Podsumowanie ćwiczenia

3

Wtórne uszkodzenia DNA

Depurynacja alkilowanych zasad DNA

0 1 3 0 F 1 F
3 F

Depurynacja alkilowanych zasad

DNA

0 0 F 1 1 F 3 3 F

Forma

kolista

Forma liniowa

Identyfikacja Fapy-7MeG przez białko

Fpg

Forma kolista

Forma liniowa

0 0 F 1 1 F 3
3 F

Fapy-7MeG blokuje replikację faga M13

Liczymy łysinki, szukamy mutantów i robimy wykres przeżywalności i

częstości mutacji

Ćwiczenie 4

Specyficzność

mutagenów

chemicznych i

fizycznych, typy

mutacji

Związki alkilujące

Alkilacja guaniny
w pozycji O

6

jest

odpowiedzialna za
80% powstających
mutacji; są to
mutacje GCAT

Ilościowo przeważa
7MeG, ale ani nie
blokuje replikacji, ani
transkrypcji, ani nie
zmienia właściwości
kodujących G

3MeA, 3MeC (również
1MeA) blokują
replikację - letalne

3MeA ATTA

Konsekwencje uszkodzenia

DNA

1. Błędne parowanie zasad podczas syntezy

DNA

O

6

MeG:T - GC  AT

2. Blokowanie replikacji – udział polimeraz

DNA o obniżonej wierności w powstawaniu
mutacji

Czynniki mutagenne

pozostawiają swoisty ślad w

DNA w postaci

charakterystycznych mutacji

-galaktozydaza

-GGG-AAT-GAG-TCA-GGC-

-GLU-

-461-

CC 101 ATCG - TAG – amber 

Glu

G

CC 102 GC  AT - GGG – Gly  Glu

A

CC 103 GC  CG - CAG – Gln  Glu

G

CC 104 GC  TA - GCG – Ala  Glu

A

CC 105 AT  TA - GTG – Val  Glu

A

CC 106 AT  GC - AAG – Lys  Glu

G

TEST MILLERA

DMS

- uszkodzenia dsDNA

O

6

MeG - 0,6% GCAT

(CC102)

3MeA - 13% ATTA

(CC105)

7MeG - 85% brak
mutacji

Uszkodzenia indukowane promieniowaniem

UV

Dimer pirymidynowy

6-4 fotoprodukt

Dodatkowo UV może indukować powstawanie
utlenionych zasad

Deficyt w XPV

Pol



Pol ,

T T

T T

T T

A

A

UV

UV

Pol V

(E.coli)

T=T
A G

Xeroderma
pigmentosum
(Variant)

CC106

UV

GCCG

UV

ATGC

Prawidłowe i błędne parowanie 8-
oksyguaniny

H

H

N

N

O

N

O

O

N

H

N

H

N

N

N

H

H

dR

dR

H

H

H

N

N

N

N

O

H

H

N

N

N

N

N

H

N

H

H

O

dR

dR

H

H

C (anti)

oxo

8

G (anti)

A (anti)

1

7

9

3

3

2

2

1

1

6

6

7

9

8

8

9

1

6

3

7

2

4

3

5

5

4

4

5

5

4

8

2

6

oxo

8

G (syn )

polimeraza DNA replikacyjna

8-oksyG:C  8-

oksyG:A

T:A

polimeraza DNA naprawcza

8-oksyG:C  8-

oksyG:C

G:C

1 - 3% prowadzi do
mutacji w komórkach ze
sprawną naprawą

Czynniki utleniające

replikacja

MutY

A

replikacja

replikacja

MutM

G

*

dGTP

RFT

d

G

*

TP

MutT

d

G

*

MP

oxidative damage of nucleotide

Transwersja ATCG

szlaki mutagenezy

szlaki mutagenezy

8-o

8-o

ksy

ksy

G

G

A

T

A

G

*

C

G

*

C

G

Zasady w puli
nukleotydów
komórkowych są

100-10 000

- razy

bardziej podatne na
modyfikację niż w
DNA.

Chociaż polimerazy
DNA rozróżniają
nukleotydy
prawidłowe od
nieprawidłowych, to
rozróżnienie to nie
jest doskonale

Każda grupa robi dwa ćwiczenia:

Dodajemy 170 ul H

2

O

2

lub 250 ul

H

2

O

2

Naświetlamy UV przez 7 min

Proszę konsultować z
asystentami rozcieńczenia
szczepów –

zmiany w stosunku do

info w skrypcie

H

2

0

2

CC104 GC->TA

CC101 AT->CG

CC105 AT->TA

UV

8-

oksyG

8-

oksy

dGT

P

GO

A

DNA pol

GO

C

8-

oksy

dGM

P

8-

oksy

dGD

P

8-

oksy

dG

MTH1

nukleotyd
aza

GC

RFT

A
PC

OGG
1

8-

oksyG

OGG2

A
PA

DNA pol

GO
AP

BER

GO

A

A

MYH

TA

DNA
pol

GO

C

8-

oksyG

GC

BER

BE
R

OGG
1