ZDROWOTNOŚĆ
Certyfikat zdrowotności sadzonek- obejmuje jakość produktu mikrorozmnażania oraz jakość procesu produkcyjnego, ktory podlega standardom międzynarodowym i potwierdzaja go certyfikaty międzynarodowy HACCP, ISO-9001. Stwierdzaja zgodność materialu z genotypem, to ze rośliny SA w prawidłowej kondycji fizjologicznej oraz czy maja pełna zdolność rozwojowa.
DROBNOUSTROJE EPIFITYCZNE KOLONIZUJACE POWIERZCHNIĘ ORGANOW ROSLINNYCH
MIKOPLAZMY
Rodzaj: Spiroplasma
Entomoplasma
Mesoplasma
Cechy charakterystyczne:
Brak sciany kom
Odporność na ryfampicynę
Patogenny występujące epifityczne na roślinie ( ok. 46 gatunkow)
organizmy niepatogenne
BAKTERIE
Bakterie epifityczne mogą występować pojedynczo, w niewielkich jednowarstwowych skupiskach lub agregatach, w pofałdowaniach epidermy, w hydatodach i zbiorniczkach olejkow eterycznych.
Silna i liczebna populacja bakterii saprofitycznych ma znaczący wpływ na wzajemne interakcje drobnoustrojow (ogranicza rozwoj grzybow patogenicznych)
GRZYBY
Rdzaj: Alternaria
Botrytis
Peronospora
Phoma
Phytophtora
Colletotrichium
Cladosporium
Strzępki, zarodniki konidialne, ciala owocujące grzybow zajmuja wolne miejsca miedzy koloniami bakterii na rozwijającym się liściu tworząc populacje o mozaikowej strukturze. Do powierzchni liscia strzępki przytwierdzaja się licznymu haustoriami co przysparza trudności podczas dezynfekcji eksplantatow.
Intensywne zasiedlanie powierzchni określonego organu przez charakterystyczny dla niego zespol drobnoustrojow stwarza niebezpieczeństwo przemieszczenia czesci mikroflory epifitycznej do wnętrza tkanek podczas izolacji eksplantatow lub przygotowan do ich dezynfekcji.
ENDOFITY W TKANKACH ROSLINNYCH
Endofity to grzyby i bakterie, które większość swojego cyklu życiowego przezywaja bezobjawowo wewnątrz tkanek roślinnych. Zwizki endofityczne sa uwazane za wyspecjalizowany rodzaj symbiozy.
Endofity obligatoryjne przestrzeni międzykomórkowych i endofity komorkowe (zasiedlające naczynia ksylenu, korek) i kore SA ukryte podczas dezynfekcji, natomiast endofity fakultatywne zasiedlajace miejsca zranien maja mniejsze szanse na jej przetrwanie.
Do bakterii endofitycznych naleza:
Wiążące azot Acetobacter diazoatrophicus Oraz Herbaspirillum rubrisulbalbicans kolonizujace metaksylen I przestwory w lisciach Sorghum, Oryzae I Zea.
Grzyby specyficzne dla określonego gatunku gospodarza kolonizuja go systemicznie wydzielając toksyczne metabolity (lolitrem B, ergowalinę) zabezpieczające rośliny przed żerowaniem szkodnikow (owady, nicienie).
Modelowym przykładem takich powiązań SA grzyby :
Acremonium typhinum
A. chrysogenum
Aspergillus fumigatus czy Beauveria bassiana zasiedlające gatunki traw z rodzaju Poa, Fesruca i Lolium
WYKRYWANIE I ELIMINOWANIE DROBNOUSTROJOW BEZOBJAWOWO ZASIEDLAJACYCH EKSPLANTAT
Bakterie powoli rosnące, trudne do wykrycia, bytujace bezobjawowo w eksplantatach stanowia największy problem w trakcie mikrorozmnażania. W warunkach In vitro nie rozwijaja się one na pożywce ze względu na duze stężenie cukrowcow oraz makro i mikro elementow, natomiast latentnie rezyduja w tkankach eksplantatow opóźniając ich wzrost i regeneracje.
Do najgroźniejszych bakterii latentnych naleza sprawcy chorob roślin uprawnych, powoli rozmnażające się w tkankach i ujawniające się dopiero pod koniec kultury, podczas ukorzeniania lub aklimatyzacji roślin.
Tkanki eksplantatow bezobjawowo zasiedlanych przez A. tumefaciens, E. carotophora oraz X. cambestris mogą zachowac patogeniczne bakterie przez caly okres namazania.
Bakterie nie dajace objawow w warunkach In vitro naleza do rodzaju Lactobacillus, Staphylococcus, Micrococcus, Pseudomonas, Enterobacter, Serratia i Methylobacterium.
TERAPIA ANTYBIOTYKOWA IN VITRO
Warunkiem bezpiecznego stosowania antybiotykow jest znajomość mechanizmu dzialania konkretnego preparatu w stosunku do określonego gatunku bakterii oraz wybor antybiotyku oparty na wyniku antybiogramow określających wrażliwość bakterii.
Właściwy efekt leczniczy gwarantuje antybiotyk:
Stabilny w pożywce
dobrej rozpuszczalności
Nie ulegajacy inaktywacje pod wpływem swiatla i temperatury
Niewrażliwy na ph
Nieindukujacy idpornosci
Bez działań ubocznych
Nietoksyczny dla tkanek roślinnych
Kompatybilny ze składnikami pożywki
Najbardziej przydatne do kultur tkankowych sa:
Polimyksyna, gentamycyna, ryfampicyna, siarczan streptomycyny oraz timentin, które maja waskie spektrum dzialania.
W przypadku zasiedlenia eksplantatu dwoma lub trzema gatunkami drobnoustrojow (np. bakteriami G plus, minus i grzybami) najkorzystniejsze jest stosowanie kombinacji kilku antybiotykow, zwłaszcza kiedy daja one efekt synergistyczny, który umozliwia zmniejszenie dawki każdego antybiotyku w porównaniu z dawka stosowana indywidualnie.
Antybiotyk niszczacy bakterie w dawce 50 mikro gram na cm sześcienny, a nie jest szkodliwy dla eksplantatu nawet w dawce 100 mikrogram na cm sześcienny może być bezpiecznie stosowany w kulturach tkanek
PRODUKCJA METABOLITOW WTORNYCH W KULTURACH IN VITRO
Hodowanie kom roślinnych w bioreaktorach o pojemności 20 000 l: technika ta polega na związaniu i przez to unieruchomieniu kom roślinnych na podłożach polimerowych w sposób, który pozwala zachowac ich żywotność. Wytwarzane przez kom substancje daje się dosc latwo wydzielic, gdyz gromadza się w wodniczkach a nie protoplazmie komorki. (Japończycy, 1976r)
Produkcja wtorych metabolitow roślinnych, jeśli może być prowadzona w hodowli komorek jest:
Niezalezna od pory roku i warunkow klimatycznych
Znacznie wydajniejsza od otrzymywania tych subst z calych roślin
Do waznych wtornych metabolitow naleza:
Winblastyna (stosowana w leczeniu białaczki)
Digitalis (stosowany w leczeniu serca)
Chinina (leczenie malarii i do produkcji subst zapachowych)
Kodeina (uzywana jako subst znieczulajaca)
Olejek jaśminowy (subst zapachowa)
Substancje pochodzenia roślinnego znajduja zastosowanie w:
Przemysle farmaceutycznym (alkaloidy, subst przeciwzapalne, przeciwnowotworowe, bakteriostatyki, leki stosowane w nefrologii i leki nasercowe, slodziki nieweglowodanowe, enzymy, subst hemolityczne, inhibitory proteaz, subst znieczulające, sterole, witaminy)
Przemysle rolno- spożywczym (aminokwasy, subst smakowe i aromatyczne, barwniki, slodziki i emulgatory, enzymy, hormony, regulatory wzrostu, olejki eteryczne, insektycydy.)
W przemysle chemicznym (kway organiczne, pochodne kwasu benzoesowego, fenole, chinony, sterole, terpenoidy)