

 

Izolacja limfocytów ze śledziony: 

1.  Ułożyd mysz na prawym boku. 

2.  Odkazid skórę etanolem, a następnie naciąd i odciągnąd skórę. 

3.  Przeciąd otrzewnę i  uwidocznid śledzionę. 

4.  Wyciąd śledzionę (jałowe nożyczki i pęsetka). 

5.  Umieścid śledzionę na szalce Petrie’go  z 10% MEM. 

6.  „Wyczesad” śledzionę jałową igłą preparacyjną lub nożyczkami. 

7.  Zebrad płyn (z limfocytami) do probówki. 

8.  Odstawid zawiesinę na ok. 15 min. w celu oddzielenia się większych fragmentów 

tkanki śledziony. 

9.  Zebrad klarowny płyn do probówek, wirowad – 1500 rpm przez 5 min, a następnie 

zlad supernatant. 

10. Osad komórek zawiesid w 1ml 10% MEM. 



 

Barwienie błękitem tryopanu: 



 

Barwienie błękitem trypanu to proste barwienie dające możliwośd 

oceny żywotności 

populacji komórek

. Barwnik przenika do komórek przez uszkodzoną błoną 

komórkową, 

barwiąc je na niebiesko

. Nie pozwala rozróżnid komórek nekrotycznych 

i apoptotycznych 



 

Określenie żywotnośd limfocytów: 

1.  Pobrad próbkę zawiesiny komórek i rozcieoczyd 1:10 w PBS . 

2.  Dodad 4 krople 0,1% wodnego roztworu błękitu trypanu. 

3.  Kroplę zabarwionej zawiesiny nanieśd na szkiełko podstawowe i nakryd szkiełkiem 

nakrywkowym. 

4.  Policzyd 100 komórek, określając jaki procent komórek zabarwił się koloidowym 

barwnikiem (są to komórki martwe). 

5.  Wynik wyrazid w procencie żywych komórek.