Daniel Karczewski
Dariusz Kosiorek
Kacper Łuczyński
Kierunek: Ochrona środowiska
Wtorek 10:15 - 14:00
LABORATORIUM Z TECHNOLOGII REMEDIACJI
Ćwiczenie nr 1: „Skrining drobnoustrojów o uzdolnieniach enzymatycznych”
Wstęp teoretyczny.
Skrining jest to zbiór zabiegów mających na celu wyizolowanie i namnożenie interesujących nas drobnoustrojów pod kątem rodzaju metabolizmu, a dokładniej zdolności danego szczepu do wytwarzania określonego enzymu. Dzięki temu możliwa jest utylizacja różnorodnych odpadów przemysłowych i komunalnych z wykorzystaniem mikroorganizmów o specjalnych właściwościach degradacyjnych. Źródłem poszukiwanych mikroorganizmów jest środowisko naturalne ze szczególnym uwzględnieniem gleby, a także powietrze, woda, owoce czy nawet ścieki przemysłowe. W metodach tradycyjnych stosuje się wysiew materiału na płytki agarowe po czym prowadzi się selekcję mającą na celu znalezienie bakterii o pożądanych właściwościach. Metoda ta ma jednak dość istotną wadę - nieraz można przeoczyć mniej liczne lecz cenne drobnoustroje, aby temu zapobiec stosuje się pasaż płynny dzięki czemu wszystkie bakterie mają szansę na wzrost. Dla ułatwienia stosuje się także specjalne testy zawierające odpowiednie wskaźniki, które w przypadku wytwarzania przez drobnoustrój danego enzymu ulegają odbarwieniu lub zabarwieniu. Im większa strefa wokół kolonii tym jest ona cenniejsza.
Wykonanie ćwiczenia .
2.1 Wysiew mikroorganizmów
Z wcześniej przygotowanej zawiesiny otrzymanej poprzez przeniesienie 25 g gleby do 250 ml jałowej soli fizjologicznej oraz wytrząsanie przez około 15 minut wykonaliśmy następujące rozcieńczenia: 10-3, 10-4, 10-5, 10-6 i 10-7.
Z rozcieńczenia 10-7 wylaliśmy po 1 ml płynu na płytki z podłożem bulionowym i Sabourand. Następnie płytki inkubowaliśmy w temperaturze 28-30oC przez okres 7 dni.
Obserwacje makroskopowe.
Proteolityczna aktywność bakterii glebowych.
Na płytce z bulionem zaobserwowaliśmy rozjaśnienia podłoża wywołane proteolizą, co świadczy o obecności bakterii Bacillus subtilis obecnych w badanej próbce gleby. Bakterie wyrosły w postaci dwóch płaskich, lekko mętnych kolonii, strefa przejaśnienia wynosiła ok. 1 cm. Wysiew na skos agarowy dał wzrost według linii wysiewu, kolonie miały kremowy, błyszczący odcień.
Amylolityczna aktywność bakterii glebowych.
Bakterie wyrosłe na płytce (Bacillus licheniformis) rozłożyły -amylazę w wyniku czego powstały słabo widoczne strefy przejaśnienia, w celu ich lepszego zaobserwowania zalaliśmy je płynem Lugola w wyniku czego po kilku minutach można było zaobserwować wyraźne strefy przejaśnienia na granatowym tle. Bakterie rozkładające wyrosły w postaci dwóch płaskich, lekko mętnych kolonii, strefa przejaśnienia wynosiła ok. 1 cm. Wysiew na skos agarowy dał wzrost według linii wysiewu, kolonie miały kremowy, matowy odcień.
Lipolityczna aktywność bakterii glebowych
Wyrosła grzybnia, którą stanowił najprawdopodobniej grzyb pleśniowy z rodzaju Mucor, miała postać białej waty z dużą ilością małych czarnych zarodników. Wysiew na skos agarowy dał wzrost w całej objętości probówki, grzybnia miała biały kolor, występowała w postaci puchatej waty .
Wnioski.
Na podstawie przeprowadzonych doświadczeń mieliśmy okazję poznać metody pozyskiwania i wyodrębniania cennych mikroorganizmów wykazujących różnorodne właściwości metaboliczne przydatne w procesach biodegradacji z wykorzystaniem organizmów żywych.
Przeprowadzone obserwacje pozwoliły stwierdzić, że w badanej przez nas próbce gleby bakteriami wytwarzającymi proteinazy były Bacillus subtilis, enzymy amylolityczne - Bacillus licheniformis, natomiast lipolityczne - grzyby pleśniowe z rodzaju Mucor.