c z y t a j a n i l i n g ) . K a |d y D N A m a o k r e [l o n t e m p e r a t u r
t o p n i e n i a , k t ó r o z n a c z a m y T m i t e m p e r a t u r a a n n e a l i n g u j e s t d o b i e r a n a d l a k a |d e g o u k Ba d u
e k s p e r y m e n t a l n i e l u b n a p o d s t a w i e p e w n y c h k a l k u l a c j i i w y n o s i o 5 0 m n i e j w s t o s u n k u d o T m .
J e [l i t e m p e r a t u r a j e s t z b y t n i s k a n a s t p u j e n i e s w o i s t e p r z y Bc z a n i e r ó |n y c h n u k l e o t y d ó w , a n i e
t y c h , n a k t ó r y c h b y n a m z a l e |a Bo .
- p o p r z y Bc z e n i u s t a r t e r ó w n a s t p u j e p o d w y |s z e n i e t e m p e r a t u r y i w t e j t e m p e r a t u r z e z a c z y n a
d z i a Ba p o l i m e r a z a D N A , k t ó r a w y d Bu |a Ba Dc u c h .
N o i r e a k c j a z a c z y n a p r z e b i e g a o d p o c z t k u , p o d w y |s z e n i e t e m . , d e n a t u r a c j a , i t d o k . 2 5 - 3 5 r a z y
c o z a j m u j e o k . 3 h . N a s t p n i e u r z d z e n i e m o |n a z o s t a w i n a n o c , s c h Ba d z a n a s z p r e p a r a t d o t e m .
4 0 C . T a t e m p e r a t u r a d e n a t u r a c j i ( T m ) z a l e |y o d :
- d Bu g o [c i Ba Dc u c h a , i m Ba Dc u c h d Bu |s z y , t y m t r z e b a p r z y Bo |y w i c e j e n e r g i i |e b y g o
z d e n a t u r o w a
- s k Ba d z a s a d , c z y l i o d s e t k o w e g o % p a r G - C , k t ó r e s z Bc z o n e 3 w i z a n i a m i w o d o r o w y m i , a p a r a
A - T d w o m a , c z y l i t r z e b a w i c e j e n e r g i i d o d e n a t u r a c j i
- [r o d o w i s k a c h e m i c z n e g o . G Bó w n y m c z y n n i k i e m s t a b i l i z u j c y m s j o n y s o d u , n a t o m i a s t
g Bó w n y m c z y n n i k i e m d e s t a b i l i z u j c y m s c z y n n i k i d e n a t u r u j c e , c z y l i n a j c z [c i e j u |y w a n y j e s t
m o c z n i k
J a k i e j e s t g Bó w n e o g r a n i c z e n i e t e j m e t o d y :
- n o o p r ó c z t r g o , |e m u s i m y z n a s e k w e n c j e g e n u , a w Ba [c i w i e f l a n k u j c e , a t e g o w k l o n o w a n i u
n i e p o t r z e b u j e m y z n a
- d r u g i m o g r a n i c z e n i e m j e s t w i e l k o [, j a k p o w i e d z i a Be m n i e m o |e p r z e k r a c z a 5 t y s . z a s a d
- t r z e c i m o g r a n i c z e n i e m j e s t t o , |e t a p o l i m e r a z a p o p e Bn i a b Bd y . P o 2 0 o b r o t a c h r e a k c j i P C R , w
4 0 % z a w a r t y c h t a m z a m p l i f i k o w a n y c h o d c i n k ó w D N A s b Bd y . D l a c z e g o t a m s b Bd y . O t ó r z
p o l i m e r a z y D N A p o z a d w o m a t u w y m i e n i o n y m i , k t ó r e u |y w a n e s w P C R , n i e p o s i a d a j
a k t y w n o [c i 3 ' - 5 ' n u k l e a z y , c z y l i n i e m a j t e g o f r a g m e n t u , k t ó r y w p o l i m e r a z i e b a k t e r y j n e j , c z y
w s o m a t y c z n y c h k o m ó r k a c h e u k a r i o t a , s p r a w d z a , c z y n u k l e o t y d z o s t a B w b u d o w a n y w s p o s ó b
p r a w i d Bo w y . A l e p o n i e w a | w p o z o s t a By c h c z s t e c z k a D N A w b u d o w a n i e n i e p r a w i d Bo w e g o
n u k l e o t y d u n a s t p u j e w s p o s ó b l o s o w y , a n i e z a w s z e w t y m s a m y m m i e j s c u - n i e p r a w i d Bo w e g o ,
d l a t e g o w d a l s z e j a n a l i z i e s e k w e n c y j n e j n i e m a t o w i k s z e g o z n a c z e n i a . A l e p r o s z o t y c h
p o m y Bk a c h p a m i t a . N a j b a r d z i e j h i s t o r y c z n p o l i m e r a z w r e a k c j i P C R b y B f r a g m e n t K l e n o v a
p o l i - m e r a z y D N A I , a l e t e n e n z y m m a t o o g r a n i c z e n i e , |e j e s t e n z y m e m t e r m o l a b i l n y m . A
p o n i e w a | r e a k c j e p r z e p r o w a d z a m y w z m i e n n e j t e m p e r a t u r z e , d o c h o d z c e j d o 9 5 0 C , t o z c z a s e m
d o c h o d z i Bo d o d e n a t u r a c j i e n z y m u i n a l e |a Bo w l e w a k o l e j n e j e g o p o r c j e , c o z n a c z n i e p o d r a |a Bo
j e g o b a d a n i e . W i c p r z y p o m n i a n o s o b i e , |e s o r g a n i z m y , k t ó r e l u b i w y s o k t e m p e r a t u r ,
|y j c e w c i e p By c h zr ó d Ba c h , g e i z e r a c h . I w y k r y t o T h e r m u s a q u a t i c u s , k t ó r a c e c h u j e s i
w y s t p o w a n i e m p o l i m e r a z y t e r m i c z n i e s t a b i l n e j i s t d u |y w a n i e w P C R p o l i m e r a z y T a q . I n n e
p o l i m e r a z a u |y w a n e s r z a d k o , z e w z g l d u n a t o , |e s k o s z t o w n e , n p . V e n t i P f u , k t ó r e m a j
a k t y w n o [ 3 ' 5 ' n u k l e a z o w , c z y l i s p r a w - d z a j , c z y p r a w i d Bo w o w Bc z y By n u k l e o t y d d o
w y d Bu |a n e j n i c i . N a t o m i a s t k o r z y [c i z e s t o s o w a n i a p o l i m e r a z y B s t j e s t m o |l i w o [ a m p l i f i k a c j i
b a r d z o d Bu g i c h f r a g m e n t ó w d o c h o d z c y c h d o 7 t y s . p a r z a s a d . C z y l i j e [l i w y b i e r a m y j a k i [
f r a g m e n t g e n u , k t ó r y m u s i u l e c a m p l i f i k a c j i i j e s t d Bu g i , w t e d y u c i e k a m y s i d o t a k i e j p o l i m e r a z y .
A c o r o b i m y , j e [l i n i e m a m y p i e n i d z y n a p o l i m e r a z B s t , a m a t e r i a B, k t ó r y m a m y a n a l i z o w a
d a l e j j e s t d Bu g i , t o w t e d y a m p l i f i k u j e m y p o s z c z e g ó l n e f r a g m e n t y g e n u , a l e t a k w y b i e r a m y , |e b y
p o s z c z e g ó l n e f r a g m e n t y z a c h o d z i By n a s i e b i e , j e [l i m a m y a m p l i f i k o w a b a r d z o d u |y g e n d o
b a d a D, o c z y w i [c i e n i e d o t e c h n i k i i n |y n i e r i i g e n e t y c z n e j , b o d o t e g o u |y w a m y k l o n o w a n i a . J a k i e
j e s t z a s t o s o w a n i e t e c h n i k i P C R :
- w y k r y w a n i e m u t a c j i i t y m s i z a j m i e m y p r z e d e w s z y s t k i m .
M e t o d y u |y w a n e w w y k r y w a n i u m u t a c j i d z i e l i m y n a :
> m e t o d y S c r e e n i n g - o w e , k t ó r e m a j o d p o w i e d z i e n a p y t a n i e : c z y w a n a l i z o w a n y m g e n i e
w y s t p i Ba m u t a c j a ? . W p r z y p a d k u p o z y t y w n e j o d p o w i e d z i n a t o p y t a n i e z a d a j e m y d r u g i e : N a
c z y m t a m u t a c j a p o l e g a ? C z y l i j i d e n t i f i k u j e m y , a j e [l i j u | j z i d e n t y f i k u j e m y i o k a z u j e s i , |e
o n a c z s t o w s p ó Bi s t n i e j e , t a k o n k r e t n a m u t a c j a , z e z n a n c h o r o b g e n e t y c z n t o u s t a l a m y d a l s z
m e t o d o l o g i e d l a w y s z u k i w a n i a t a n i e g o i s z y b k i e g o t e j k o n k r e t n e j m u t a c j i w c a Be j p o p u l a c j i .
W t e d y j a k j u | w i e m y n a c z y m p o l e g a , n i e r o z p o z n a j e m y u k a |d e g o p a c j e n t a , c z y l i n i e
r o z p o c z y n a m y o d s c r e e n i n g u , t y l k o w p r o s t w y k o n u j e m y m e t o d n a w y k r y w a n i e t e j k o n k r e t n e j
m u t a c j i .
M e t o d y , k t ó r e m a j z a s t o s o w a n i e w d i a g n o s t y c e m u t a c j i :
1 . P C R - H D
2 . P C R - S S C P
3 . P C R - D G G E
T o s m e t o d y , k t ó r e p a Ds t w a o b o w i z u j i j e s z c z e d w i e , n a t e m a t k t ó r y c h n i c n i e p o w i e m , b o t o
j e s t d l a u l t r a z a i n t e r e s o w a n y c h . I w r e s z c i e o b o w i z u j e p a Ds t w a m e t o d o l o g i a S e k w e n c j o n o w a n i a
D N A .
1 . P C R - H D c z y l i P C R h e t e r o d u p l e k s
P o r e a k c j i P C R , d o p r o w a d z a m y d o d e n a t u r a c j i p r o d u k t u P C R . A n a s t p n i e d o p r o w a d z a m y d o
r e n a t u r a c j i . N i c i Bc z s i z e s o b n a c h y b i B - t r a f i B w s p o s ó b l o s o w y . C o s i d z i e j e , j e |e l i o s o b a
j e s t h e t e r o z y g o t , c z y l i w j e d n y m g e n i e w y s t p i Ba m u t a c j a , t o w ó w c z a s m o |e m y m i e t a k i e
m o |l i w o [c i
- a l b o p o Bc z s i d w i e n i c i p r a w i d Bo w e
- a l b o p o Bc z s i d w i e n i c i z m u t o w a n e
- a l b o p o Bc z y n a m s i j e d n a n i p r a w i d Bo w a i j e d n a n i z m u t o w a n a - t o n a z y w a m y
h e t r o d u p l e k s e m
N a s t p n i e p o d d a j e m y n a s z m i e s z a n i n e k o m b i n a c j i - e l e k t r o f o r e z i e . W e l e k t r o f o r e z i e o b s e r w u j e -
m y , |e h e t e r o d u p l e k s y s n a j b a r d z i e j l e n i w e i n a j w o l n i e j m i g r u j w p o l u e l e k t r y c z n y m .
O g r a n i c z e n i a m e t o d y :
- j e [l i f r a g m e n t y m a j p o n i |e j 2 0 0 p z t o s k u t e c z n o [ m e t o d y u l e g a o b n i |e n i u , p r z y d Bu g o [c i
f r a g m e n t ó w d o 2 0 0 p z s k u t e c z n o [ m e t o d y w y n o s i 9 5 %
- w y k r y w a m u t a c j e p u n k t o w e , d l a c z e g o j e s t t o t a k i e w a |n e . G d y b y [m y w p r z y p a d k u m u t a c j i
p u n k t o w y c h w y i z o l o w a l i D N A i b a d a l i w y Bc z n i e t e c h n i k e l e k t r o f o r e z y , t o z m i a n y w m a s i e
c z s t e c z k o w e j a n a l i z o w a n e g o p r e p a r a t u s t a k m a Be , |e n i e j e s t e [m y w y k r y z m i a n w r u c h l i w o [c i
e l e k t r o f o r e t y c z n e j .
- n i e o k r e [l a n a m , w k t ó r y m m i e j s c u w y s t p i Ba m u t a c j a , b o o d p o w i a d a n a p y t a n i e c z y w y s t p i Ba .
2 . P C R - S S C P c z y l i s i n g l e s t r e n d e d c o m f o r m a t i o n p o l i m o r f i s m . P o l i m o r f i z m f r a g m e n t ó w j e d n o -
n i c i o w y c h . T o s a m o m a m y z a m p l i f i k o w a n y p r o d u k t , p o d d a j e m y g o d e n a t u r a c j i , c z y l i u z y s k u j e m y
f r a g m e n t y j e d n o n i c i o w e a n a s t p n i e f r a g m e n t y j e d n o n i c i o w e r o z d z i e l a m y e l e k t r o f o r e t y c z n i e , w
w a r u n k a c h |e l u n i e d e n a t u r u j c e g o . D l a c z e g o j e s t t o t a k i e i s t o t n e ? N a s z e f r a g m e n t y j e d n o n i c i w e
w w a r u n k a c h n i e d e n a t u r u j c y c h m o g w y k a z y w a p e w n e w e w n t r z n e s p a r o w a n i a . P r z y j m t a k
c i e k a w k o n f o r m a c j . J e |e l i n a s t p i t u w k t ó r y m [ m i e j s c u m u t a c j a , t e n k o n f o r m e r p r z y j m i e i n n y
k s z t a Bt n i | w s z y s t k i e p o z o s t a Be , w z w i z k u z c z y m w w a r u n k a c h |e l u n i e d e n a t u r u j c e g o j e g o
r u c h - l i w o [ e l e k t r o f o r e t y c z n a b d z i e z a l e |a Ba o d d w u c h c z y n n i k ó w : j e g o m a s y c z s t e c z k o w e j i
o d j e g o k o n f o r m a c j i p r z e s t r z e n n e j . J e |e l i z a s t o s o w a l i b y [m y |e l d e n a t u r u j c y n p . z d o d a t k i e m
m o c z n i k a t o w ó w c z a s n a s t p i z a r w a n i e t y c h w i z a D w e w n t r z n y c h i j e d y n i e r u c h l i w o [
e l e k t r o f o r e t y c z n a b d z i e z a l e |a Ba o d m a s y c z s t e c z k o w e j , a t a w p r z y p a d k u m u t a c j i p u n k t o w y c h
u l e g a b a r d z o n i e w i e l k i m z m i a n o m . J e [l i u l e g a w y p a d n i c i u d u |a c z [ n a s z e g o g e n u t o w p By w a
z n a c z n i e n a z m i a n m a s y c z s t e c z k o w e j , t o d o |a d n e j z t y c h m e t o d n i e m u s i m y s i u c i e k a t y l k o
d o k o n u j e m y z w y k Be j e l e k t r o f o r e z y , b o w t e d y r ó |n i c a w r u c h l i w o [c i j e s t w i d o c z n a " g o By m
o k i e m " i z t a k n a j p r o s t s z t e c h n i k r ó w n i e | s i n a w i c z e n i a c h z a p o z n a c i e : j e s t t o b a d a n i e
p o l i m o r f i z m u g e n u k o n w e r t u j c e g o , c z y l i A C . M n i e j w i c e j w Ba [c i w o [c i p o d o b n e d o H D :
- a n a l i z a f r a g m e n t u d o 2 0 0 p z
- w y k r y w a m u t a c j e p u n k t o w e
- n i e w y k r y w a m i e j s c a m u t a c j i
3 . P C R - D G G E c z y l i D e n a t u r a t i n g g r a d i e n t g e l e l k t r o f o r e s i s , c z y l i e l e k t r o f o r e z a w g r a d i e n c i e
c z y n n i k a d e n a t u r u j c e g o . F r a g m e n t y d w u n i c i o w e r o z d z i e l a m y e l e k t r o f o r e t y c z n i e , a w |e l u
w y t w a r z a m y g r a d i e n t a l b o c h e m i c z n y a l b o t e m p e r a t u r o w y . N a s z f r a g m e n t d w u n i c i o w y w d r u j e
t a k d Bu g o d o p u k i n i e t r a f i n a t a k i e s t |e n i e c z y n n i k a d e n a t u r u j c e g o , k t ó r y s p r a w i a , |e n i c i
d e n a t u r u j , c z y l i s i o d d z i e l a j i w t e d y f r a g m e n t d a l e j j u | n i e w d r u j e . J e [l i n a s t p i Ba m u t a c j a
p u n k t o w a p o w o d u j e t o , |e m i e j s c e w d r o w a n i a n a s t p u j e d o i n n e g o p u n k t u , n i | s i t o d z i e j e w
p r z y p a d k u g d y m u t a c j i n i e m a . J e s t t r u d n i e j s z a d o w y k o n a n i a , a l e m a t a k s a m w a r t o [ j a k
w c z e [n i e j o p i s a n e .
I t u j e s z c z e n a s z e p o z o s t a Be d w i e m e t o d y
4 . P C R - C C M , c z y l i c h e m i c a l c l e a n i n g o f m i s h m a s h e s , c z y l i c h e m i c z n e t r a w i e n i e m i e j s c z m u t o -
w a n y c h . k o s z t o w n a i n i e p o w s z e c h n i e u |y w a n a , a j e j z a l e t s d w i e r z e c z y , p o p i e r w s z e m o |n a
a n a l i z o w a z n a c z n i e w i k s z e f r a g m e n t y d o 1 0 0 0 p z , i m o |n a s i z o r i e n t o w a , w k t ó r y m m i e j s c u
n a s t p i Ba m u t a c j a . J e |e l i n a s t p i Ba w j a k i m [ m i e j s c u m u t a c j a , c h e m i c z n i e m o |n a t o m i e j s c e
o d p o w i e d n i o m o d y f i k o w a , i a l b o c h e m i c z n i e , a l b o e n z y m a t y c z n i e , w t y m m i e j s c u n a s z
p o w s t a By D N A s t r a w i . I l o k a l i z u j c w e l e k t r o f o r e z i e , w i e d z c j a k a j e s t r u c h l i w o [
e l e k t r o f o r e t y c z n a f r a g - m e n t ó w m o |n a d o w i e [, w k t ó r y m m i e j s c u n a s t p i Ba m u t a c j a , w
n a s t p s t w i e k t ó r e j d o s z Bo d o s t r a w i e n i a D N A w t y m m i e j s c u n a s z e g o a n a l i z o w a n e g o g e n u .
5 . P T T , c z y l i P r o t e i n t r u n c a t i o n t e s t . N i e z b y t p o p u l a r n a z e w z g l d u n a c e n i t o , |e j e s t j e s z c z e
w f a z i e e k s p e r y m e n t u . J e s t t o m e t o d a , k t ó r a w y k r y w a b i a Bk a n i e k o m p l e t n i e z s y n t e t y z o w a n e , w
s k u t e k w y s t p i e n i a w D N A m u t a c j i n o n s e n s o w n e j . M e t o d a j e s t i n t e l e k t u a l n i e i n t e r e s u j c a ,
b o w i e m n a s z w y i z o l o w a n y D N A , p r z e p u s z c z a s i w k o m ó r c e w u k Ba d z i e i n v i t r o p r z e z
s y n t e t y c z n y u k Ba d t r a n s k r y p c y j n o - t r a n s l a c y j n y . W w y n i k u t e g o u z y s k u j e m y w u k Ba d z i e i n v i t r o -
b i a Bk o . I a n a l i z u j c t o b i a Bk o p o d w z g l d e m j e g o m a s y c z s t e c z k o w e j , d e t e r m i n a n t
a n t y g e n o w y c h m o |e m y s t w i e r d z i , c z y z a b u r z e n i a w p r o d u k c j i b i a Bk a s w y n i k i e m o d d z i a By w a D
s u p r e s o r o w y c h ( m u t a c j a n o n s e n - s o w n a ) c z y t e | n i e . M e t o d a k o s z t o w n a m a Bo s t o s o w a n a
N o i w r e s z c i e j a k j u | o d k r y j e m y , |e g d z i e [ n a s t p i Ba m u t a c j a t y l k o j e s z c z e n i e w i e m y j a k a , t o
k o l e j n r z e c z j a k m u s i m y u s t a l i t o j e s t , w k t ó r y m m i e j s c u n a s t p i Ba . C z y l i D N A m u s i m y
p o d d a s e k w e n c j o n o w a n i u . I s n i e j d w i e m e t o d y :
1 . M e t o d a c h e m i c z n a M a x a m a - G i l b e r t a - r z a d k o s t o s o w a n a ,
2 . M e t o d a S a n g e r a z w a n a i n a c z e j D i d e o x y . D l a c z e g o s i t a k n a z y w a . D o n a s z e g o u k Ba d u
r e a g u - j c e g o w p r o w a d z a m y t a k i e o s z u k a Dc z e n u k l e o t y d y . T o s n u k l e o t y d y , z k t ó r y c h u s u w a m y
g r u p h y d r o k s y l o w z 3 a t o m u d e z o k s y r y b o z y , a w i e m y , |e p o l i m e r a z a m u s i m i e w o l n g r u p
3 ' O H d l a w y t w o r z e n i a w i z a n i a f o s f o d i e s t r o w e g o . C z y l i p o w p r o w a d z e n i u t a k i e g o f a Bs z y w e g o
n u k l e o t y d u , n a s t p u j e t e r m i n a c j a r e p l i k a c j i . P r o c e s p r o w a d z i m y w s e k w e n a t o r a c h , u r z d z e n i a d o
s e k w e n c j o n o w a n i a D N A w Ba [n i e t a k s i n a z y w a j . I z r e g u By a p a r a t y t e p r a c u j w t a k i m
s y s t e m i e , |e n a 4 [c i e |k a c h , m a m y c z t e r y n i e z a l e |n e e l e k t r o f o r e z y . A p r z e d t e m z a n i m d o t y c h
[c i e |e k d o j d z i e , m a m y c z t e r y n i e z a l e |n e P C R r o b i o n e . W k a |d y m z t y c h c z t e r e c h P C R - ó w i n n y
n u k l e o - t y d j e s t z m o d y f i k o w a n y . W r e a k c j i z w a n e j A - w p r o w a d z o n a j e s t a d e n i n a d i d e o x y ( d d A )
n a i n n [c i e |k d d C i d a l e j t y m i n a ( d d T ) i g u a n i n a ( d d G ) . W m o m e n c i , w k t ó r y m p o l i m e r a z a
c h c e w b u d o w a t a k i n u k l e o t y d n a s t p n y n i e j e s t j u | w b u d o w y w a n y , p o n i e w a | n i e m a g r u p y 3 ' i
r e p l i - k a c j a s t a j e . W w y n i k u e l e k t r o f o r e t y c z n e g o r o z d z i a Bu t e z n a k o w a n e , z m o d y f i k o w a n e
n u k l e o t y d y m o g b y z n a k o w a n e b a r w n i k a m i f l u o r e s c e n c y j n y m i i t a k n a j c z [c i e j j e s t , d e t e k t o r
l a s e r o w y u s t a w i a n a m s e k w e n c j e p o k o l e i d o Bc z a n y c h n u k l e o t y d ó w , k t ó r o d c z y t u j e m y z a
p o m o c s o f t w a r e - u n p . w y d r u k o w a n e n a d r u k a r c e . I t e r a z m o |e m y n a s z o d c z y t p o r ó w n a z t z w .
b i b l i o t e - k g e n ó w , c z y l i z g e n a m i p r a w i d Bo w y m i s z c z e p u d z i k i e g o .
N o i t e r a z t a k . W i e m y n a c z y m p o l e g a m u t a c j a i m a m y 1 0 0 0 o s ó b d o p r z e b a d a n i a n a o b e c n o [
t e j m u t a c j i i t u u |y w a m y j u | i n n y c h t e c h n i k . I z n o w u k i l k a m e t o d :
1 . P C R - R F L P , c z y l i P C R s p r z |o n y z p o l i m o r f i z m e m d Bu g o [c i f r a m e n t ó w r e s t r y k c y j n y c h
2 . P C R - A S O
3 . P C R - A R M S
4 . O L A
1 i 2 m a j n a j w i k s z e z n a c z e n i e
1 . P C R - R F L P . K o |y s t a z e n z y m ó w r e s t r y k c y j n y c h t z w . e n d o n u k l e a z r e s t r y k c y j n y c h , k t ó r e
p o z y s k i w a n e s z k o m ó r e k b a k t e r y j n y c h i o n e w y s t p u j u b a k t e r i i . W c h w i l i o b e c n e j z n a n y c h
j e s t k i l k a t y s i c y e n d o n u k l e a z , a l e u |y w a n y c h j e s t z a l e d w i e k i l k a s e t . D l a c z e g o ? P o n i e w a |
n i e k t ó r e , r z a d k o w y s t p u j c e s e k w e n c j e , s t r a w i o n e p r z e z t a k u n i k a l n e e n z y m y , |e k o s z t i c h
z a s t o s o w a n i a , w y c h o d o w a n i a o d p o w i e d n i e g o s z c z e p u b a k t e r i i , w i e l o k r o t n i e p r z e k r a c z a s e n s
a n a l i z y g e n e t y c z n e j . I t o j e s t j e d y n e , a c z k o l w i e k i s t o t n e o g r a n i c z e n i e . P r a k t y c z n i e k a |d a
s e k w e n c j a D N A m a s w o j e n d o n u k l e a z , k t ó r a j t r a w i . D l a c z e g o o n e n i e t r a w i w Ba s n e g o D N A .
P o n i e w a | i c h D N A j e s t z m o d y f i k o w a n e p r z y u |y c i u e n z y m ó w z w a n y c h m e t y l a z a m i . A
n o r m a l n a f u n k c j a , b o k t o [ z a p y t a p o c o o n e w Ba [c i w i e s w t y c h k o m ó r k a c h b a k t e r y j n y c h , n o
p r z e c i e | n i e p o t o , |e b y [m y s i n i m i b a w i l i w z a k r e s i e b i o l o g i i m o l e k u l a r n e j . O n e c h r o n i D N A
k o m ó r k i b a k t e r y j n e j p r z e d a t a k i e m b a k t e r i o f a g ó w . D a n y b a k t e r i o f a g , k t ó r y m a s z c z e g ó l n
p r e d y l e k c j d o i n f e k o w a n i a k o m ó r k i b a k t e r y j n e j , k o m ó r k a b a k t e r y j n a m a n a n i e g o o r | w p o s t a c i
e n d o n u k l e a z y r e s t r y k c y j n e j , j a k t a m s i p o j a w i a t o w Be b d o s t a j e t a k e n d o n u k l e a z , b o j e g o
D N A z o s t a j e o b r u c o n e w n i w e c z . O n e n i e t r a w i D N A j a k k o l w i e k . O n e t r a w i w t z w . m i e j s c a c h
p a l i n d r o m o w y c h , c z y l i o p o d w ó j n e j o d w r ó c o n e j s y m e t r i i i c o w a |n e t r a w i o b y d w i e n i c i . N a z w a
k a |d e j z n i c h u t w o r z o n a j e s t o d n a z w y g a t u n k u b a k t e r i i , w k t ó r y m d a n a e n d o n u k l e a z a z o s t a Ba
z n a l e z i o n a E c o R 1 - E s c h e r i c h i a c o l i s z c z e p R e n z y m p i e r w s z y . O b o k s z a w s z e p o d a w a n e
s e k w e n c j e , k t ó r e s r o z p o z n a w a n e i t r a w i o n e , i j a k w i e m y , w k t ó r y m m i e j s c u n a s t p i Ba m u t a c j a ,
n a s t p n i e b i e r z e m y k a t a l o g , p a t r z y m y z a i l e p i e n i d z y m o |n a t a k e n d o n u k l e a z p r z y s Ba .
E n d o n u k l e a z y a l b o s w r o z t w o r z e a l b o w f o r m i e l i o f i l i z o w a n e j . N o i k a |d a m a s w o j
s p e c y f i k a c j : w j a k i e j t e m . t r a w i i , i t p . W w y n i k u t r a - w i e n i a e n d o n u k l e a z a m i p o w s t a j t z w .
f r a g m e n t y r e s t r y k c y j n e , k t ó r e r o z d z i e l a n e e l e k t r o f o r e - t y c z n i e d a j o b r a z c h a r a k t e r y s t y c z n y d l a
d a n e g o g e n u . I n n y o b r a z d a D N A z m u t o w a n y a i n n y z d r o w y , b o w w y n i k u d z i a Ba n i a m u t a g e n u
j e d n e m i e j s c a r e s t r y k c y j n e m o g z a n i k n a i n n e s i p o j a w i . J e [l i w i e m y n a c z y m m u t a c j a
p o l e g a t o m o |e m y w y b r a t a k e n d o n u k l e a z , k t ó r a w Ba [n i e m i e j s c e z m u t o w a n e b d z i e n a m
c i e Ba . A w i n n y m p r z y p a d k u w y b i e r a m y t a k , k t ó r a w w y n i k u m u t a c j i s t r a c i s w o j s e k w e n c j
p a l i n d r o m o w . M i e j s c e c i c i a e n d o n u k l e a z m o |e p r z e c h o d z i a l b o p r z e z o [ s y m e t r i i t a k i e j
s e k w e n c j i p a l i n d r o m o w e j i p o w s t a j w ó w c z a s k o Dc e t p e n o i w r e s z c i e k i e d y t o j e s t w p e w n y m
o d d a l e n i u o d t e j o s i s y m e t r i i t o p o w s t a j k o Dc e l e p k i e , c z y l i k o h e z y j n e . Z a r ó w n o d o r e a r a n |a c j i
g e n ó w m o |e m y u |y w a k o Dc ó w t p y c h j a k i l e p k i c h . T e t p e n a j p i e r w m u s i m y s p e c j a l n i e
z m o d y f i k o w a , a l e n a j Ba t w i e j p o s t p i j e s t z k o Dc a m i l e p k i m i , b o w t e d y z i n n y m g e n e m m o |n a t o
p r z y l e p i i z m o n t o w a .
A T C T G C A T
T A G A C G T A
S t a r a p r a w i d Bo w a n i D N A
( p o z b a w i o n a p a l i n d r o m u - r e s t r y k t a z a j m i j a )
S e k w e n c j a p o m u t a c j i p u n k t o w e j
( p o w s t a B p a l i n d r o m , k t ó r y r e s t r y k t a z a r o z p o z n a j e )
A T C G G C A T
T A G C C G T A
N o i s p r a w a j e s t b a r d z o p r o s t a w y i z o l o w a n y a l l e l p o a m p l i f i k a c j i ( P C R - R F L P ) p o d d a j e m y
t r a w i e n i u e n d o n u k l e a z , j e [l i e n d o . m i e j s c a n i e r o z p o z n a B t o z n a c z y , |e j e s t w s z y s t k o w p o r z d k u
u z y s k u j e m y j e d n o l i t y o b r a z p r |k ó w .
E l e k t r o f o r e z a
2 0 0 z a s a d
2 0 0
2 0 0 z a s a d
1 . S y t u a c j a , w k t ó r e j r e s t r y k t a z a n i e p r z c i e Ba n i c i
1 . S y t u a c j a p r a w i d Bo w a
7 0 z a s a d 1 3 0 z a s a d
1 3 0 z a s a d 7 0 z a s a d
7 0 1 3 0 2 0 0
c i e Dc i e w s e k w e n c j i
p a l i n d r o m o w e j
2 . N a s t p i Bo p r z e c i c i e n i c i .
2 . S y t u a c j a p a t o l o g i c z n a
2 . P C R - A S O - a l l e l s p e c y f i c o l i g o n u k l e o t y d e . M a m y d w a a l l e l e , j e d e n d z i k i i d r u g i z m u t o w a n y .
N a s z e p o d e j [c i e m o |e b y d w o j a k i e m o |e m y h y b r y d y z o w a : n a s z z a m p l i f i k o w a n y m a t e r i a B a l b o
s o n d m o l e k u l a r n , c z y l i o l i g o n u k l e o t y d e m s p e c y f i c z n y m d l a a l l e l u a l b o d z i k i e g o , a l b o a l l e l u
z m u t o w a n e g o . T a k d o b i e r a m y d Bu g o [ a l l e l u , |e w p r z y p a d k u g d y t r a f i n a m i e j s c e o n i e k o m p l e -
m e n t a r n e j s e k w e n c j i w ó w c z a s n i e h y b r y d y z u j e . S z c z e g ó l n i e d o b r e s t a k i e m i e j s c a , k t ó r e
w y p a d a j w [r o d k u n a s z e g o o l i g o n u k l e o t y d u , b o w y w o Bu j s y t u a c j w k t ó r e j n a s t p u j e s z y p k i e
o d d y s o c j o w a n i e n a s z e g o o l i g o n u k l e o t y d u i o n n i e w y k r y w a n a s z e g o m i e j s c a z m u t o w a n e g o . N o
j e [l i m i e j s c e z o s t a n i e r o z p o z n a n e p r a w i d Bo w t o j e s t j a k i [ m a r k e r r a d i o a k t y w n y l u b f l u o r o r e s c e n -
c y j n y i w t e n s p o s ó b s t w i e r d z a m y , c z y m i e j s c e z m u t o w a n e w y s t p u j e c z y n i e .
3 . A R M S - a m p l i f i c a t i o n r e f r a c t o r y m u t a t i o n s y s t e m , c z y l i m u t a c j a p r o w a d z i d o n i e m o |n o [c i w y -
k o n a n i a P C R - u . W o b r a zm y s o b i e , |e t u m a m y m i e j s c e p r a w i d Bo w e i n a s t p u j e p r a w i d Bo w y
p r z e b i e g P C R - u . N a t o m i a s t j e [l i n a s t p i Ba m u t a c j a , t o w ó w c z a s s t o s o w a n y d l a d a n e g o a l l e l u
s p e c y f i c z n y s t a r t e r t e g o m i e j s c a n i e r o z p o z n a j e , z w i z j k u z t y m n i e m a a m p l i f i k a c j i . C z y l i
w y b i e r a m y m i e j s c e z n a j d u j c e s i w m i e j s c u w i z a n i a s t a r t e r u , c z y l i w s e k w e n c j a c h
f l a n k u j c y c h . C z y l i t a k d o b i e r a m y s t a r t e r y b y w y k r y w a By t y l k o j e d e n z a l l e l i . W i c w t e j s y t u a c j i
n a s z y m o l i g o n u k l e o t y d e m j e s t p r i m e r . I r o z p o z n a j e t y l k o j e d e n z d w ó c h a l l e l i . R o z p o z n a B
p r a w i d Bo w y z a c h o d z i r e a k c j a P C R , n i e r o z p o z n a B p r a w i d Bo w e g o P C R n i e z a c h o d z i .
4 . O L A - c z y l i o l i g o n u k l e o t y d e l i g a t i o n a s s a y , c z y l i l i g a c j a o l i g o n u k l e o t y d ó w . W y b i e r a m y d w a
f r a g m e n t y D N A i n a z w i j m y j e u m o w n i e s o n d a m i , k t ó r e m u s z i d e a l n i e k o m p l e m e n t o w a p o s z u -
k i w a n e p r z e z n a s m i e j s c e - p u n k t o w m u t a c j . O n e s s p r z |o n e z o d p o w i e d n i m m a r k e r e m , n p .
e n z y m a t y c z n y m i w t y m u k Ba d z i e m u s i m y m i e e n z y m l i g a z , j e [l i w s z y s t k o n a s t p u j e j a k
t r z e b a , n a s t p u j e p o Bc z e n i e , c z y l i l i g a c j a t y c h d w ó c h f r a g m e n t ó w o l i g o n u k l e o t y d o w y c h i
n a s t p u j e s y g n a B e n z y m a t y c z n y i g e n e r a c j a j a k i e g o [ p r o d u k t u i s y g n a B - r e a k c j a z a s z Ba - w s z y s t k o
j e s t O K . J e [l i j e s t m u t a c j a p u n k t o w a n i e n a s t p u j e l i g a c j a p ó Bf r a g m e n t ó w i s y g n a Bu n i e m a .
C e l e :
- w y k o r z y s t a n i e t e c h n i k i d e n t y f i k a c j i p o z w a l a n p . n a p o s t a w i e n i e p a c j e n t o w i s z y b k o d i a g n o z y w
c i g u k i l k u g o d z i n , a n o r m a l n i e b y w y c h o d o w a s z c z e p b a k t e r i i z t e j p o b r a n e j p r ó b k i p o t r z e b a 6
t y g o d n i
- s y n t e z a g e n ó w - k l o n o w a n i e , P C R s y n t e z a g e n ó w d o c e l ó w p r z e m y s Bu s p o |y w c z e g o , f a r m a c e u -
t y c z n e g o . T o j e s t p r o d u k c j a b i a Be k ( e n z y m ó w ) , h o r m o n ó w i s y n t e z a n o w y c h g e n ó w , k t ó r y m i
m o |e m y z a s t p i g e n y z d e f e k t o w a n e , a l b o z d e f e k t o w a n e w s p o s ó b u w a r u n k o w a n y g e n e t y c z n i e ,
d z i e d z i c z n i e a l b o z m u t o w a n y c h s p o r a d y c z n i e i t o n o s i n a z w t e r a p i i g e n o w e j .
N o i o d m i a n t e c h n i k i P C R j e s t t e c h n i k a R T - P C R m o |n a j z f i l o z o f i i d z i a Ba n i a p r z y r ó w n a d o
N o r t h e r n B l o t t i n g u . T a m r ó w n i e | m i e l i [m y R N A , k t ó r e i d e n t y f i k o w a l i [m y z a p o m o c s o n d y
m o l e k u l a r n e j z n a k o w a n e j , k t ó r y m D N A , n a t o m i a s t t u m a m y m R N A , k t ó r y a m p l i f i k u j e m y , c z y l i
m a m y t r a n s k r y p t , k t ó r y a m p l i f i k u j e m y , |e b y s i d o w i e d z i e s k d s i w z i B t e n t r a n s k r y p t . W t y m
c e l u p i e r w s z y m e t a p e m j a k Ba t w o z g a d n j e s t o d w r o t n a t r a n s k r y p t a z a , a n a s t p n i e u z y s k a n y w
t e n s p o s ó b D N A a m p l i f i k u j e m y t y p o w o j a k t o r o b i l i [m y w r e a k c j i P C R .
G E N Y W O N K O G E N E Z I E
G e n y , k t ó r e b i o r u d z i a B w o n k o g e n e z i e m o |n a p o d z i e l i n a 3 k a t e g o r i e :
1 . O n k o g e n y , c z y l i s t o t a k i e g e n y , k t ó r e s t y m u l u j p r o l i f e r a c j k o m ó r e k , m o |n a j e p r z y r ó w n a
d o p e d a Bu g a z u w s a m o c h o d z i e . J a k s i n a t a k i p e d a B g a z u n a c i [n i e , a l b o w t y m w y p a d k u
z a k t y w u j e t a k i p r o t o o n k o g e n - k o m ó r k a w s p o s ó b n i e p o c h a m o w a n y z a c z y n a p r o l i f e r o w a .
2 . A n t y o n k o g e n y , c z y l i d r u g i r o d z a j g e n ó w , n a z y w a n e t a k |e g e n a m i s u p r e s o r o w y m i . I o n e p r z y -
p o m i n a j h a m u l e c w s a m o c h o d z i e . N o r m a l n i e t e n h a m u l e c j e s t z a c i g n i t y . K o m ó r k a r u s z a ,
c z y l i s a m o c h ó d r u s z a n p . z g ó r k i i t e n h a m u l e c u l e g n i e u s z k o d z e n i u
3 . M u t a t o r o w e . G e n y m u t a t o r o w e n o r m a l n i e b i o r u d z i a B w n a p r a w i e D N A , d b a j o
i n t e g r a l n o [ g e n o m u . J e [l i j e d z i e m y t o t e | s s w e g o r o d z a j u h a m u l c e m j e d e n t o n p . h a m u l e c
r c z n y a d r u g i n o |n y . J e [l i t e n h a m u l e c u l e g n i e u s z k o d z e n i u n a s t p u j e g r o m a d z e n i e b Bd ó w w
i n f o r m a c j i g e n e - t y c z n e j z a w a r t e j w k o m ó r c e i w k o n s e k w e n c j i p r o w a d z i t o d o r o z w o j u
n i e k t ó r y c h c h o r ó b n o w o - t w o r o w y c h
Z a i n t e r e s o w a n i e o n k o g e n a m i s p o w o d o w a n e j e s t t y m , |e j u | w l a t a c h 2 0 - t y c h , s t w i e r d z o n o , |e
n i e k t ó r e w i r u s y m o g w y w o By w a u z w i e r z t d o [w i a d c z a l n y c h n o w o t w o r y . T a k i m n a j p i e r w e j
o d - k r y t y m g e n e m b y B g e n S r c , k t ó r y w y w o Bu j e m i s a k a R u s s a ( ? ) . T y l k o r e t r o w i r u s y , k t ó r e
p o s i a d a - j t e g o r o d z a j u g e n y , z w a n e o n k o g e n a m i , s w s t a n i e w y w o Ba t r a n s f o r m a c j
n o w o t w o r o w k o m ó r k i . N a t o m i a s t w i r u s y , k t ó r e n i e p o s i a d a j t e g o r o d z a j u o n k o g e n ó w ,
t r a n s f o r m a c j i n i e w y - w o Bu j n p . H I V p o w o d u j e n i s z c z e n i e l i m f o c y t ó w L H , a l e t r a n s f o r m a c j i
n o w o t w o r o w e j n i e w y w o - Bu j e . W a r u n k i e m , |e b y r e t r o w i r u s w y w o Ba B t r a n s f o r m a c j j e s t
p o s i a d a n i e o n k o g e n u . A l e j a k s i p r z y j r z a n o b l i |e j t y m w i r u s o m o n k o g e n n y m , |e w i r u s y t e
p o s i a d a j g e n y j a k o |y w o p r z y p o m i n a j - c e t e w y s t p u j c e u c z Bo w i e k a . P o w s t a Ba w i c
k o n c e p c j a , |e p r a d z i a d e k a l b o p r a b a b c i a o d w i e d z a - j c k o m ó r k z w i e r z c i a , n a d r o g s o b i e
z a b r a Ba t a k i b a g a | w p o s t a c i g e n u p r a w i d Bo w e g o , k t ó r y n a s t p n i e w w y n i k u m u t a c j i u l e g B
p e w n y m z m i a n o m . O n k o g e n n i e j e s t d o n i c z e g o p o t r z e b n y w i r u s o w i . W i r u s p o s i a d a w s w o i m
g e n o m i e g e n y k o d u j c e j e g o b i a Bk a , c z y l i b i a Bk a k a p s y d u , k w a s ó w n u k l e i n o w y c h p o t r z e b n e d o
r e p l i k a c j i - o d w r o t n a t r a n s k r y p t a z a , n a t o m i a s t o n k o g e n t o t e n n i e p o t r z e b n y b a g a |. N o i z t a k i c h
w i r u s ó w D N A , k t ó r e n i e p o s i a d a j o n k o g e n ó w , b o o n k o - g e n y p o s i a d a j j e d y n i e w i r u s y R N A
r e t r o w i r u s y , m a m y t a k i e , k t ó r e s s z c z e g ó l n i e w a |n e d l a c z Bo w i e k a . I t o s d w a :
> H P V 6 , k t ó r y w y w o Bu j e r a k a s z y j k i m a c i c y
> n o i m a m y w i r u s E b s c h t e i n a - B a r r a . W i r u s t e n w y w o Bu j e m o n o n u k l e o z z a k a zn w n a s z e j s t r f i e
k l i m a t y c z n e j . A l e j e s t o n r ó w n i e | p o s t r z e g a n y j a k o c z y n n i k e t i o l o g i c z n y w y w o Bu j c y r a k a n o s o -
g a r d z i e l i . N a t o m i a s t u d z i e c i w A f r y c e r ó w n i k o w e j t e n s a m w i r u s w y w o Bu j e z Bo [l i w e g o
c h Bo n i a k a , c z y l i n o w o t w ó r u k B. c h Bo n n e g o t z w . c h Bo n i a k a B e r t i t a ( ? ) . W s z y s t k o z a l e |y w j a k i
s p o s ó b a s o c j u j e z g e n o m e m g o s p o d a r z a . N a t o m i a s t n a j w a |n i e j s z e r e t r o w i r u s y t z w . w i r u s y o s t r o
t r a s f o r m u j c e t o s w Ba [n i e w i r u s y o n k o g e n n e p o s i a d a j c e o n k o g e n y . I k a |d y z w y m i e n i o n y c h
t u t a j o n k o g e n ó w w i r u s o w y c h m a s w ó j o d p o w i e d n i k w k o m ó r c e g o s p o d a r z a . U k a |d e g o z n a s
t a k i e o n k o g e n y w y s t p u j .
T e r m i n o l o g i a :
J e |e l i t o c o w y s t p u j e u w i r u s a n a z y w a m y o n k o g e n e m t o t o c o w y s t p u j e w f o r m i e p r a w i d Bo w e j
m o |n a n a z w a p r o t o o n k o g e n n e m .
A l e m o |n a i m ó w i i n a c z e j t o c o w y s t p u j e w k o m ó r c e j e s t o n k o g e n n e m , a t o c o p o w o d u j e
r o z w ó j n o w o t w o r u o n k o g e n z a k t y w o w a n y .
T e g e n y , k t ó r e z n a j d u j s i u w i r u s ó w p o p r z e d z o n e s l i t e r k ' ' v ' ' ( v - ) c z y l i v i r u s , n a t o m i a s t t e
o n - k o g e n y , k t ó r e w y s t p u j u n a s p o p r z e d z o n e s l i t e r k ' ' c ' ' ( c - ) c z y l i c e l l u l a r , c z y l i
k o m ó r k o w y .
C o t o s z a g e n y ? S t o g e n y z a a n g a |o w a n e w r ó |n e e t a p y r ó |n i c o w a n i a , p r o l i f e r a c j i k o m ó r k i i
o d p o w i e d z i k o m ó r k i n a r ó |n e s y g n a By , c z y l i n i e s t o j a k i e [ b y l e j a k i e g e n y . N i e s t o n p . g e n y
k o d u j c e e n z y m y g l i k o l i z y , n i e s t o e n z y m y b e t a - o k s y d a c j i z a k o d o w a n e , a l e t r a n s f e r s y g n a Bu j a k
t o s i m d r z e m ó w i t r a n s d u k c j a s y g n a Bu i p r o l i f e r a c j i k o m ó r k i .
S t o n a p r z y k Ba d g e n y :
- k o d u j c e c z y n n i k i w z r o s t u , k t ó r e r e g u l u j p r o l i f e r a c j k o m ó r e k ( S i s )
- k o d u j c e r e c e p t o r y p o w i e r z c h n i o w e d l a c z y n n i k ó w w z r o s t u . B o t o , |e j e s t c z y n n i k w z r o s t u t o
j e s t n i c . T o t a k j a k b y m i e k l u c z i b d z i e m y p o t r z e b o w a j e s z c z e z a m e k - r e c e p t o r , b o i n a c z e j t o
n i e d z i a Ba ( E R B B - g e n r e c e p t o r a p o w i e r z c h n i o w e g o )
- k o d u j c e s k Ba d n i k i s y s t e m u t r a n s d u k c j i ( R A S )
- k o d u j c e c z y n n i k i t r a n s k r y p c y j n e , c z y l i b i a Bk a o d d z i a By w u j c e z D N A ( M Y C , J U N )
- g e n y z a a g a |o w a n e w k o d o w a n i e c y k l i n o r a z C D K , c z y l i C y k l i n - d e p e n d k i n a s e s , k i n a z y z a l e |n e
o d c y k l i n ( i t u t a j m a m y o n k o g e n P R A D T 1 ) . N o i c o o n e t a k i e g o c i e k a w e g o r o b i ? T a k a j e s t
c h o r o b a - t o s m i s a k i l u b b i a Ba c z k i
- w i r u s o w y o n k o g e n H a u - c i s , a o n k o d u j e p By t k o p o c h o d n y c z y n n i k w z r o s t u P D G F Ba Dc u c h b
- o n k o g e n R a s - w y w o Bu j e u s z c z u r ó w m i s a k a , c z u l i n o w o t w ó r t k a n e k m i k k i c h , u c z Bo w i e k a
k o d u j e j e d n o z b i a Be k R a s
- o n k o g e n A b l , k t ó r y u m y s z y w y w o Bu j e b i a Ba c z k , u c z Bo w i e k a k o d u j e k i n a z t y r o z y n o s w o i s t
- o n k o g e n F o s - w i r u s o w y , k t ó r y w y w o Bu j e m i s a k a k o [c i , u c z Bo w i e k a z a n g a |o w a n y w
k o d o w a n i e k i n a z y t y r o z y n o s w o i s t e j i c z y n n i k ó w t r a n s k r y p c y j n y c h
G d y b y t o p r z e [l e d z i n a s c h e m a c i e k o m ó r k i s t o c z s t k i s y g n a Bo w e z a a n g a |o w a n e w r e c e p t o r y
d l a c z s t e k s y g n a Bo w y c h . . .
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