UNIWERSYTET PRZYRODNICZY

Wydział Medycyny Weterynaryjnej

KATEDRA BIOCHEMII I FIZJOLOGII ZWIERZĄT

Zakład Biochemii

20-033 Lublin, ul. Akademicka 12

tel. [phone]

09-10-04 www.biochfiz.up.lublin.pl Wersja 1.04.10.09

- 1 z 2 -

Transferazy -transaminazy

aminotransferaza alaninowa i asparaginianowa

Zadanie 1

Celem zadania jest badanie aktywno

ś

ci AST i ALT.

Zasada oznaczenia

Metoda oznaczania aktywno

ś

ci AST i ALT oparta jest na ró

ż

nicy

absorbancji 2,4-dwunitrofenylohydrazonów kwasu alfa oksoglutarowego i
pirogronowego w

ś

rodowisku zasadowym. W wyniku reakcji katalizowanej

przez

AST

powstaje

kwas

szczawiooctowy,

który

ulega

samoistnej

dekarboksylacji i tworzy si

ę

z 2,4-dwunitrofenylohydrazyn

ą

(DNFH) tak

ż

e

hydrazon kwasu pirogronowego.

Miar

ą

aktywno

ś

ci aminotransferaz jest zatem przyrost st

ęż

enia

kwasu pirogronowego w probówkach inkubowanych z surowic

ą

w porównaniu z

probówkami kontrolnymi.

Reakcje katalizowane przez aminotransferazy:

ALT

alanina : 2-oksoglutaran

⇒

pirogronian : glutaminian

AST

aparaginian : 2-oksoglutaran

⇒

szczawiooctan : glutaminian

Wykonanie

Do 4 probówek: 1 (AST kontr.), 2 (AST bad.), 3 (ALT kontr.) i 4

(ALT bad.) dodawa

ć

wymienione w poni

ż

ej zamieszczonej tabeli odczynniki

i surowic

ę

oraz wykonywa

ć

opisanie w niej czynno

ś

ci.

AST

ALT

Odczynniki

Kontrola

Badana

Kontrola

Badana

Substrat
Roztwór NaCl 0,9%

0,5
0,1

0,5

-

0,5
0,1

0,5

-

Inkubacja w ła

ź

ni

wodnej w temp. 37°C

5 min.

5 min.

Surowica ko

ń

ska

-

0,1

-

0,1

Inkubacja

30 min. w ła

ź

ni wodnej w

temp. 37°C

60 min. w ła

ź

ni wodnej w

temp. 3°C

DNFH

0,5

0,5

0,5

0,5

pozostawi

ć

w temp.

pokojowej na 20 min.

pozostawi

ć

w temp.

pokojowej na 20 min.

0,4 mol/dm

3

NaOH

5

5

5

5

UNIWERSYTET PRZYRODNICZY

Wydział Medycyny Weterynaryjnej

KATEDRA BIOCHEMII I FIZJOLOGII ZWIERZĄT

Zakład Biochemii

20-033 Lublin, ul. Akademicka 12

tel. [phone]

09-10-04 www.biochfiz.up.lublin.pl Wersja 1.04.10.09

- 2 z 2 -

Po upływie 10 min. zmierzy

ć

warto

ść

absorbancji prób badanych

wobec odpowiednich prób kontrolnych przy długo

ś

ci fali 505 nm,

nast

ę

pnie odczyta

ć

liczb

ę

jednostek aktywno

ś

ci z krzywych wzorcowych