Rekonstrukcja pęcherza

Rekonstrukcja pęcherza

Na podstawie artykułu :

Na podstawie artykułu :

Development of Seeded Scaffold in Great

Development of Seeded Scaffold in Great

Omentum: Feasibility of an in vivo Bioreactor for

Omentum: Feasibility of an in vivo Bioreactor for

Bladder Tissue Engineering.

Bladder Tissue Engineering.

H.Baumert, P.Simon, M.Hekmati, G.Fromont, M.Levy,

H.Baumert, P.Simon, M.Hekmati, G.Fromont, M.Levy,

A.Balaton, V.Molinie, B.Malavaud

A.Balaton, V.Molinie, B.Malavaud

Opracowała: Karolina Meger

Opracowała: Karolina Meger

Inżynieria tkankowa jest obiecującą techniką w

Inżynieria tkankowa jest obiecującą techniką w

rekonstrukcji pęcherza moczowego. Jednak

rekonstrukcji pęcherza moczowego. Jednak

jednym w problemów związanym z rekonstrukcją

jednym w problemów związanym z rekonstrukcją

jest włoknienie podczas dojrzewania tkanki.

jest włoknienie podczas dojrzewania tkanki.

W przeprowadzonym eksperymencie badano

W przeprowadzonym eksperymencie badano

model wykorzystujący wielką sieć jako bioreaktor

model wykorzystujący wielką sieć jako bioreaktor

in vivo dla utworzenia tkanki.

in vivo dla utworzenia tkanki.

Materiały i metody

Materiały i metody



Pierwotna hodowla komórek urothelium i mięśni gładkich.

Pierwotna hodowla komórek urothelium i mięśni gładkich.

- pobrano fragmenty pęcherza (4 cm

- pobrano fragmenty pęcherza (4 cm

2

2

) od świń;

) od świń;

-

-

UROTHELIUM

UROTHELIUM

- zeskrobano ze ścianki pęcherza oraz poddano trawieniu

- zeskrobano ze ścianki pęcherza oraz poddano trawieniu

kolagenazą i elastazą

kolagenazą i elastazą

- inkubacja w keratynocyte SFM oraz EGF i ekstraktem z

- inkubacja w keratynocyte SFM oraz EGF i ekstraktem z

przysadki;

przysadki;

-

-

KOMÓRKI MIĘŚNI GŁADKICH

KOMÓRKI MIĘŚNI GŁADKICH

- trawiono kolagenazą IV oraz wysiano na podłoże

- trawiono kolagenazą IV oraz wysiano na podłoże

DMEM:Ham’s F12 wzbogacone 10% cielęcą surowicą płodową

DMEM:Ham’s F12 wzbogacone 10% cielęcą surowicą płodową

Materiały i metody

Materiały i metody



Wysiew komórek na szkielet SIS

Wysiew komórek na szkielet SIS

- wysiano komórki na jelitową warstwę podśluzówkową (SIS)

- wysiano komórki na jelitową warstwę podśluzówkową (SIS)

- uwodniono w keratynocyte SFM : DMEM-Ham’s F12 (1:1)

- uwodniono w keratynocyte SFM : DMEM-Ham’s F12 (1:1)

- płytki obrócono gdy urothelium pokryło >80% powierzchni i

- płytki obrócono gdy urothelium pokryło >80% powierzchni i

wysiano komórki mięśni gładkich

wysiano komórki mięśni gładkich



Transfer chirurgiczny do sieci

Transfer chirurgiczny do sieci

- płytki ukształtowano w kulę otaczającą

- płytki ukształtowano w kulę otaczającą

200 ml protezę piersi a następnie

200 ml protezę piersi a następnie

wszczepiono konstrukcję

wszczepiono konstrukcję

Materiały i metody

Materiały i metody



Charakterystyka konstrukcji:

Charakterystyka konstrukcji:



Analiza histologiczna:

Analiza histologiczna:

- barwienie eozyna/hematoksylina

- barwienie eozyna/hematoksylina



Analiza immunohistochemiczna

Analiza immunohistochemiczna

- inkubacja z wyznakowanym przeciwciałem

- inkubacja z wyznakowanym przeciwciałem

- badania kontrastowe z hematoksyliną

- badania kontrastowe z hematoksyliną



Kontrola pasków kurczliwych

Kontrola pasków kurczliwych

- badano izometryczne skurcze używając siły wyparcia

- badano izometryczne skurcze używając siły wyparcia

przetwornika

przetwornika

Details of the different antibodies used for immunostaining

CK7

OV-
TL/12 30

Dako France
SAS

1:20
0

Urothelial cells

CK20

Ks 20.8

Dako France
SAS

1:50

Umbrella cells

Uroplakin III

AU1

Progen
Biotechnik

1:1

Uroplakin III

Actin smooth
muscle (ASM)

1A4

Dako France
SAS

1:50
0

Muscle and mature
fibroblast

Vimentin

V9

Dako France
SAS

1:30
0

Fibroblast

CD34

QBEND
10

Dako France
SAS

1:15
0

Immature fibroblast

Protein S100

S100

Dako France
SAS

1:40
00

Nerves and
adipocytes

von Willebrand
factor (F VIII)

F VIII

Dako France
SAS

1:10
0

Endothelial mature
cells

Antibody

Clone

Provider

Dilut

ion

Specificity

Wyniki

Wyniki

-

Brak zmian morfologicznych;

Brak zmian morfologicznych;

-

Badania immunochemiczne wykluczyły zanieczyszczenie

Badania immunochemiczne wykluczyły zanieczyszczenie

fibroblastów;

fibroblastów;

-

Regeneracja bez powikłań;

Regeneracja bez powikłań;

-

Konstrukcja głęboko osadzona w gęstej sieci naczyniowej;

Konstrukcja głęboko osadzona w gęstej sieci naczyniowej;

-

Grubość ściany śr. 4 mm (<0,2 mm SIS);

Grubość ściany śr. 4 mm (<0,2 mm SIS);

-

Analiza histologiczna

Analiza histologiczna

- wielowarstwowa spolaryzowana struktura

- wielowarstwowa spolaryzowana struktura

- naczynia krwionośne po zewnętrznej stronie ściany

- naczynia krwionośne po zewnętrznej stronie ściany

- skład ustalony w odpowiednich warstwach

- skład ustalony w odpowiednich warstwach

Wyniki

Wyniki

-

Analiza immunohistochemiczna

Analiza immunohistochemiczna

- Ig anty cytokeratynom – polarny rozdział urothelium

- Ig anty cytokeratynom – polarny rozdział urothelium

- brak immunoreaktywnosci względem cytokiny 20 i

- brak immunoreaktywnosci względem cytokiny 20 i

uroplakins

uroplakins

- pozytywna reakcja z antyaktyną – wielowarstwowość

- pozytywna reakcja z antyaktyną – wielowarstwowość

- negatywna reakcja z CD34 – dojrzałe fibroblasty

- negatywna reakcja z CD34 – dojrzałe fibroblasty

- sieć kapilar – Ig anty czynnik Willebranda

- sieć kapilar – Ig anty czynnik Willebranda

- brak autonomicznych nerwów

- brak autonomicznych nerwów

-

Kurczliwość konstukcji proporcjonalna

Kurczliwość konstukcji proporcjonalna

do stymulacji acetylocholiną

do stymulacji acetylocholiną

Wnioski

Wnioski

Wielka sieć pozwala in vivo dojrzewać wysianemu

Wielka sieć pozwala in vivo dojrzewać wysianemu

szkieletowi wraz z rozwojem gęstej sieci naczyń

szkieletowi wraz z rozwojem gęstej sieci naczyń

krwionośnych, które zapobiegają zwłóknieniu oraz utracie

krwionośnych, które zapobiegają zwłóknieniu oraz utracie

kurczliwości. Dojrzewanie in vivo może być pierwszym

kurczliwości. Dojrzewanie in vivo może być pierwszym

krokiem do konstrukcji in situ.

krokiem do konstrukcji in situ.

Dziękuję za uwagę.

Dziękuję za uwagę.