♦Stężenie obliczamy z proporcji: 
, stężenie początkowe TTC wynosiło 2%
Wydział: IS2
Kierunek: Biotechnologia
Wyznaczanie optymalnego stężenia chlorku 2,3,4-trójfenylotetrazolowego podczas oznaczania aktywności dehydrogenaz za pomocą testu TTC
Wykonały:
Dorota Olszewska
Bania Dominika
Czaja Sabina
Wykonanie, obliczenia i wnioski:
Wyznaczanie optymalnego stężenia chlorku 2,3,4-trójfenylotetrazolowego podczas oznaczania aktywności dehydrogenaz za pomocą testu TTC.
Do oznaczonych probówek wirowych wprowadziłyśmy następujące objętość [ml] reagentów:
Reagenty |
Probówki (każda próbę robimy podwójnie) |
|||||||
|
1 |
2 |
3 |
4 |
5 |
6 |
7 |
8 |
Roztwór Na2SO3 |
1 |
1 |
1 |
1 |
1 |
1 |
1 |
1 |
H20 |
0,9 |
0,8 |
0,7 |
0,6 |
0,5 |
0,3 |
0,2 |
- |
Roztwór TTC |
0,1 |
0,2 |
0,3 |
0,4 |
0,5 |
0,7 |
0,8 |
1 |
Osad czynny |
8 |
8 |
8 |
8 |
8 |
8 |
8 |
8 |
♦Po wprowadzeniu reagentów zawartość probówek wymieszałyśmy, a następnie nasze probówki odłożyłyśmy do inkubacji w ciemności w temperaturze pokojowej na 30 min. Po zakończeniu inkubacji próbki odwirowałyśmy (probówki wirowały się do 3000 obrotów na minutę), następnie odrzuciłyśmy supernatant, a następnie dla przerwania reakcji enzymatycznych i ekstrakcji TF wprowadziłyśmy do próbówek po 8 ml alkoholu metylowego w takiej samej kolejności i zachowując podobne tempo jak przy wprowadzaniu roztworu TTC. Próbki energicznie wytrząsnęłyśmy i ponownie odstawiłyśmy do wirowania. Na samym końcu oznaczyłyśmy ekstynkcję cieczy nadosadowej przy długości fali 485 nm.
probówki |
ekstynkcja |
|
|
|
|
średnia ekstynkcja |
stężenie TTC w próbce [%] |
1 |
0,393 |
0,572 |
0,02% |
|
0,752 |
|
|
2 |
0,543 |
0,674 |
0,04% |
|
0,806 |
|
|
3 |
0,979 |
0,974
|
0,06% |
|
0,969 |
|
|
4 |
0,635 |
0,841 |
0,08% |
|
1,047 |
|
|
5 |
1,042 |
1,045
|
0,1% |
|
1,048 |
|
|
6 |
1,054 |
1,042
|
0,14% |
|
1,030 |
|
|
7 |
1,024 |
0,845
|
0,16% |
|
0,666 |
|
|
8 |
0,840 |
0,876 |
0,2% |
|
0,912 |
|
|
♦Stężenie obliczamy z proporcji:
, stężenie początkowe TTC wynosiło 2%
♦Maksymalna wartość na wykresie jest równa 10% stężeniu TTC co oznacza, że optymalne stężenie TTC, które będzie stosowane we właściwych oznaczeniach aktywności dehydrogenaz mikroorganizmów wynosi 10%.
♦Na wykresie możemy zauważyć, że wraz ze wzrostem stężenia TTC ekstynkcja początkowo rośnie (do stężenia 0,06), następnie spada.Lecz od 0,08 ponownie wzrasta by przy stężeniu 0,1 umiarkować się. Jednakże już przy stężeniu 0,14 znów się obniża co jest prawdopodbnie spowodowane niedokładnym pomiarem lub wykonaniem ćwiczenia.
Na podstawie wyników naszych pomiarów oraz wykresu możemy stwierdzić, że optymalne stężenie TTC wynosi ok. 0,01 - 0,14, ponieważ przy tych dwóch stężeniach możemy zaobserwować największą ekstynkcję.
1