Pobieranie

Pobieranie

materiałów z worka

materiałów z worka

napletkowego do

napletkowego do

badań

badań

Kampylobakterioza –

Kampylobakterioza –

choroba mętwikowa

choroba mętwikowa

Choroba rzęsistkowa

Choroba rzęsistkowa

1

1

, Schorzenia zwalczane z

, Schorzenia zwalczane z

urzędu (powodujące

urzędu (powodujące

niepłodność)

niepłodność)

2

2

Schorzenia weneryczne

Schorzenia weneryczne

przenoszone drogą płciową

przenoszone drogą płciową

w czasie aktu krycia i AI

w czasie aktu krycia i AI

3

3

Przeżywają mrożenie

Przeżywają mrożenie



Rodzina : Spirillaceae

Rodzina : Spirillaceae



Rodzaj: Campylobacter

Rodzaj: Campylobacter



Gatunek

Gatunek



Camp.foetus Camp.sputorum Camp. faecalis

Camp.foetus Camp.sputorum Camp. faecalis



Podgatunek

Podgatunek



C. foetus C. sputorum

C. foetus C. sputorum



1. C. foetus foetus 1. C. sputorum sputorum

1. C. foetus foetus 1. C. sputorum sputorum



2.C. foetus intestinalis 2.C. sputorum bubulus

2.C. foetus intestinalis 2.C. sputorum bubulus



3.C. foetus jejuni 3.C. sputorum mucosalis

3.C. foetus jejuni 3.C. sputorum mucosalis

4. C. sp. faecalis

4. C. sp. faecalis

Kampylobakterioza (choroba

Kampylobakterioza (choroba

mętwikowa,dawniej wibrioza)

mętwikowa,dawniej wibrioza)



Patogeneza

Patogeneza



zakażenie w czasie kopulacji i AI

zakażenie w czasie kopulacji i AI



Buhaje zakażone na całe życie

Buhaje zakażone na całe życie



Po 6 dniach są w szyjce macicy

Po 6 dniach są w szyjce macicy



Po 20 dniach w jajowodach (powodują

Po 20 dniach w jajowodach (powodują

stany zalne błony śluzowej = niedrożność

stany zalne błony śluzowej = niedrożność

jajowodów i niepłodność

jajowodów i niepłodność

Kampylobakterioza

Kampylobakterioza



Objawy u samic

Objawy u samic



1

1

nieregularny cykl płciowy (28 35 dni)

nieregularny cykl płciowy (28 35 dni)

obumieranie zarodków w jajowodach

obumieranie zarodków w jajowodach



2

2

późne ronienia od 4 do 7 mca ciąży

późne ronienia od 4 do 7 mca ciąży



Objawy u samców

Objawy u samców



Drobnoustruj bytuje na błonie śluzowej

Drobnoustruj bytuje na błonie śluzowej

prącia i napletka (zachyłki bdb dla

prącia i napletka (zachyłki bdb dla

beztlenowców)

beztlenowców)



Bardzo wrażliwe samce po 3 roku

Bardzo wrażliwe samce po 3 roku



U 20% smców i samic jest wrodzona

U 20% smców i samic jest wrodzona

odporność, u byków nie ma objawów

odporność, u byków nie ma objawów

klinicznych wyraźnych

klinicznych wyraźnych

Kampylobakterioza

Kampylobakterioza



U krów dochodzi do samowyleczenia po 50

U krów dochodzi do samowyleczenia po 50

dni

dni



Krowy które roniły = samowyleczenie po 3-6

Krowy które roniły = samowyleczenie po 3-6

m-cach

m-cach



Odporność trwa 5-6 lat, niektóre później

Odporność trwa 5-6 lat, niektóre później

pomyślnie rodzą cielęta, niektóre niepłodne

pomyślnie rodzą cielęta, niektóre niepłodne



ZWALCZANIE

ZWALCZANIE



Wszystkie samce są rutynowo badane w

Wszystkie samce są rutynowo badane w

kierunku kamylobakteriozy

kierunku kamylobakteriozy



Badanie polega na pobraniu wypłuczyn worka

Badanie polega na pobraniu wypłuczyn worka

napletkowego

napletkowego



Do worka wlewa się 100 ml płynu

Do worka wlewa się 100 ml płynu

fizjologicznego wlewnikiem z kateterem

fizjologicznego wlewnikiem z kateterem

Kampylobakterioza

Kampylobakterioza



Masowanie worka napletkowego przez 5 minut

Masowanie worka napletkowego przez 5 minut



Zawartość zlać z powrotem do butelki

Zawartość zlać z powrotem do butelki



Butelkę oznaczyć literą

Butelkę oznaczyć literą

C

C

i przesłać do

i przesłać do

badania

badania



Materiał musi być zbadany w ciągu 8 godzin

Materiał musi być zbadany w ciągu 8 godzin



Wypłuczyny wiruje się 30 minut 3,5 tyś.

Wypłuczyny wiruje się 30 minut 3,5 tyś.

obrotów na minutę

obrotów na minutę



Pobiera się kroplę pipetą z 1/3 dolnej

Pobiera się kroplę pipetą z 1/3 dolnej

supernatantu na szkiełko i ogląda pod

supernatantu na szkiełko i ogląda pod

mikroskopem 400*

mikroskopem 400*



Ziarenka, spirale przecinki ze zdolnością ruchu

Ziarenka, spirale przecinki ze zdolnością ruchu

Kampylobakterioza

Kampylobakterioza



materiał do posiewów pobiera się z osadu i

materiał do posiewów pobiera się z osadu i

posiewa:

posiewa:



1

1

posiew

posiew

na 2 pożywki stałe: agar z krwią (2

na 2 pożywki stałe: agar z krwią (2

krople)

krople)



2

2

posiew

posiew

na 2 półpłynne pożywki Bartletta

na 2 półpłynne pożywki Bartletta

(masa jajeczna zalana płynem Ringera – 4

(masa jajeczna zalana płynem Ringera – 4

krople)

krople)



Na 72 godziny w warunkach mikroaerofilnych

Na 72 godziny w warunkach mikroaerofilnych



85% N, 10% CO2, 5% O2

85% N, 10% CO2, 5% O2



Po 72h – oglądamy pożywkę stałą –

Po 72h – oglądamy pożywkę stałą –

obserwujemy kolonie Campylobacter

obserwujemy kolonie Campylobacter

Kampylobakterioza

Kampylobakterioza



Formy patogenne foetus: okrągłe,

Formy patogenne foetus: okrągłe,

wypukłe, błyszczące,

wypukłe, błyszczące,

szaro-białe

szaro-białe



Formy niepatogenne sputorum: płaskie,

Formy niepatogenne sputorum: płaskie,

szaro-zielone,

szaro-zielone,

mogą hemolizować

mogą hemolizować

Kampylobakterioza

Kampylobakterioza



Do dokładnej diagnozy potrzeba czystych

Do dokładnej diagnozy potrzeba czystych

hodowli:

hodowli:



Zanieczyszczone pożywki stałe: wszystkie

Zanieczyszczone pożywki stałe: wszystkie

kolonie przepuścić przez filtr bakteriolog. i

kolonie przepuścić przez filtr bakteriolog. i

ostatnie krople posiać na pożywki stałe i

ostatnie krople posiać na pożywki stałe i

Bartletta

Bartletta



Zanieczyszczone pożywki Bartletta:

Zanieczyszczone pożywki Bartletta:

rozcieńczyć 10 krotnie płynem,

rozcieńczyć 10 krotnie płynem,

odwirować przy 10 tyś obrotów, i z 1/3

odwirować przy 10 tyś obrotów, i z 1/3

dolnej pobrać materiał na pożywki stałe i

dolnej pobrać materiał na pożywki stałe i

Bartletta

Bartletta

Kampylobakterioza

Kampylobakterioza



Z czystych hodowli przeprowadza się

Z czystych hodowli przeprowadza się

doświadczenia:

doświadczenia:



1 Próba katalazowa

1 Próba katalazowa

:

:



2 cm 3% wody utlenionej + 2 cm czystej

2 cm 3% wody utlenionej + 2 cm czystej

hodowli Bartletta

hodowli Bartletta



Całość do probówki z korkiem z kapilarą,

Całość do probówki z korkiem z kapilarą,

której koniec sięga do dolnej powierzchni

której koniec sięga do dolnej powierzchni

korka, probówkę odwracamy, jeżeli jest

korka, probówkę odwracamy, jeżeli jest

wytwarzana katalaza, z kapilary wypływa

wytwarzana katalaza, z kapilary wypływa

płyn

płyn

Kampylobakterioza

Kampylobakterioza



Próba siarkowodorowa H2S

Próba siarkowodorowa H2S



Pożywkę Bartletta zakażamy 6-8 kroplami

Pożywkę Bartletta zakażamy 6-8 kroplami

72 h czystej hodowli z pożywki Bartletta.

72 h czystej hodowli z pożywki Bartletta.

Zamykamy korkiem, nad pożywką

Zamykamy korkiem, nad pożywką

znajduje się bibułka nasączona octanem

znajduje się bibułka nasączona octanem

ołowiawym – z H2S tworzy się siarczek Pb

ołowiawym – z H2S tworzy się siarczek Pb

– barwiący bibułę na kolor

– barwiący bibułę na kolor

czarny

czarny

– próba

– próba

dodatnia

dodatnia

Kampylobakterioza

Kampylobakterioza



1% glicyna

1% glicyna



Podłoże + glicyna + kropla z hodowli

Podłoże + glicyna + kropla z hodowli



Kontrola wzrostu po 72h w warunkach

Kontrola wzrostu po 72h w warunkach

beztlenowych

beztlenowych



3,5% NaCl

3,5% NaCl



Podłoże + NaCl + 6 kropli w warunkach

Podłoże + NaCl + 6 kropli w warunkach

beztlenowych 72h

beztlenowych 72h



Temperatura 25

Temperatura 25



Podłoże tioglicerynowe + 6 kropli hodowli

Podłoże tioglicerynowe + 6 kropli hodowli

i po 72h wzrost

i po 72h wzrost

katala

za

H2S

1%

glicyn

a

3.5

%

NaC

l

Temp

.

25

Tem

p

42

C.F.Foetus

+

-

-

-

+

-

C.F.Intestinal

is

+

+

+

-

+

+

C.F.jejuni

+

+

+

-

-

+

C.S.sputorum

-

+

+

-

+

-

C.S.bubulus

-

+

+

+

+-

+-

C.S.mucosali

s

-

+

-

-

?

?

C.S.faecalis

+

+

+

+-

_

?

Różnicowanie podgatunków na

Różnicowanie podgatunków na

podstawie szeregu

podstawie szeregu

biochemicznego

biochemicznego



W oparciu o ten szereg ustala się czy

W oparciu o ten szereg ustala się czy

buhaj jest nosicielem form

buhaj jest nosicielem form

patogennych czy nie.

patogennych czy nie.

Rzęsistnica

Rzęsistnica



Rzęsistek

Rzęsistek

– Trichomonas foetus,

– Trichomonas foetus,

pierwotniak dług. 10 -25 mikrometrów,

pierwotniak dług. 10 -25 mikrometrów,

kształt owalny lub cytryny, z przodu ma 3

kształt owalny lub cytryny, z przodu ma 3

wicie, błonę falującą z wicią skierowana

wicie, błonę falującą z wicią skierowana

do tyłu, wykonuje pląsające ruchy (pod

do tyłu, wykonuje pląsające ruchy (pod

mikroskopem)

mikroskopem)

Rzęsistnica

Rzęsistnica



Buhaje

Buhaje

- nosiciele na całe życie, beztlenowiec

- nosiciele na całe życie, beztlenowiec

bytuje i rozmnaża się w fałdach bł. śluzowej

bytuje i rozmnaża się w fałdach bł. śluzowej

prącia i dna worka napletkowego.

prącia i dna worka napletkowego.



Objawy

Objawy

- brak typowych, u 5% osobników

- brak typowych, u 5% osobników

zapalenie, wysięk, guzki, nadżerki wywołane

zapalenie, wysięk, guzki, nadżerki wywołane

florą warunkowo – patogenną

florą warunkowo – patogenną



Zakażenie – przez brudny sprzęt, ściółkę,

Zakażenie – przez brudny sprzęt, ściółkę,

ptaki

ptaki



Krowy jałówki

Krowy jałówki

– 60-70% ulega zakażeniu,

– 60-70% ulega zakażeniu,

inne mogą być odporne

inne mogą być odporne

Rzęsistnica

Rzęsistnica



Po 20 dniach

Po 20 dniach

od wniknięcia są w macicy

od wniknięcia są w macicy

tutaj wywołują ropne procesy zapalne

tutaj wywołują ropne procesy zapalne



Błonę śluzową

Błonę śluzową

uszkadzają w małym

uszkadzają w małym

stopniu, jednak wywołują wysięk, który

stopniu, jednak wywołują wysięk, który

jest dobrą pożywką dla bakterii

jest dobrą pożywką dla bakterii



Zarodk

Zarodk

i obumierają i dochodzi do ronień w

i obumierają i dochodzi do ronień w

2 – 4 miesiącu ciąży (później też)

2 – 4 miesiącu ciąży (później też)



Powstaje

Powstaje

ropomacicze, kilka litrów płynu,

ropomacicze, kilka litrów płynu,

jak zupa grochowa o ckliwym zapachu

jak zupa grochowa o ckliwym zapachu

Rzęsistnica

Rzęsistnica



Po 8 – 9 tyg

Po 8 – 9 tyg

wytwarzane przeciwciała na

wytwarzane przeciwciała na

błonie śluzowej powodują samowyleczenie,

błonie śluzowej powodują samowyleczenie,

powraca normalny cykl płciowy

powraca normalny cykl płciowy



Rozpoznanie

Rozpoznanie



Pobieranie zeskrobin + wypłuczyn z worka

Pobieranie zeskrobin + wypłuczyn z worka

napl

napl



Wypłuczyny

Wypłuczyny

można pobierać przy okazji

można pobierać przy okazji

pobierania materiału w kierunku

pobierania materiału w kierunku

kampylobakteriozy – odlać 5 ml płynu, dodać

kampylobakteriozy – odlać 5 ml płynu, dodać

antybiotyki, bo rzęsistek jest niewrażliwy na

antybiotyki, bo rzęsistek jest niewrażliwy na

antybiotyki

antybiotyki

Rzęsistnica

Rzęsistnica



Probówkę oznaczyć literą

Probówkę oznaczyć literą

T

T

i w ciągu 84h trzeba

i w ciągu 84h trzeba

materiał zbadać

materiał zbadać



Zeskrobiny posiewane na płynie Rick’a

Zeskrobiny posiewane na płynie Rick’a



Pożywka Rick’a

Pożywka Rick’a



1g agaru

1g agaru



10g peptonu

10g peptonu



30g NaCl

30g NaCl



10g maltoza

10g maltoza



1g chlorowodorek cysteiny

1g chlorowodorek cysteiny



Dopełnić do 1000g bulionu mięsnego

Dopełnić do 1000g bulionu mięsnego



Ampułkuje się w w probówkach: 4,5 i 5 ml

Ampułkuje się w w probówkach: 4,5 i 5 ml

Rzęsistnica

Rzęsistnica



Ampułki 5 ml

Ampułki 5 ml

- otworzyć i wlać do

- otworzyć i wlać do

probówki z antybiotykami – jest to płyn do

probówki z antybiotykami – jest to płyn do

zeskrobin

zeskrobin



Płyn

Płyn

zassać gruszką z rurką 45 cm,

zassać gruszką z rurką 45 cm,

średnicy 1 cm o grubych ścianach

średnicy 1 cm o grubych ścianach



Rurka

Rurka

do worka napletkowego i

do worka napletkowego i

zeskrobujemy na lewej ręce – kilkanaście

zeskrobujemy na lewej ręce – kilkanaście

razy – i płyn z gruszki wylewamy przez

razy – i płyn z gruszki wylewamy przez

rurkę do probówki z płynem do zeskrobin

rurkę do probówki z płynem do zeskrobin

czy z płynem fizjologicznym

czy z płynem fizjologicznym



Przesłanie

Przesłanie

do laboratorium

do laboratorium

Rzęsistnica

Rzęsistnica



W laboratorium

W laboratorium

: wirowanie – osad na

: wirowanie – osad na

szkiełka – pod mikroskop 400* -z

szkiełka – pod mikroskop 400* -z

kontrastem fazowym – i można wykryć

kontrastem fazowym – i można wykryć

pierwotniaki

pierwotniaki



Próba ujemna

Próba ujemna

nie świadczy o braku

nie świadczy o braku

choroby; w tym przypadku

choroby; w tym przypadku



do 4,5 ml pożywki Rick’a + 0,5 ml

do 4,5 ml pożywki Rick’a + 0,5 ml

surowicy końskiej + 0,1-0,8% kwasu

surowicy końskiej + 0,1-0,8% kwasu

askorbinowego

askorbinowego



Dodać kilka kropli osadu po odwirowaniu

Dodać kilka kropli osadu po odwirowaniu

materiału pobranego z worka

materiału pobranego z worka

Rzęsistnica

Rzęsistnica



Przez 1 tydzień co 12, a później co 6h

Przez 1 tydzień co 12, a później co 6h

kontrola wzrostu rzęsistków na pożywce

kontrola wzrostu rzęsistków na pożywce



Gdy po 2 tyg nie stwierdza się wzrostu

Gdy po 2 tyg nie stwierdza się wzrostu

pierwotniaka = buhaj jest wolny od

pierwotniaka = buhaj jest wolny od

rzęsistka

rzęsistka