PODSTAWY BIOTECHNOLOGII

NADPRODUKCJA KWASU CYTRYNOWEGO W KULTURACH Aspergillus niger

(2 h)

1. Przygotowanie podłoża

a) Podłoże melasowe (hodowla powierzchniowa)

Przygotować 200 cm3 20% roztworu melasy z dodatkiem 0,5 cm3 roztworu K4Fe(CN)6 , 0,1 cm3 kwasu fosforowego oraz 1% węgla aktywowanego. Pożywkę melasową podzielić na dwie porcje po 100cm3. Jedną z nich zakwasić do pH 3,0 za pomocą kwasu siarkowego i przelać do kolby Erlenmayera. Niezakwaszoną część (100 cm3) podłoża (o pH ok. 7,0) również przenieść do kolby Erlenmayera .

Otrzymujemy w ten sposób 2 próby fermentacyjne zawierające po 100 cm3 20%

brzeczki melasowej. Kolby zakorkować i wyjałowić.

b) Podłoże syntetyczne A (hodowla powierzchniowa)

Przygotować 200 cm3 pożywki syntetycznej o składzie:

• Sacharoza (20%)

• NH4NO3 (0,3%)

• KH2PO4 (0,15%)

• MgSO4 (0,1%)

w wodzie destylowanej. Rozlać po 100 cm3 do dwóch kolb stożkowych, jedną kolbę z podłożem zakwasić do pH 2,5.

Kolby zakorkować i wyjałowić.

c) Podłoże syntetyczne B (hodowla wgłębna)

Przygotować 200 cm3 pożywki syntetycznej B o składzie:

•

20% roztwór syropu maltozowego z dodatkiem:

•

(NH4)2SO4 (0,2%)

•

MgSO4 (0,02%)

•

KH2PO4 (0,02%)

Rozlać po 100 cm3 do dwóch kolb stożkowych, jedną kolbę z podłożem zakwasić do pH 2,5.

Kolby zakorkować i wyjałowić.

Wymienione podłoża po ostudzeniu zaszczepić konidiami kwasotwórczego szczepu

Aspergillus niger w ilości 1 cm3 gęstej zawiesiny na 100 cm3 podłoża. Hodowle z punktów a i b inkubować w cieplarce, z punktu c w wytrząsarce w temp. 30 0C przez 7 dni.

2. Po okresie inkubacji ocenić wygląd makro- i mikroskopowy grzybni w poszczególnych próbach.

3. Oznaczenie kwasowości ogólnej.

Kwasowość ogólna jest to suma wszystkich kwasów organicznych, jakie

tworzą się podczas fermentacji cytrynowej, wśród których najwięcej powstaje kwasu cytrynowego (ponad 90%), reszta to głównie kwas szczawiowy i

glukonowy.

• W celu oznaczenia kwasowości ogólnej należy pobrać 2 cm3 płynu pofermentacyjnego i przenieść do kolby stożkowej na 200 cm3.

• Dodać 20 cm3 wody destylowanej i miareczkować 0,1 N NaOH wobec fenoloftaleiny do pierwszej trwałej zmiany zabarwienia.

• Wynik podać w cm3 0,1 N NaOH /100 cm3 pożywki. Aktywna kultura powinna wykazywać kwasowość ogólną odpowiadającą 30 – 40 cm3 0,1 N NaOH na 100 cm3

roztworu

Obserwacje, wyniki i wnioski należy przedstawić w formie sprawozdania

Literatura:

1. Gołębiowska J., Kaszubiak H., Pędziwilk Z., Kaczmarek W.: Ćwiczenia z mikrobiologii, Poznań 2001.

2. Ilczuk Z.: Ćwiczenia z mikrobiologii przemysłowej, UMCS, Lublin, 1997.

3. Sobczak E.: Teoria i ćwiczenia z mikrobiologii ogólnej i technicznej, skrypt SGGW, Warszawa, 1993.

4. Szostak – Kotowa J.: Ćwiczenia z mikrobiologii ogólnej i przemysłowej, Wyd.

Akademii Ekonomicznej w Krakowie, Kraków 2002.