1

LABORATORIUM 2. 

 

Temat: OTRZYMYWANIE WYBRANYCH PREPARATÓW 

BIOCHEMICZNYCH. 

 
Zadanie 1. Krystaliczna albumina jaja. 

 

Wykonanie: 

· Białko 1 jaja po oddzieleniu od żółtka umieścić w plastikowym cylindrze miarowym 

(w celu zmierzenia objętości) i przelać do plastikowego pojemniczka (zlewka nr1), 

-  w innym plastikowym cylindrze miarowym odmierzyć taką samą objętość 

nasyconego roztworu siarczanu amonu i dodać do zlewki nr 1wlewając go cienkim 
strumieniem równocześnie mieszając szklaną bagietką. Zamknąć pojemnik i 
wymieszać. 

· Wypada osad globulin, który należy odsączyć na miękkim, bibułowym sączku 

fałdowanym zbierając przesącz do szklanego cylindra miarowego.  

· Zmierzyć za pomocą szklanego cylindra miarowego objętość przesączu i przelać go do 

plastikowego pojemniczka (zlewka nr 2). 

-  dodać na każde 100 ml. przesączu 14,4 g drobno sproszkowanego siarczanu 

amonowego (UWAGA ! - 1 płaska łyżeczka to ok. 1,44 g siarczanu amonu).  
Siarczan amonowy dodawać małymi porcjami stale mieszając bagietką. Powstaje osad. 

· Powstały osad przesączyć do kolbki ssawkowej przez miękki sączek, korzystając z 

lejka Büchnera i pompy wodnej.  

· Osad zebrać z sączka za pomocą plastikowej łyżeczki do zlewki szklanej (szklanej 

probówki), 

-  rozpuścić w możliwie małej objętości wody  
-  i roztwór doprowadzić do pH 4,7 za pomocą 4 % kwasu octowego korzystając z pH-

metru, stale mieszając.  

· Roztwór przesączyć do kolbki ssawkowej przez miękki sączek, korzystając z lejka 

Büchnera i pompy wodnej.  

· Przelać przesącz do plastikowego pojemniczka (zlewki nr 3 – „albumina”), 
-  do klarownego przesączu dodać przy stałym mieszaniu pojedynczymi kroplami 

nasycony roztwór siarczanu amonowego aż do powstania trwałego, delikatnego 
zmętnienia.  

· Próbę pozostawić w lodówce. W ciągu 2 dni wypadają z zawiesiny kryształy albuminy 

jaja w formie igieł.  

 
Wypreparowane białko posłuży do realizacji dalszych ćwiczeń. 

 
 

Zadanie 2. Izolowanie glikogenu z wątroby - metoda Osterna  

 

Wykonanie:  
  

· 

Wątrobę (25 g) pociąć za pomocą nożyczek na drobne kawałki,  

- 

rozetrzeć w moździerzu z 1 łyżeczką piasku, czyli homogenizować (piasek 

dodawać porcjami). 

 

2

· 

Odmierzyć do plastikowego cylindra miarowego 10 ml. homogenatu. 

- 

do innego plastikowego cylindra miarowego odmierzyć10 objętości 

(czyli100 ml.) 5 % kwasu trójchlorooctowego, 

- 

przelać homogenat i kwas do plastikowego pojemnika (zlewka nr 1)  

i wymieszać (wstrząsając zlewką),  

- 

odstawić na 3 min.  

· 

Ciecz znad osadu przesączyć do szklanego cylindra miarowego przez miękki 

sączek bibułowy w celu zmierzenia objętości.  

- 

w innym szklanym cylindrze miarowym odmierzyć taką samą objętość 95 

% etanolu. 

· 

Do plastikowego pojemnika (zlewki – przesącz z glikogenem) przelać przesącz 

i dodawać, stale mieszając 95 % etanol.  

· 

Zamknąć zlewkę, wymieszać i oddać prowadzącemu. 

 

 
Wytracony glikogen po odsączeniu będzie wykorzystany w kolejnych ćwiczeniach. 
 
 
Zadanie 3. Izolacja kwasów nukleinowych z komórek bakterii. 

 

Wykonanie: 

·  Do probówki Eppendorfa dodać: 

-  0,1 ml gęstej zawiesiny bakterii (E. Coli) 

-  0,4 ml r-ru lizującego: 3 % SDS w buforze TRIS 50 mM o pH 12,6  

·  „eppendorfkę” umieścić w łaźni wodnej o temp. 55 

O

C na 10 

¸ 20 minut,  

·  następnie dodać : 

-  0,5 ml mieszaniny odbiałczającej: chloroform – fenol 1:1,  

·  odwirować próbę w temp. 4 

O

C (wirówka Eppendorfa umieszczona w lodówce) 

przy 6000 obrotów przez 5 minut.  

·  Wytrącone DNA nawinąć na bagietkę i przenieść do nowej probówki Eppendorfa. 

 

Uzyskany materiał zostanie zamrożony i posłuży do dalszych badań (elektroforeza).

 

 

 

 
 
 
 

 

3

Zadanie 4. Otrzymywanie preparatu inwertazy z drożdży. 

 
 

Wykonanie: 

 

·  5 g drożdży rozcierać w moździerzu z piaskiem,  

-  przez 5 min dodać około 25 ml. wody i ponownie dokładnie rozetrzeć. 

·  Odwirować w temp. 20

0

C, przez 10 min. przy 6 000 obr/min., lub przesączyć. 

·  Zmierzyć za pomocą szklanego cylindra miarowego objętość supernatantu 

(cieczy nadosadowej), 

·  Do innego szklanego cylindra miarowego odmierzyć 5-krotną objętość acetonu 

-  przelać do plastikowej zlewki nr 1. 

·  Supernatant też przelać do zlewki nr 1 (tej, w której jest już aceton). 
·  Zakręcić pojemnik i wymieszać. Wytrąca się osad.  
·  Próbę należy przesączyć na miękkim sączku bibułowym.  
·  Na sączku osadza się osad, który następnie należy zebrać za pomocą plastikowej 

łyżeczki do plastikowego pojemnika (zlewki nr 2) 

·  Osad w zlewce nr 2 należy rozpuścić w 20 ml. wody destylowanej dodawanej 

porcjami.  

·  Sączyć na miękkim sączku bibułowym do plastikowego pojemnika (zlewki -

inwertaza z drożdży).  

 

Uzyskany  przesącz zawierający  enzym  można przechowywać  w  lodówce przez kilka 

tygodni.  Inwertaza  po  50-krotnym  rozcieńczeniu  będzie  wykorzystywana  w  dalszych 

ćwiczeniach do badań nad aktywnością enzymatyczną.