transferazy

Transferazy

transaminazy

(

aminotransferaza

alaninowa i

asparaginowa)

E.C.2.6.1.2.

Aminotransferaza

alaninowa (ALT)

Cel

wicze

Ocena aktywno

ci enzymu wska

nikowego

jakim jest

aminotransferaza

asparaginianowa

w osoczu krwi kr

w zdrowych i chorych

Wyst

powanie:

Wewn

trzkom

rkowy enzym

zlokalizowany w cytoplazmie.

•

Osocze

•

troba

•

Serce

•

ęś

nie

Mechanizm dzia

ania:

Odwracalna reakcja przeniesienia grupy

aminowej z alaniny na

ketokwas

(alfa

ketoglutaran

) przy udziale PLP.

Oznaczanie aktywno

ci:

•

Oparte jest na r

nicy

absorbancji

2,4

dwunitrofenylohydrazon

w kwasu

alfa

ketoglutarowego

i pirogronowego w

rodowisku zasadowym

Znaczenie kliniczne:

Enzym wska

nikowy charakterystyczny

dla schorze

troby (zapalenia,

marsko

ść

taczki) oraz uszkodzenia

ęś

ni szkieletowych (zmia

enia,

zaniki). W ich przebiegu stwierdza si

klinicznie znacz

ce zwi

kszenie

aktywno

ci ALT w surowicy.

E.C.2.6.1.1.

Aminotransferaza

asparaginianowa

(AST)

Wyst

powanie:

Wewn

trzkom

rkowy enzym

zlokalizowany w

mitochondrium

oraz

cytozolu

•

Serce

•

troba

•

ęś

nie

Mechanizm dzia

ania:

Odwracalna reakcja przeniesienia

grupy aminowej z

asparaginianu

alfa

ketoglutaran

przy udziale PLP.

Oznaczanie aktywno

ci:

•

Oparte jest na r

nicy

absorbancji

2,4

dwunitrofenylohydrazon

w kwasu

alfa

ketoglutarowego

i pirogronowego w

rodowisku zasadowym

Znaczenie kliniczne:

Enzym wska

nikowy charakterystyczny

dla schorze

ęś

nia sercowego (zawa

zapalenia), w

troby (zapalenia, marsko

ść

taczki) oraz uszkodzenia mi

ęś

szkieletowych (zmia

enia, zaniki). W

ich przebiegu stwierdza si

klinicznie

znacz

ce zwi

kszenie aktywno

ci AST w

surowicy.

Transaminacja

Aminotransferaza

(

transaminaza

) alaninowa

(ALT, ALAT, GPT)

Aktywno

ść

ALT w surowicy (U/l)

128

107

Chomiki

syryjskie

winki

morskie

liki

Koty

Psy

winie

Kozy

Owce

Byd

Konie

Wzrost aktywno

ci od warto

referencyjnej do 200 U/l

Nowotwory w

troby.

Zapalenie trzustki.

Hemoliza

vitro

vivo.

Wzrost aktywno

ci od 200 U/l do 400 U/l

Cholestazy

trobowe.

Marsko

ść

troby (jednocze

nie

podwy

szenie warto

ci AST)

Leczenie du

ymi dawkami salicylan

Wzrost aktywno

ci od 200 U/l do 4000 U/l

Wirusowe zapalenie w

troby.

Toksyczne uszkodzenie w

troby.

Niewydolno

ść

ąŜ

enia.

Podane s

warto

ci referencyjne dla metody

optymalizowanej w temperaturze 37

Aktywno

ALT w

metodach

nieoptymalizowanych

jest o 30% ni

sza.

Hemoliza powoduje zawy

enie wynik

w. W surowicy

przechowywanej temperaturze 4

C, po 3 dniach nast

puje

spadek aktywno

ci enzymu o 10%, natomiast w

temperaturze

C surowica mo

e by

przechowywana do

7 dni bez istotnych zmian.

Pojawienie si

podwy

szonych aktywno

ci ALT w surowicy

wskazuje raczej na rozleg

e uszkodzenie kom

rek, a nie na

zaburzenia funkcji narz

du.

U ps

w ras: doberman,

Bedington

terier,

West

highland

white

terier podwy

szony poziom ALAT mo

e sugerowa

chorob

spichrzeniow

Cu (

copper

storage

disease

Aminotransferaza

(

transaminaza

)

asparaginianowa

(AST,

AspAT

, GOT)

Aktywno

ść

AST w surowicy (U/l)

122

Chomiki

syryjskie

winki

morskie

liki

Koty

Psy

122

321

100

205

555

winie

Kozy

Owce

Byd

Konie

Wzrost aktywno

ci od warto

referencyjnej do 200 U/l

(z wyj

tkiem koni i k

Marsko

ść

troby.

Zapalenie trzustki.

Hemoliza

vitro

vivo.

Wzrost aktywno

ci od 200 U/l do 400 U/l

Choroby mi

ęś

ni szkieletowych.

Przewlek

e zapalenie w

troby.

Zabiegi chirurgiczne.

Paso

yty.

Niedob

r selenu i witaminy E.

Wzrost aktywno

ci od 200 U/l do 4000 U/l

Zawa

ęś

nia sercowego.

Wirusowe zapalenie w

troby.

Toksyczne uszkodzenie w

troby.

Nowotwory.

Intensywny wysi

ek u koni sportowych.

Podane s

warto

ci referencyjne dla metody

optymalizowanej w temperaturze 37

C. Aktywno

ść

AST w

metodach optymalizowanych jest jednakowa w surowicy i

osoczu. Hemoliza powoduje zawy

enie wynik

Pojawienie si

podwy

szonych aktywno

ci AST w surowicy

analogicznie do ALT wskazuje raczej na rozleg

uszkodzenie kom

rek, a nie na zaburzenia funkcji narz

du.

W diagnostyce niekt

rych schorze

w pomocny jest wska

nik de

Ritisa

, opisuj

cy stosunek AST

do ALT, kt

rego warto

ść

prawid

owa mie

ci si

w granicach od 1,2 do 1,8.

Zadanie 1

Metoda oznaczania aktywności AST i ALT oparta jest na róŜnicy

absorbancji 2,4-dwunitrofenylohydrazonów kwasu alfa oksoglutarowego i
pirogronowego w środowisku zasadowym. W wyniku reakcji katalizowanej
przez AST powstaje kwas szczawiooctowy, który ulega samoistnej
dekarboksylacji i tworzy się z 2,4-dwunitrofenylohydrazyną (DNFH) takŜe
hydrazon kwasu pirogronowego.

Miarą aktywności aminotransferaz jest zatem przyrost stęŜenia kwasu

pirogronowego w probówkach inkubowanych z surowicą w porównaniu z
probówkami kontrolnymi.

Reakcje katalizowane przez aminotransferazy:

ALT

alanina : 2-oksoglutaran ⇒

pirogronian : glutaminian

AST

aparaginian : 2-oksoglutaran ⇒

szczawiooctan : glutaminian

Zadanie 1

Wykonanie.

Do 4 probówek: 1 (AST kontr.), 2 (AST bad.), 3 (ALT kontr.) i 4 (ALT

bad.) dodawać wymienione w poniŜej zamieszczonej tabeli odczynniki i
surowicę oraz wykonywać opisanie w niej czynności.

Po up

ywie 10 min. zmierzy

warto

ść

absorbancji

b badanych wobec odpowiednich pr

b kontrolnych przy

ugo

ci fali 505 nm, nast

pnie odczyta

liczb

jednostek aktywno

ci z krzywych wzorcowych

0,4 mol/dm

NaOH

pozostawi

w temp. pokojowej

na 20 min.

pozostawi

w temp. pokojowej

na 20 min.

0,5

DNFH

60 min. w

ni wodnej w temp. 37

30 min. w

ni wodnej w temp. 37

Inkubacja

0,1

Surowica ko

ska

5 min.

Inkubacja w

ni wodnej w

temp. 37

0,5

0,1

0,5

0,1

Substrat

Roztw

NaCl

0,9%

Badana

Kontrola

Badana

Kontrola

ALT

AST

Odczynniki