83337

1.    Mutanty nie maja systemów naprawy uszkodzeń typu "reperacji przez wycinanie nukleotydow" - NER, kt w dzikich szczepach sa odp za naprawę uszkodzeń DNA powstałych pod wpływem mutagenow. W efekcie, uszkodzenia DNA powstałe pod wpływem kontaktu z badanym w teście Ames'a mutagenem nie sa naprawiane

i wszystkie mutacje punktowe sa widoczne fenotypowo.

2.    Mutanty posiadaja defekty w budowie lipopolisacharydu (LPS) co pozwala

na łatwiejsza penetracje zw chem do wnętrza kom w porównaniu z dzikim szczepem.

Podłoże minimalne używane do testu zawiera siadowe ilości histydyny dodawane tylko do tzw. top-agaru, tworzącego wierzcłinia warstwę agaru. Te siadowe ilości histydyny sa konieczne, ponieważ niektóre mutageny dzialaja tylko na replikujące DNA. Kiedy mutanty Ames'a sa wysiewane na takie podłoże, rosną tylko dotąd dokąd nie wyczerpią histydyny (2 -3 podziały kom trwające ok.lh) i tworzą ledwie widoczne zmętnienie w miękkim agarze.

W przeciwieństwie do nich rewertanty tworzą duże kolonie, ponieważ ich wzrost nie jest limitowany ilością histydyny w podłożu.

Wiele zw chem wyst w przyrodzie nie jest mutagenna dopoki nie zostanie skonsumowana przez zwierze (lub człowieka). Jedna z przyczyn jest fakt, ze w wątrobie w procesie detoksykacji niekt zw chem powstają zw, kt sa bardzo silnymi mutagenami. Z tego powodu wiele zw badanych w teście Ames'a powinno byc rutynowo inkubowanych z wyciągiem z wątroby szczura (frakcja S9) w srod tlenowym, aby oksygenazy wątroby "aktywowały" badany zw. Dopiero zaktywowany związek powinien byc stosowany do testu na bakteriach.

W ocenie mutagenności zw za pomocą testu Ames'a przyjmuje sie, ze mutagenem jest każdy zw, kt indukuje powstanie dw ukrotnie w iększej liczby mutantów (rewertantow ) w stosunku do liczby mutantów spontanicznych.

OPERON LAC

-3 geny struktury- lacZ, lacY, lacA; lacZ koduje beta-galaktozydaze-enzym hydrolizujący laktozę dogalaktozy i glukozy; lac Y- koduje permeaze beta-galaktozydowa odp.za transport laktozy przez blone kom.bakt. lacA- koduje transacetylaze tiogalaktozydowa-nieznana funkcja w metabol.laktozy. Miejsce startu transkr- +1; powyżej miejsca +l,po stronie 5’ genów strukt.znajduje się promotor Plac-ma 2 sekw: -10 i -35 istotne dla wiąz. polimer. RN A; po stronie 5’ promotora,pomiędzy zasadami -68/-53 jest miejsce wiazania białka CAP, dalej w stronę 5' położony jest gen lacl-koduje represor lac, poprzedzony własnym promotorem Pr; na ode.pomiędzy zas.-4 i +23 jest operator Olać -częściowo zachodzi na promotor i częściowo ulega transkrypcji;operator ma na końcach odwrócone powtórzenia,istotne dla wiazania represora;

Gdy w srod.bakt.nie ma laktozy,operon w iaze sie z operatorem. Polimer.RNA nie może wydajnie inicjować trans kryp,bo rep resor blokuje jej dostęp do miejsca startu trans kr. Regulacja z udziałem rerpresora jest regul.negatyw na.

wyczerpanie glukozy jako Zr.węgla i dostępność w pożywce laktozy powodują,ze stale obecne w kom.niewielkie ilości enzymów lacY i lacZ umożliwiają wnikniecie laktozy do jej wnętrza i przekształcenie w allolaktoze-ona wiazac sie z represorem zmienia jego konformacje tak ze traci on powinowactwo do operatora. Po usunięciu regres.polimeraza RNA rozpoczyna trans kr.policistronowego mRNA-jego translacja daje białkowe produkty wszystkich 3ech genów struktury,umowzliwiajac metabol.laktozy; allolaktoza jest wiec induktorem operonu lac podobnie działa stos w labach IPTG.

Represja kataboliczna operonu lac

jeśli w pożywce jest glukoza i laktoza,to operon laktozowy pozostaje nietakt.az do