LABORATORIUM 6

Temat: PODATNOŚĆ RÓŻNYCH SUBSTANCJI NA BIODEGRADACJE

Z WYKORZYSTANIEM DROBOUSTROJÓW OSADU CZYNNEGO

Zadanie 1. Zużywanie glukozy przez osad czynny i czyste szczepy bakterii

Wykonanie:

Przygotować cztery probówki. Następnie dodać do nich:

1. 1 ml wymieszanego osadu czynnego i 1 ml 1% roztworu glukozy- próba badana
2. 1 ml wymieszanego osadu czynnego i 1 ml 0,9% roztworu NaCl- próba kontrolna
3. 1 ml zawiesiny bakterii i 1 ml 1% roztworu glukozy- próba badana
4. 1 ml zawiesiny bakterii i 1 ml 0,9% roztworu NaCl- próba kontrolna

Próby inkubować przez 20 minut w temperaturze pokojowej. Po tym czasie we

wszystkich mieszaninach wykonać próbę Benedicta. W tym celu do czterech czystych
probówek dodać po 1 ml odczynnika Benedicta i do każdej z nich dodać 0,2 ml mieszaniny
reakcyjnej. Probówki umieścić na ok. 1-2 minuty we wrzącej łaźni wodnej. Zanotować
wyniki i zinterpretować je.


Zadanie 2. Badanie aktywności glikozydazowej osadu czynnego i czystych szczepów
bakterii

Przygotować cztery probówki. Następnie dodać do nich:

1. 1 ml wymieszanego osadu czynnego, 1 ml buforu octanowego o pH 4,7 i 1 ml 2%

sacharozy- próba badana

2. 1 ml wymieszanego osadu czynnego, 1 ml buforu octanowego o pH 4,7 i 1 ml wody -

próba kontrolna

3. 1 ml zawiesiny bakterii, 1 ml buforu octanowego o pH 4,7 i 1 ml 2% sacharozy- próba

badana

4. 1 ml zawiesiny bakterii, 1 ml buforu octanowego o pH 4,7 i 1 ml wody - próba

kontrolna

Próby inkubować przez 20 minut w temperaturze pokojowej. Po tym czasie we

wszystkich mieszaninach wykonać próbę Benedicta. W tym celu do czterech czystych
probówek dodać po 1 ml odczynnika Benedicta i do każdej z nich dodać 0,2 ml mieszaniny
reakcyjnej. Probówki umieścić na ok. 1-2 minuty we wrzącej łaźni wodnej. Zanotować
wyniki i zinterpretować je.

Zadanie 3. Rozkład skrobi przez osad czynny i czyste szczepy bakterii

Wykonanie:

Przygotować dwie probówki. Następnie dodać do nich:

1. 2 ml wymieszanego osadu czynnego i 1 ml 0,1% roztworu skrobi
2. 2 ml zawiesiny bakterii i 1 ml 0,1% roztworu skrobi

Próby inkubować przez 30 minut w temperaturze pokojowej. Po tym czasie przygotować

dla każdej z prób sześć rozcieńczeń. W tym celu dodać do sześciu probówek po 2 ml wody, a
następnie do pierwszej przenieść 2 ml odpowiedniego inkubatu, zamieszać, pobrać 2 ml i
przenieść do drugiej probówki itd. Rozcieńczając w ten sposób każdą z kolejnych prób
uzyskuje się jej rozcieńczenia: 2-, 4-, 8-, 16-, 32- i 64- krotne. Następnie do każdego z
rozcieńczeń dodać po 2 ml 0,01 N roztworu jodu.

Na podstawie rozcieńczenia, w którym już nie powstaje niebieskie zabarwienie, określić

ubytek skrobi w poszczególnych inkubatach. Wyniki zestawić w tabeli, oznaczając
wystąpienie barwy z jodem jako „+”, a brak barwy jako „-‘’.