Mikroskopia świetlna

Krzysztof Dołowy

Zdolność rozdzielcza ludzkiego oka:

Z punktu widzenia soczewki

o średnicy źrenicy (6mm) oświetlonej światłem
zielonym (500nm)

radiana

d

4

3

7

10

2

,

1

10

6

10

5

22

,

1

22

,

1



























Czyli około 25 sekund łuku

Zdolność rozdzielcza ludzkiego oka:

Z punktu widzenia siatkówki

W siatówce na obszarze największej czułości
wzroku czopki mają średnicę 1,5μm i może
rozróżnić dwa obiekty gdy dwa pobudzone czopki
rozdzielone są jednym niepobudzonym. Biorąc
pod uwagę promień oka 2,3cm

Czyli około 25 sekund łuku

radiana

4

6

10

3

,

1

023

,

0

10

3

sin



















Powiększenie mikroskopu

Interferencja ogranicza zdolność

powiększającą

Kontrast można poprawić wpływając na

amplitudę bądź częstotliwość fali świetlnej

Zasada kontrastu fazowego

Promień światła padając na
preparat przechodzi nie
zmieniony obok obiektu, lub
ulega dyfrakcji na cząstkach
preparatu różniącymi się od
otoczenia współczynnikiem
załamania. W zależności od
grubości preparatu i różnicy
współczynników załamania
obraz dyfrakcyjny ma inną
fazę niż światło nie
odchylone.

Komórki w: a) mikroskopie świetlnym; b) w czarnym

polu; c) w kontraście fazowym; d) w kontraście

Nomarskiego

Efekt pseudo-3D

• Intensywność i kolor różnych

elementów obrazu daje efekt
pseudo-trójwymiarowy

• Efekt ten zależy od grubości

preparatu, wypukłości i

współczynnika załamania

światła różnych obszarów
preparatu ale nie odpowiada
prawdziwej strukturze preparatu

Fluorescencja minerałów

Zasada fluorescencji

Zasada działania
filtru
interferencyjnego

Fluorescence Spectra

Shown below are excitation and emission spectra for 8 different dyes used in FACS immunofluorescence experiments.

Spectra are uncorrected for detector sensitivity and are scaled for presentation purposes.

Obraz jest efektem nałożenia 3
niezależnych obrazów rejestrowanych
w oddzielnych kanałach dla różnych
fluorochromów

Obraz wielobarwny

Uzyskujemy kilka obrazów
monochromatycznych, które w
wyniku nałożenia dają
sumaryczny obraz wielobarwny.

Komórka nerwowa - Żaba szponiasta (Xenopus laevis )
mikrotubule cytoszkieletu (na zielono)

jądro (na fioletowo).