1

HPLC cz.2

ver. 1.0

•

GPC – zasada rozdziału, kalibracja, obliczenia

•

Analiza jako

Ğciowa – krok po kroku

•

Analiza ilo

Ğciowa – krok po kroku

•

Przygotowanie próbek do analiz chromatograficznych

•

Zastosowania HPLC/GPC

•

Przykładowy problem do rozwi

ązania

2

GPC ?

•

Chromatografia

Īelowa / sitowa / molekularna (gel permeation

chromatography

•

Chromatografia wykluczania wg rozmiarów (size exclusion
chromatography)

Chromatografia = Rozdział + Detekcja

Schemat zestawu do GPC = HPLC

3

Polimery, oligomery …

„Parametry” polimerów: Mw, Mn, Pd, RCC

Roztwory polimerów, posta

ü makrołaĔcucha

4

Mechanizm rozdziału

5

Zasady pracy i kalibracja

V0 – obj

ĊtoĞü martwa

(pomi

Ċdzy ziarnami

wypełnienia) – całkowite
wykluczanie – obj

ĊtoĞü

retencji pierwszego piku

Vi – obj

ĊtoĞü wewnĊtrzna –

pojemno

Ğü wszystkich

porów wypełnienia

Vt – obj

ĊtoĞü całkowita

(Vt=Vo+Vi) – obj

ĊtoĞü

retencji ostatniego piku

Ve=Vo+Kd·Vi

GPC – metoda wzgl

Ċdna

6

Wyniki

•Jako

Ğciowe – porównywanie Vr

•Ilo

Ğciowe – ĝrednie ciĊĪary cząsteczkowe: Mw, Mn. Polidyspersja

polimeru Pd=Mw/Mn. Rozkłady mas czasteczkowych.

7

GPC – HPLC porównanie

•

Mechanizm rozdziału

•

Rodzaj próbek

8

Analiza jako

Ğciowa

•Porównanie t

R

wzorca(ów) z chromatogramem próbki (przy ró

Īnych

metodach detekcji – typach detektorów, oraz składzie eluentu)

9

Analiza ilo

Ğciowa

Zało

Īenie (do sprawdzenia!): iloĞü substancji (stĊĪenie) jest

proporcjonalne do powierzchni (wysoko

Ğci) piku → odpowiedni zakres

st

ĊĪeĔ (szum/nieliniowoĞü detektora/pojemnoĞü kolumny)

Metody analizy ilo

Ğciowej:

•Wzorca zewn

Ċtrznego (metoda krzywej kalibracji)

•Wzorca wewn

Ċtrznego

•Dodatku wzorca
•Normalizacji wewn

Ċtrznej

10

Analiza ilo

Ğciowa

•Wzorca zewn

Ċtrznego (metoda krzywej kalibracji)

11

Analiza ilo

Ğciowa

•Wzorca wewn

Ċtrznego

12

Analiza ilo

Ğciowa

•Metoda normalizacji wewn

Ċtrznej

13

Zako

Ĕczenie

•Zastosowanie HPLC (analityczne, preparatywne)
•O przygotowywaniu próbek do HPLC
•Problemy:

•Detektor dla układu HPLC do oznaczania cukrów
•Detektor dla układu HPLC do oznaczania zwi

ązków

aromatycznych
•Jak analizowa

ü mieszaninĊ zawierającą bardzo małe iloĞci

analitu