Materiały do ćwiczeń

Ochrona Środowiska

„CYTOMETR PRZEPŁYWOWY”

2

Rozproszenie na wprost FSC

•

mierzone wzdłuż osi padającego światła lasera

•

określa wielkość komórki

Rozproszenie boczne SSC

•

mierzona pod kątem 90° w stosunku do wiązki laserowej

•

światło laserowe odbite i rozproszone

•

określa gęstość i liczbę ziarnistości

Detektor rozproszenia pod k

ątem 90 stopni

Detektor rozproszenia na
wprost

Laser

Właściwości FSC i SSC

SSC

FSC

B

Tc

Th

Treg

T17

J A K R O Z P O Z N A Ć L I M F O C Y T Y ?

CD4+

CD3+

FITC

PE

CD4+
CD3+

CD3+

CD3-4-

CD4+
CD3+

FL-1 (CD4)

FL

-2 (CD

3)

CD3+CD4+ to limfocyty Th
CD3+ to w większości limfocyty Tc
CD3-CD4- limfocyty B

np.

Cou

nt

0

200

400

600

800

1000

G

0

/ G

1

S

G

2

/ M

zawartość DNA

2N

4N

G

2

M

G

0

G

1

S

CYKL KOMÓRKOWY

Wykres dwuwymiarowy

-

kropkowy, gęstości (każda kropka reprezentuje pojedynczą komórkę)

-

analizuje intensywność fluorescencji dwóch parametrów

Metody oznaczania apoptozy i nekrozy:

Aneksyna-FITC (fluorosceina) + jodek propidyny

Aneksyna - FITC – łączy się z fosfatydyloseryną obecną na zewnątrz
błony komórek apoptotycznych - apoptoza

Jodek propidyny (PI) nie przenika przez nie uszkodzoną błonę komórek
żywych i wczesno apoptotycznych - barwi na
czerwono komórek nekrotycznych oraz późno apoptotycznych

http://www.chem.pg.gda.pl/Katedry/Leki_Biochemia/dydaktyka/kultury_tkankowe/morfologia_komorki_apoptotycznej.pdf

http://www.ujk.edu.pl/ibiol/ZRI/hodowla_tkankowa_wojcik_05.pdf

nekroza

Późna apoptoza

apoptoza