Wykonanie: Mazurkiewicz Marek

Zajęcia 6 15-11-2010

Temat: Kinetyka reakcji enzymatycznych

1. cel:

Wyznaczanie stałej Michaelisa-Menten (Km), Vmax fosfatazy kwaśnej (EC 3.1.3.2 – fosfohydrolaza monoestrów ortofosforanowych kwaśne opimum)

2. zasada metody: Przeprowadzono reakcje fosfatazy kwaśnej z różnymi stężeniami p-nitrofenylofosforanu w charakterze substratu. Na podstawie zmierzonej absorbancji obliczono ilość uwolnionego w reakcji 4-nitrofenolu. Pozwoliło to po dalszych obliczeniach sporządzić wykres Lineweavera – Burka oraz wyznaczyć stałą Km i Vmax

3. obserwacje:

   
   1/Vmax = 0,637 Wartość została obliczona przy użyciu funkcji „odcięta” arkusza kalkulacyjnego i wyraża wartość y przy której oś y jest przecinana przez krzywą regresji liniowej

   stąd Vmax=1,57

   -1/Km=-1588,57 Wartość została obliczona jako miejsce zerowe regresji liniowej

   stąd Km=0,0006294976

4. wnioski:

   Reakcja fosfatazy kwaśnej z p-nitrofenylofosforanem charakteryzuje się stałą Michaelisa-Menten równą 6,294976x10^-4 oraz szybkością maksymalną 1,57.