terapia genowa, W-2 Terapia genowa.Interferencja RNA


Wykład 2 - INTERFERENCJA RNA. TERAPIA GENOWA

DNA----> mRNA-----> białko

„Caenthebidils elegans” ---> eksperymenty na nicieniu

jak wprowadzimy jednoniciowy DNA --> kompleks mRNA => tzw. strategia antysensu --> łączą się i już nie ma translacji

Wprowadzenie przypadkowe sekwencji identycznej do mRNA --> a okazało się że jest taki sam efekt (Fira Mello - 1998)

--> to może hamowanie przez dwuniciowy DNA?

gen kodujący UNG - 22 (białko mięśniowe)

wprowadzenie „ antysens” - nie

wprowadzenie „sens” - nie

mRNA jest wtedy degradowane

0x08 graphic

„ interferencja DNA”

Po wprowadzeniu dwuniciowego RNA ---> rozpoznane prez DICER(kompleks białkowy) i tnie na ---> siRNA

siRNAs ---> +RISC => kompleks i odchodzi jedna nić---> kompleks znajduje kompleks elementarny ----> i degradacja mRNA

2 kroki:

dwuniciowe RNA + DICER----kinaza---> RdRPolimeraza(RNAzależna od polimerazy polimeraza;)

Wykorzystanie:

- micro RNAs - endogenne

- siRNA—j.w. - ale egzogennie

TERAPIA GENOWA

Problem z nowotworami --> przerzuty (nawet jak mikroprzerzuty) a RTG i chemioterapia różnie skuteczne

Można próbować--- ale w terapii chorób jednogenowych (np. mukowiscydoza)

Chory gen => choroba

Wprowadzenie prawidłowego genu --> wektory wirusowe lub niewirusowe

Wprowadzenie prawidłowego genu ---> zmodyfikowane wirusem - bardziej efektywne i swoiste

Wprowadzenie niewirusowe - mniej swoiste, ale bardziej bezpieczne(nie powoduje reakcji zapalnej):

Retrowirusy

Genom retrowirusa:

Genom wektora:

Retrowirusy - bardzo opłacalne przy wprowadzaniu obcych genów:

Pseudotypowanie

Lentiwirusy:

Adenowirusy:

Adenowirusy - genom:

Brak integracji z genomem gospodarza

Herpes wirus:

Liposomy:

- mniej wydajny transfer niż retrowirusy

- nie wywołują immunizacji

Biobalistyka:

Elektropolacja:

Kationowe polimery

Mikroiniekcje

Próby kliniczne:

Rodzinna hipercholesterolemia:

Mukowiscydoza:

SCID - severe combined immunodeficiency syndrome

Hemofilia

Nowotwory

Melanoma

Terapia nowotworów OUN - retrowirus z deaminazą cytozynową (ECCD)

Konwersja obojetej 5fluorozytozyny do 5fluorouracylu

Antisense approach

I generacja - Wprowadzenie genu kodującego sekwencje antysensowną onkogenu(dobrze działa w wirusach HPV!)

II generacja - Complementary RNA sequences such as antisense RNAs and ribozymes to regulate the expression of specific genes. Despite the simplicity of this approach, this technique usually results in only partial suppression of gene expression and, in some instants, even fails to regulate the gene of interest

Strategia antysensu

HLA -B7 - gene therapy

- modyfikacja układu immunologicznego

- wprowadzenie genTNF, rIL2

- TIL -Tumor Infiltating Lymphocytes -> limfocyty swoiście naciekające nowotwory --> wyizolowanie TILów, pobrać, zmodyfikować,żeby był np.w czerniaku skuteczny(wprowadzenie genTNF, lub rIL2),

wprowadzamy cytokiny prozapalne - bo ma działać

- TNFα --> działa na naczynia (a guzy naczyniowe), receptor a potem Il podanie ogólne

- Immunoterapia w Poznaniu(czerniaki) -> sIL - 6R(receptor) i Il - 6, ale odpowiedź kliniczna powyżej 25%

Cancer Center in Poznań, Poland a GMTVhas been tested in malignant melanoma patients. For the last 6 years more than 220 patients were enrolled into study of GMTV consisting melanoma cells modified with genes encoding IL6 and its agonistic solube recepetro (sIL6R). More than 25% of objective clinical responses and significant life extension were observed. The encouraging results formed a basis for design of a phase III prospective, randomized clinical study

Intratumoral or peritumoral injection of vectors expressing IFN gamma

Próby kliniczne innych nowotworów

4



Wyszukiwarka