Podsumowanie ćwiczenia 

3

Wtórne uszkodzenia DNA

Depurynacja alkilowanych zasad DNA 

 0       1        3      0 F   1 F 
   3 F

Depurynacja alkilowanych zasad 

DNA 

 0       0 F       1       1  F    3      3 F

Forma 

kolista

Forma liniowa

Identyfikacja Fapy-7MeG przez białko 

Fpg

Forma kolista

Forma liniowa

   0              0 F            1              1 F           3              
3 F

Fapy-7MeG blokuje replikację faga M13

Liczymy łysinki, szukamy mutantów i robimy wykres przeżywalności i 

częstości mutacji

Ćwiczenie 4

Specyficzność 

mutagenów 

chemicznych i 

fizycznych, typy 

mutacji

Związki alkilujące

Alkilacja guaniny 
w pozycji O

6

 jest 

odpowiedzialna za 
80% powstających 
mutacji; są to 
mutacje GCAT

Ilościowo przeważa 
7MeG, ale ani nie 
blokuje replikacji, ani 
transkrypcji, ani nie 
zmienia właściwości 
kodujących G

3MeA, 3MeC (również 
1MeA) blokują 
replikację - letalne

3MeA ATTA

Konsekwencje uszkodzenia 

DNA

1. Błędne parowanie zasad podczas syntezy 

DNA 

      O

6

MeG:T -    GC  AT

2. Blokowanie replikacji – udział polimeraz 

DNA o obniżonej wierności w powstawaniu 
mutacji

Czynniki mutagenne 

pozostawiają swoisty ślad w 

DNA w postaci 

charakterystycznych mutacji

-galaktozydaza

-GGG-AAT-GAG-TCA-GGC-

-GLU-

-461-

CC 101  ATCG    - TAG – amber    

Glu

                                     G

CC 102  GC  AT  - GGG – Gly  Glu

                                        A

CC 103  GC  CG  - CAG – Gln  Glu

                                     G

CC 104  GC  TA  - GCG – Ala  Glu

                                       A

CC 105  AT  TA  - GTG – Val  Glu

                                       A

CC 106  AT  GC  - AAG – Lys  Glu

                                     G 

TEST MILLERA

DMS

 - uszkodzenia dsDNA

O

6

MeG - 0,6%  GCAT 

(CC102)

3MeA - 13%      ATTA 

(CC105)

7MeG - 85%      brak 
mutacji

Uszkodzenia indukowane promieniowaniem 

UV

Dimer pirymidynowy

6-4 fotoprodukt

Dodatkowo UV może indukować powstawanie 
utlenionych zasad

  

  

Deficyt w XPV

Pol

 

 



Pol ,

T T

T T

T T

A

A

UV

UV

Pol V 

(E.coli)

T=T
A  G

Xeroderma 
pigmentosum 
(Variant)

CC106

UV

GCCG

UV

ATGC

Prawidłowe i błędne parowanie 8-
oksyguaniny

H

H

N

N

O

N

O

O

N

H

N

H

N

N

N

H

H

dR

dR

H

H

H

N

N

N

N

O

H

H

N

N

N

N

N

H

N

H

H

O

dR

dR

H

H

C (anti)

oxo

8

G (anti)

A (anti)

1

7

9

3

3

2

2

1

1

6

6

7

9

8

8

9

1

6

3

7

2

4

3

5

5

4

4

5

5

4

8

2

6

oxo

8

G (syn )

polimeraza DNA replikacyjna

8-oksyG:C            8-

oksyG:A

T:A

polimeraza DNA naprawcza

8-oksyG:C            8-

oksyG:C

G:C

1 -  3% prowadzi do 
mutacji w komórkach ze 
sprawną naprawą

Czynniki utleniające

replikacja

MutY

A

replikacja

replikacja

MutM

G

*

dGTP

         RFT

d

G

*

TP

MutT

d

G

*

MP

oxidative damage of nucleotide

 

Transwersja ATCG

  

  

 

 

szlaki mutagenezy

szlaki mutagenezy

 

 

8-o

8-o

ksy

ksy

G

G

A

T

A

G

*

C

G

*

C

G

Zasady w puli 
nukleotydów 
komórkowych są

100-10 000

- razy 

bardziej podatne na 
modyfikację niż w 
DNA.

Chociaż polimerazy 
DNA rozróżniają 
nukleotydy 
prawidłowe od 
nieprawidłowych, to 
rozróżnienie to nie 
jest doskonale

Każda grupa robi dwa ćwiczenia:

Dodajemy 170 ul H

2

O

2

 lub 250 ul 

H

2

O

2 

Naświetlamy UV przez 7 min

Proszę konsultować z 
asystentami rozcieńczenia 
szczepów – 

zmiany w stosunku do 

info w skrypcie

  

H

2

0

2

CC104 GC->TA

CC101 AT->CG

CC105 AT->TA

UV

8-

oksyG

8-

oksy

dGT

P

GO

A

DNA pol

GO

C

8-

oksy

dGM

P

8-

oksy

dGD

P

8-

oksy

dG

MTH1

nukleotyd
aza

  
GC

RFT

A
PC

OGG
1

8-

oksyG

OGG2

A
PA

DNA pol

GO
AP

BER

GO

A

A

MYH

  
TA

DNA 
pol

GO

C

8-

oksyG

  
GC

BER

BE
R

OGG
1