Oczyszczanie lakazy z Cerrena Unicolor

Karolina Linowska, Katarzyna Lisowska, Jakub Knurek

1. Wstęp teoretyczny:
- słowo na niedzielę (o lakazie – czemu to taki ważny enzym?)
- po co właściwie nam lakaza? Jaki proces ona katalizuje?
- jakimi sposobami można oczyścić lakazę?
- czym jest aktywność enzymatyczna? Jaką aktywność wykazuje lakaza? (parametry środowiska)
- reakcja lakazy z syrngaldazyną + opis

2. Omówienie stosowanej metody:
- chromatografia sitowa/ sączenie molekularne - jest mnóstwo artykułów i stron internetowych do
opracowania tej tematyki

3. Wykonanie:
- opis żelu Sephadex G-25 (dlaczego właśnie on jest używany do odsalania białek?)
- jak i po co wykonuje się kalibrację? (Blue Dextran/ dwuchromian potasu)
- zasada przygotowania buforów McIlvine’a (dlaczego wykonujemy tak dużo różnych buforów?)
- opis wykonania z uwzględnieniem zmienionych jednostek na ćwiczeniach (np. przy
spektrofotometrze factor = 2564, interwał = 15 s, czas trwania pomiaru = 60 zamiast 120 s, długość
fali – 525 nm, etc.)
- opis metody Leonowicz & Grzywnowicz – wystarczy wzór ze skryptu
- dlaczego używa się spektrofotometru i syryngaldazyny? (obserwacje)
- przypuszczalne wyniki oparte o źródła literaturowe

4. Wyniki:
- Tabela przedstawiająca aktywność w danym pH:
pH

Próbka nr I

Próbka nr II

Średnia wartość

3,5

- 27,39

- 1646,7

0

4,0

- 3212, 8

- 40,484

0

4,5

32258

54005

43131,5

5,0

47095

37864

42479,5

5,5

69117

70630

69873,5

6,0

71802

80716

76259

6,5

36821

39105

37963

7,0

11935

10659

11297

Wniosek: Optimum aktywności lakaza osiąga w ph 6,0.

- Wykres zależności aktywności lakazy od pH:

- Wydajność oczyszczenia:
pH

Próbka nr I

Próbka nr II

Średnia wartość Opis

5,5

69117

70630

69873,5

Próbka oczyszczona

5,5

102720

74243

83481,5

Próbka nieoczyszczona

Próbka nieoczyszczona była rozcieńczana 50-krotnie i miała objętość 2 ul.
Próbka oczyszczona była rozcieńczana 10-krotnie i miała objętość 10 ul.
Wydajność oczyszczania (W) to wskaźnik, który pokazuje nam efektywność stosowanej metody.
Określany jest on na 1 ml substancji o określonej aktywności z uwzględnieniem rozcieńczenia.

W = [(69873,5*10*10)/(83481,5*50*10)] * 100% = 6987350/41740750 * 100% = 16,74%

PS. Coś mały ten wskaźnik, ale błąd mógł się wkraść zarówno w trakcie pomiaru, jak i w obliczeniach.
Uwzględniłem przeliczenie (*10) spowodowane błędem aparatu pomiarowego.

0

10000

20000

30000

40000

50000

60000

70000

80000

90000

3

4

5

6

7

8

Średnia aktywność lakazy w danym pH

Średnia
aktywność

pH