UNIWERSYTET PRZYRODNICZY

Wydział Medycyny Weterynaryjnej KATEDRA BIOCHEMII I FIZJOLOGII ZWIERZĄT

Zakład Biochemii

20-033 Lublin, ul. Akademicka 12

tel. [phone]

Transferazy -transaminazy

aminotransferaza alaninowa i asparaginianowa

Zadanie 1

Celem zadania jest badanie aktywności AST i ALT.

Zasada oznaczenia

Metoda oznaczania aktywności AST i ALT oparta jest na różnicy absorbancji 2,4-dwunitrofenylohydrazonów kwasu alfa oksoglutarowego i pirogronowego w środowisku zasadowym. W wyniku reakcji katalizowanej przez

AST

powstaje

kwas

szczawiooctowy,

który

ulega

samoistnej

dekarboksylacji i tworzy się z 2,4-dwunitrofenylohydrazyną (DNFH) także hydrazon kwasu pirogronowego.

Miarą aktywności aminotransferaz jest zatem przyrost stężenia kwasu pirogronowego w probówkach inkubowanych z surowicą w porównaniu z probówkami kontrolnymi.

Reakcje katalizowane przez aminotransferazy: ALT

alanina : 2-oksoglutaran ⇒ pirogronian : glutaminian AST

aparaginian : 2-oksoglutaran ⇒ szczawiooctan : glutaminian Wykonanie

Do 4 probówek: 1 (AST kontr.), 2 (AST bad.), 3 (ALT kontr.) i 4

(ALT bad.) dodawać wymienione w poniżej zamieszczonej tabeli odczynniki i surowicę oraz wykonywać opisanie w niej czynności.

AST

ALT

Odczynniki

Kontrola

Badana

Kontrola

Badana

Substrat

0,5

0,5

0,5

0,5

Roztwór NaCl 0,9%

0,1

-

0,1

-

Inkubacja w łaźni

5 min.

5 min.

wodnej w temp. 37°C

Surowica końska

-

0,1

-

0,1

30 min. w łaźni wodnej w 60 min. w łaźni wodnej w Inkubacja

temp. 37°C

temp. 3°C

DNFH

0,5

0,5

0,5

0,5

pozostawić w temp.

pozostawić w temp.

pokojowej na 20 min.

pokojowej na 20 min.

0,4 mol/dm3 NaOH

5

5

5

5

09-10-04 www.biochfiz.up.lublin.pl Wersja 1.04.10.09

- 1 z 2 -

UNIWERSYTET PRZYRODNICZY

Wydział Medycyny Weterynaryjnej KATEDRA BIOCHEMII I FIZJOLOGII ZWIERZĄT

Zakład Biochemii

20-033 Lublin, ul. Akademicka 12

tel. [phone]

Po upływie 10 min. zmierzyć wartość absorbancji prób badanych wobec odpowiednich prób kontrolnych przy długości fali 505 nm, następnie odczytać liczbę jednostek aktywności z krzywych wzorcowych 09-10-04 www.biochfiz.up.lublin.pl Wersja 1.04.10.09

- 2 z 2 -