Rekonstrukcja pęcherza
Rekonstrukcja pęcherza
Na podstawie artykułu :
Na podstawie artykułu :
Development of Seeded Scaffold in Great
Development of Seeded Scaffold in Great
Omentum: Feasibility of an in vivo Bioreactor for
Omentum: Feasibility of an in vivo Bioreactor for
Bladder Tissue Engineering.
Bladder Tissue Engineering.
H.Baumert, P.Simon, M.Hekmati, G.Fromont, M.Levy,
H.Baumert, P.Simon, M.Hekmati, G.Fromont, M.Levy,
A.Balaton, V.Molinie, B.Malavaud
A.Balaton, V.Molinie, B.Malavaud
Opracowała: Karolina Meger
Opracowała: Karolina Meger
Inżynieria tkankowa jest obiecującą techniką w
Inżynieria tkankowa jest obiecującą techniką w
rekonstrukcji pęcherza moczowego. Jednak
rekonstrukcji pęcherza moczowego. Jednak
jednym w problemów związanym z rekonstrukcją
jednym w problemów związanym z rekonstrukcją
jest włoknienie podczas dojrzewania tkanki.
jest włoknienie podczas dojrzewania tkanki.
W przeprowadzonym eksperymencie badano
W przeprowadzonym eksperymencie badano
model wykorzystujący wielką sieć jako bioreaktor
model wykorzystujący wielką sieć jako bioreaktor
in vivo dla utworzenia tkanki.
in vivo dla utworzenia tkanki.
Materiały i metody
Materiały i metody
Pierwotna hodowla komórek urothelium i mięśni gładkich.
Pierwotna hodowla komórek urothelium i mięśni gładkich.
- pobrano fragmenty pęcherza (4 cm
- pobrano fragmenty pęcherza (4 cm
2
2
) od świń;
) od świń;
-
-
UROTHELIUM
UROTHELIUM
- zeskrobano ze ścianki pęcherza oraz poddano trawieniu
- zeskrobano ze ścianki pęcherza oraz poddano trawieniu
kolagenazą i elastazą
kolagenazą i elastazą
- inkubacja w keratynocyte SFM oraz EGF i ekstraktem z
- inkubacja w keratynocyte SFM oraz EGF i ekstraktem z
przysadki;
przysadki;
-
-
KOMÓRKI MIĘŚNI GŁADKICH
KOMÓRKI MIĘŚNI GŁADKICH
- trawiono kolagenazą IV oraz wysiano na podłoże
- trawiono kolagenazą IV oraz wysiano na podłoże
DMEM:Ham’s F12 wzbogacone 10% cielęcą surowicą płodową
DMEM:Ham’s F12 wzbogacone 10% cielęcą surowicą płodową
Materiały i metody
Materiały i metody
Wysiew komórek na szkielet SIS
Wysiew komórek na szkielet SIS
- wysiano komórki na jelitową warstwę podśluzówkową (SIS)
- wysiano komórki na jelitową warstwę podśluzówkową (SIS)
- uwodniono w keratynocyte SFM : DMEM-Ham’s F12 (1:1)
- uwodniono w keratynocyte SFM : DMEM-Ham’s F12 (1:1)
- płytki obrócono gdy urothelium pokryło >80% powierzchni i
- płytki obrócono gdy urothelium pokryło >80% powierzchni i
wysiano komórki mięśni gładkich
wysiano komórki mięśni gładkich
Transfer chirurgiczny do sieci
Transfer chirurgiczny do sieci
- płytki ukształtowano w kulę otaczającą
- płytki ukształtowano w kulę otaczającą
200 ml protezę piersi a następnie
200 ml protezę piersi a następnie
wszczepiono konstrukcję
wszczepiono konstrukcję
Materiały i metody
Materiały i metody
Charakterystyka konstrukcji:
Charakterystyka konstrukcji:
Analiza histologiczna:
Analiza histologiczna:
- barwienie eozyna/hematoksylina
- barwienie eozyna/hematoksylina
Analiza immunohistochemiczna
Analiza immunohistochemiczna
- inkubacja z wyznakowanym przeciwciałem
- inkubacja z wyznakowanym przeciwciałem
- badania kontrastowe z hematoksyliną
- badania kontrastowe z hematoksyliną
Kontrola pasków kurczliwych
Kontrola pasków kurczliwych
- badano izometryczne skurcze używając siły wyparcia
- badano izometryczne skurcze używając siły wyparcia
przetwornika
przetwornika
Details of the different antibodies used for immunostaining
CK7
OV-
TL/12 30
Dako France
SAS
1:20
0
Urothelial cells
CK20
Ks 20.8
Dako France
SAS
1:50
Umbrella cells
Uroplakin III
AU1
Progen
Biotechnik
1:1
Uroplakin III
Actin smooth
muscle (ASM)
1A4
Dako France
SAS
1:50
0
Muscle and mature
fibroblast
Vimentin
V9
Dako France
SAS
1:30
0
Fibroblast
CD34
QBEND
10
Dako France
SAS
1:15
0
Immature fibroblast
Protein S100
S100
Dako France
SAS
1:40
00
Nerves and
adipocytes
von Willebrand
factor (F VIII)
F VIII
Dako France
SAS
1:10
0
Endothelial mature
cells
Antibody
Clone
Provider
Dilut
ion
Specificity
Wyniki
Wyniki
-
Brak zmian morfologicznych;
Brak zmian morfologicznych;
-
Badania immunochemiczne wykluczyły zanieczyszczenie
Badania immunochemiczne wykluczyły zanieczyszczenie
fibroblastów;
fibroblastów;
-
Regeneracja bez powikłań;
Regeneracja bez powikłań;
-
Konstrukcja głęboko osadzona w gęstej sieci naczyniowej;
Konstrukcja głęboko osadzona w gęstej sieci naczyniowej;
-
Grubość ściany śr. 4 mm (<0,2 mm SIS);
Grubość ściany śr. 4 mm (<0,2 mm SIS);
-
Analiza histologiczna
Analiza histologiczna
- wielowarstwowa spolaryzowana struktura
- wielowarstwowa spolaryzowana struktura
- naczynia krwionośne po zewnętrznej stronie ściany
- naczynia krwionośne po zewnętrznej stronie ściany
- skład ustalony w odpowiednich warstwach
- skład ustalony w odpowiednich warstwach
Wyniki
Wyniki
-
Analiza immunohistochemiczna
Analiza immunohistochemiczna
- Ig anty cytokeratynom – polarny rozdział urothelium
- Ig anty cytokeratynom – polarny rozdział urothelium
- brak immunoreaktywnosci względem cytokiny 20 i
- brak immunoreaktywnosci względem cytokiny 20 i
uroplakins
uroplakins
- pozytywna reakcja z antyaktyną – wielowarstwowość
- pozytywna reakcja z antyaktyną – wielowarstwowość
- negatywna reakcja z CD34 – dojrzałe fibroblasty
- negatywna reakcja z CD34 – dojrzałe fibroblasty
- sieć kapilar – Ig anty czynnik Willebranda
- sieć kapilar – Ig anty czynnik Willebranda
- brak autonomicznych nerwów
- brak autonomicznych nerwów
-
Kurczliwość konstukcji proporcjonalna
Kurczliwość konstukcji proporcjonalna
do stymulacji acetylocholiną
do stymulacji acetylocholiną
Wnioski
Wnioski
Wielka sieć pozwala in vivo dojrzewać wysianemu
Wielka sieć pozwala in vivo dojrzewać wysianemu
szkieletowi wraz z rozwojem gęstej sieci naczyń
szkieletowi wraz z rozwojem gęstej sieci naczyń
krwionośnych, które zapobiegają zwłóknieniu oraz utracie
krwionośnych, które zapobiegają zwłóknieniu oraz utracie
kurczliwości. Dojrzewanie in vivo może być pierwszym
kurczliwości. Dojrzewanie in vivo może być pierwszym
krokiem do konstrukcji in situ.
krokiem do konstrukcji in situ.
Dziękuję za uwagę.
Dziękuję za uwagę.
Document Outline