UNIWERSYTET PRZYRODNICZY
Wydział Medycyny Weterynaryjnej KATEDRA BIOCHEMII I FIZJOLOGII ZWIERZĄT
Zakład Biochemii
20-033 Lublin, ul. Akademicka 12
tel. 081 445 69 73
Transferazy -transaminazy
aminotransferaza alaninowa i asparaginianowa
Zadanie 1
Celem zadania jest badanie aktywności AST i ALT.
Zasada oznaczenia
Metoda oznaczania aktywności AST i ALT oparta jest na róŜnicy absorbancji 2,4-dwunitrofenylohydrazonów kwasu alfa oksoglutarowego i pirogronowego w środowisku zasadowym. W wyniku reakcji katalizowanej przez
AST
powstaje
kwas
szczawiooctowy,
który
ulega
samoistnej
dekarboksylacji i tworzy się z 2,4-dwunitrofenylohydrazyną (DNFH) takŜe hydrazon kwasu pirogronowego.
Miarą aktywności aminotransferaz jest zatem przyrost stęŜenia kwasu pirogronowego w probówkach inkubowanych z surowicą w porównaniu z probówkami kontrolnymi.
Reakcje katalizowane przez aminotransferazy: ALT
alanina : 2-oksoglutaran ⇒ pirogronian : glutaminian AST
aparaginian : 2-oksoglutaran ⇒ szczawiooctan : glutaminian Wykonanie
Do 4 probówek: 1 (AST kontr.), 2 (AST bad.), 3 (ALT kontr.) i 4
(ALT bad.) dodawać wymienione w poniŜej zamieszczonej tabeli odczynniki i surowicę oraz wykonywać opisanie w niej czynności.
AST
ALT
Odczynniki
Kontrola
Badana
Kontrola
Badana
Substrat
0,5
0,5
0,5
0,5
Roztwór NaCl 0,9%
0,1
-
0,1
-
Inkubacja w łaźni
5 min.
5 min.
wodnej w temp. 37°C
Surowica końska
-
0,1
-
0,1
30 min. w łaźni wodnej w 60 min. w łaźni wodnej w Inkubacja
temp. 37°C
temp. 3°C
DNFH
0,5
0,5
0,5
0,5
pozostawić w temp.
pozostawić w temp.
pokojowej na 20 min.
pokojowej na 20 min.
0,4 mol/dm3 NaOH
5
5
5
5
09-10-04 www.biochfiz.up.lublin.pl Wersja 1.04.10.09
- 1 z 2 -
UNIWERSYTET PRZYRODNICZY
Wydział Medycyny Weterynaryjnej KATEDRA BIOCHEMII I FIZJOLOGII ZWIERZĄT
Zakład Biochemii
20-033 Lublin, ul. Akademicka 12
tel. 081 445 69 73
Po upływie 10 min. zmierzyć wartość absorbancji prób badanych wobec odpowiednich prób kontrolnych przy długości fali 505 nm, następnie odczytać liczbę jednostek aktywności z krzywych wzorcowych 09-10-04 www.biochfiz.up.lublin.pl Wersja 1.04.10.09
- 2 z 2 -